源自鲎属的重组蛋白及编码该重组蛋白的DNA制造技术

本发明专利技术提供一种与美洲鲎的凝固机制有关的全部的全长重组蛋白、编码这些重组蛋白的cDNA、这些重组蛋白的用途。含有序列号2或4所示的氨基酸序列的重组蛋白；含有序列号6、8、10、或12所示的氨基酸序列的重组蛋白；含有序列号14、16、18、20、或22所示的氨基酸序列的重组蛋白；这些重组蛋白的变体、编码这些重组蛋白的cDNA、这些重组蛋白的应用。

Recombinant Protein from Tachypleus and DNA Encoding the Recombinant Protein

The invention provides a full-length recombinant protein related to the coagulation mechanism of American horseshoe crab, a cDNA encoding these recombinant proteins, and the use of these recombinant proteins. Recombinant proteins containing amino acid sequences as shown in sequence 2 or 4; recombinant proteins containing amino acid sequences as shown in sequence 6, 8, 10, or 12; recombinant proteins containing amino acid sequences as shown in sequence 14, 16, 18, 20, or 22; variants of these recombinant proteins, the cDNAs encoding these recombinant proteins, and the application of these recombinant proteins.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】源自鲎属的重组蛋白及编码该重组蛋白的DNA
本专利技术涉及源自鲎属的重组蛋白、编码该重组蛋白的DNA及这些的利用方法。
技术介绍
鲎被称为“活化石”，在地球上仅存在2属4种。作为属，仅有仅栖息于北美大陆东海岸的“鲎(Limulus)属”、和仅栖息于亚洲东南海域的“鲎(Tachypleus)属”。一个生物群在彼此远离的地域分开分布的现象被称为不连续分布，如鲎那样被分在地球上的2个地域的生物非常珍贵。属于鲎(Limulus)属的生物仅有美洲鲎(Limuluspolyphemus)1种，属于鲎(Tachypleus)属的生物仅有中国鲎(Tachypleustridentatus)、巨鲎(Tachypleusgigas)、东南亚鲎(Tachypleusrotundicauda。也被称为圆尾鲎(Carcinoscorpiusrotundicauda))这3种。已知存在于该生物的血中的变形细胞(amoebocyte)的提取物(阿米巴细胞溶解产物。Amoebocytelysate)在与内毒素接触时会凝固。利用该性质，阿米巴细胞溶解产物作为以高灵敏度检测内毒素的试剂被广泛用于医药品的品质管理等。该试剂被称为“Lysate试剂”。另外，由于内毒素而产生凝固的性质最初在美洲鲎中被发现，因此，该试剂有时被称为“鲎试剂”或“LAL(Limulusamoebocytelysate)试剂”。即使使用有鲎(Tachypleus)属的阿米巴细胞溶解产物的试剂，也习惯性称为“鲎试剂”或“LAL试剂”。目前，日欧美的医药品厂商所使用的Lysate试剂(鲎试剂、LAL试剂)以美洲鲎为原料。也报道有因担心灭绝而严格地限制美洲鲎捕获数，但个体数依然在减少。为了保护鲎，有利用重组技术人工地制造阿米巴细胞溶解产物中的蛋白质、制作试剂的思想(专利文献1～8)。而且，实际上，利用重组蛋白的PyroGene(商标)(Lonza)、EndoZyme(商标)(Hyglos)、PyroSmart(商标)(生物化学工业)这样的制品已经上市。但是，这些均使用了源自鲎(Tachypleus)属生物的重组蛋白，没有报道使用源自作为Lysate试剂广泛普及的美洲鲎的重组蛋白的试剂。其理由是因为，美洲鲎中与由于内毒素而产生凝固的机制有关的蛋白质及其基因在结构上和功能上均没有完全得到鉴定。在鲎(Tachypleus)属中，例如关于与凝固机制有关的蛋白质之一的C因子，1991年报道了源自中国鲎的完整的基因序列及氨基酸序列(非专利文献1)、1995年报道了源自东南亚鲎(圆尾鲎)的完整的基因序列及氨基酸序列(非专利文献2)。但是，在美洲鲎中，即使距离所述鲎(Tachypleus)属的报道已经有20年以上，这些蛋白质及基因的结构及功能这两方面的完整的鉴定上也没有获得成功。这是因为，起因于鲎的属或种的差异导致的生物体分子的各种差异或多样性等，用一般的方法不能进行这些蛋白质及基因的全长序列结构的准确的确定、表达、及功能阐明。目前，作为使用有新一代测序仪的无脊椎动物基因组计划的一环，正在进行美洲鲎的基因的网络的分析(http://genome.wustl.edu/genomes/detail/limulus-polyphemus/)，但没有实现与美洲鲎的凝固机制有关的全部的蛋白质及基因的全长序列的阐明。该事实也证明美洲鲎中的这些蛋白质及基因的全长序列结构的准确确定的困难性。现有技术文献专利文献专利文献1:美国专利第5,712,144号说明书专利文献2:美国专利第5,716,834号说明书专利文献3:美国专利第5,858,706号说明书专利文献4:美国专利第5,985,590号说明书专利文献5:美国专利第6,645,724号说明书专利文献6:国际公开第2008/004674号专利文献7:日本特表2014-510898号公报专利文献8:国际公开第2014/092079号非专利文献非专利文献1：MutaTetal.,JournalofBiologicalChemistry,266,6554-6561(1991)非专利文献2：DingJLetal.,MolecularMarineBiologyandBiotechnology,4(1),90-103(1995)
技术实现思路
专利技术所要解决的技术问题本专利技术的课题在于，提供与美洲鲎的凝固机制有关的全部的全长重组蛋白、编码这些重组蛋白的cDNA、这些重组蛋白的用途。用于解决问题的技术方案本专利技术人在一直无人成功的编码与美洲鲎的凝固机制有关的全部的蛋白质因子的全长cDNA的取得、及其全部的重组蛋白的表达上获得成功，进而发现这些可以利用于各种用途，从而完成了本专利技术。即，本专利技术包含以下的方式。[1]一种重组蛋白等重组第1蛋白质，其为以下的任一种。(A)含有序列号2或4所示的氨基酸序列的重组蛋白。(B)含有相对于序列号2或4所示的氨基酸序列具有95％以上的同源性的氨基酸序列、且具有C因子活性的重组蛋白。(C)由含有相对于序列号1或3所示的碱基序列具有95％以上的同源性的碱基序列的DNA编码，且具有C因子活性的重组蛋白。(D)由以下DNA编码且具有C因子活性的重组蛋白，所述DNA与包含序列号1或3所示的碱基序列的互补序列的DNA在严格的条件下进行杂交。[2]一种重组蛋白等重组第2蛋白质，其为以下的任一种。(A)含有序列号6、8、10、或12所示的氨基酸序列的重组蛋白。(B)含有相对于序列号6、8、10、或12所示的氨基酸序列具有95％以上的同源性的氨基酸序列、且具有B因子活性的重组蛋白。(C)由含有相对于序列号5、7、9、或11所示的碱基序列具有95％以上的同源性的碱基序列的DNA编码，且具有B因子活性的重组蛋白。(D)由以下DNA编码且具有B因子活性的重组蛋白，所述DNA与包含序列号5、7、9、或11所示的碱基序列的互补序列的DNA在严格的条件下进行杂交。[3]一种重组蛋白等重组第3蛋白质，其为以下的任一种。(A)含有序列号14、16、18、20、或22所示的氨基酸序列的重组蛋白。(B)含有相对于序列号14、16、18、20、或22所示的氨基酸序列具有95％以上的同源性的氨基酸序列、且具有凝固酶原活性的重组蛋白。(C)由含有相对于序列号13、15、17、19、或21所示的碱基序列具有95％以上的同源性的碱基序列的DNA编码，且具有凝固酶原活性的重组蛋白。(D)由以下DNA编码且具有凝固酶原活性的重组蛋白，所述DNA与包含序列号13、15、17、19、或21所示的碱基序列的互补序列的DNA在严格的条件下进行杂交。[1-1]一种重组第1蛋白质的、用于活化具有B因子活性的蛋白质(例如以下的蛋白质等第2蛋白质)的应用。(A)含有序列号6、8、10、或12所示的氨基酸序列的蛋白质。(B)含有相对于序列号6、8、10、或12所示的氨基酸序列具有95％以上的同源性的氨基酸序列、且具有B因子活性的蛋白质。(C)由含有相对于序列号5、7、9、或11所示的碱基序列具有95％以上的同源性的碱基序列的DNA编码，且具有B因子活性的蛋白质。(D)由以下DNA编码且具有B因子活性的蛋白，所述DNA与包含序列号5、7、9、或11所示的碱基序列的互补序列的DNA在严格的条件下进行杂交。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组蛋白，其为以下的任一种：(A)含有序列号2或4所示的氨基酸序列的重组蛋白；(B)含有相对于序列号2或4所示的氨基酸序列具有95％以上的同源性的氨基酸序列、且具有C因子活性的重组蛋白；(C)由含有相对于序列号1或3所示的碱基序列具有95％以上的同源性的碱基序列的DNA编码、且具有C因子活性的重组蛋白；(D)由以下DNA编码且具有C因子活性的重组蛋白，所述DNA为与包含序列号1或3所示的碱基序列的互补序列的DNA在严格的条件下进行杂交的DNA。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.18 JP 2016-2047291.一种重组蛋白，其为以下的任一种：(A)含有序列号2或4所示的氨基酸序列的重组蛋白；(B)含有相对于序列号2或4所示的氨基酸序列具有95％以上的同源性的氨基酸序列、且具有C因子活性的重组蛋白；(C)由含有相对于序列号1或3所示的碱基序列具有95％以上的同源性的碱基序列的DNA编码、且具有C因子活性的重组蛋白；(D)由以下DNA编码且具有C因子活性的重组蛋白，所述DNA为与包含序列号1或3所示的碱基序列的互补序列的DNA在严格的条件下进行杂交的DNA。2.一种权利要求1所述的重组蛋白的、用于活化以下的蛋白质...

【专利技术属性】
技术研发人员：水村光，小林雄毅，小田俊男，
申请(专利权)人：生化学工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP