The invention discloses a method for fixing cells by adding a fixing reagent to the cells to be fixed. The fixing reagent is glyoxal fixative solution. The glyoxal fixative solution is glyoxal solution with pH of 6.0-8.0 and mass percentage concentration of glyoxal of 1-5%. The present invention also provides a cell fixation reagent, which is a glyoxal solution with pH 6.0-8.0 and glyoxal mass percentage concentration 1-5%. The method and the fixing reagent of the invention have the same fixing effect as 4% paraformaldehyde, and can better keep the cell in its original shape, avoid the cell becoming thicker after fixing, have good safety, good stability of the reagent and low cost.
【技术实现步骤摘要】
一种固定细胞的方法及细胞固定试剂
本专利技术属于生物
，尤其是涉及一种用于固定细胞的新方法及细胞固定试剂。
技术介绍
4％多聚甲醛是国际通用的细胞固定试剂，固定效果好，已广泛使用了几十年，且一直没有合适的替代物。但是，多聚甲醛的安全性和毒性很令人担忧。多聚甲醛是一种易燃物，4％多聚甲醛有刺鼻的气味，对眼睛，皮肤和呼吸道有强烈的刺激，它可能引起皮肤过敏，哮喘，呼吸困难。如果接触到眼睛，可能使眼睛严重损伤，而且有致癌的潜在危害。实践中，目前的生物工艺的病毒清除验证中，病毒检测的方法通常是：先使细胞被病毒感染后，用细胞培养基和琼脂糖的凝胶混合物覆盖在细胞表面，在细胞培养箱里孵育一定的时间，然后固定细胞，磕掉琼脂糖凝胶，用0.5％结晶紫溶液染色。按照目前的工作需求，每天固定细胞的工作量大，需要固定细胞的数量为100～200块细胞培养6孔板，50～100块直径为15厘米的细胞培养皿。我们所使用的细胞固定试剂为4％多聚甲醛。由于4％多聚甲醛有刺鼻的气味，研究人员反映用4％多聚甲醛固定细胞，即使采取了在通风橱里操作，佩戴防毒面具等保护措施，也有头晕、头疼、胸闷、胸口痛、呼...
【技术保护点】
1.一种固定细胞的方法，其特征在于，向待固定的细胞中加入固定试剂，所述固定试剂为乙二醛固定液，所述乙二醛固定液是pH为6.0～8.0、乙二醛质量百分浓度为1～5％的乙二醛溶液。
【技术特征摘要】
1.一种固定细胞的方法，其特征在于，向待固定的细胞中加入固定试剂，所述固定试剂为乙二醛固定液，所述乙二醛固定液是pH为6.0～8.0、乙二醛质量百分浓度为1～5％的乙二醛溶液。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙二醛固定液是将质量百分数为40％的乙二醛水溶液稀释在PBS溶液里，调节pH至6.0～8.0，调节乙二醛质量百分数终浓度为1～5％得到。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙二醛固定液是将质量百分数为40％的乙二醛水溶液稀释在MilliQ超纯水里，加入适量冰醋酸，调节pH至6.0～8.0，调节乙二醛质量百分数终浓度为1～5％得到。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述冰醋酸体积百分数终浓度为0.5～2％。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待固定的细胞是CV-1细胞，PG4细胞，324K细胞或LLC-MK2细胞；其中，CV-1细胞、PG4细胞、324K细胞和LLC-MK2细胞分别被PrV、X-MuLV、MVM和Reo-3四种病毒感染。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待固定的细胞是先用细胞培养基和琼脂糖的凝胶混合物覆盖在病毒感染后的细胞表面，然后在细胞培养箱里孵育一定的时间，再用于固定。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：雷静，邱忆涛，高庆，阳俊容，刘海霞，王硕，
申请(专利权)人：苏州药明康德检测检验有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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