一种分析测定琥珀酸曲格列汀中2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的方法技术

本发明专利技术提供一种利用HPLC法分析测定琥珀酸曲格列汀中基因毒性杂质2‑(二溴甲基)‑4‑氟苯腈的方法。本发明专利技术采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸水溶液和乙腈溶液为流动相，采用梯度洗脱方式，所建立的高效液相分析方法能够准确测定琥珀酸曲格列汀中潜在基因毒性杂质2‑(二溴甲基)‑4‑氟苯腈。本HPLC‑UV方法操作简单，分析时间短，准确度高，重复性好，灵敏度可达1.6ppm，为琥珀酸曲格列汀质量标准的提供了可靠检测方法，为患者的健康用药提供保障，属于医药技术领域。

A Method for the Analysis and Determination of 2-(Dibromomethyl)-4-Fluorobenzenitrile in Triglitine Succinate

The present invention provides a method for the determination of genotoxic impurity 2 (dibromomethyl)4 -fluorobenzenitrile in traglitine succinate by high performance liquid chromatography. The present invention adopts octadecyl silane bonded silica gel as stationary phase, phosphoric acid aqueous solution and acetonitrile solution as mobile phase, and gradient elution method. The established high performance liquid chromatography method can accurately determine the potential genotoxic impurity 2 (dibromomethyl)fluorobenzenitrile in traglitine succinate. The method of HPLC UV is simple in operation, short in analysis time, high in accuracy, good in repeatability and sensitivity up to 1.6 ppm. It provides a reliable detection method for the quality standard of traglitine succinate and guarantees the healthy medication of patients. It belongs to the field of medical technology.

【技术实现步骤摘要】
一种分析测定琥珀酸曲格列汀中2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的方法
本专利技术具体公开了一种利用HPLC法测定琥珀酸曲格列汀中潜在基因毒性杂质2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的药物分析方法。为患者的健康用药提供保障，属于医药
技术背景Trelagliptin(曲格列汀)是一种每周一次的二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂，通过选择性、持续性抑制DPP-4，控制血糖水平。DPP-4是一种酶，能够引发肠促胰岛素(胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP))的失活，而这2种肠降胰岛素在血糖调节中发挥着重要作用。抑制DPP-4，能够增加血糖水平依赖性胰岛素分泌，从而控制血糖水平。对于本药品而言，其主要成分的纯度是药品药效的决定性因素，因此在制备该药物的后续检测是十分重要的。琥珀酸曲格列汀，化学名为2-[[6-[(3R)-3-氨基-1-哌啶基]-3,4-二氢-3-甲基-2,4-二氧代-1(2H)-嘧啶基]甲基]-4-氟-苯甲腈琥珀酸盐，分子式：C18H20FN5O2·C4H6O4主要用于治疗Ⅱ型糖料病患者，具有半衰期长的优势，一周服用一次。其结构式如下：2-溴甲基-6-氟苯腈是琥珀酸曲格列汀合成过程中的重要起始物料，2-溴甲基-6-氟苯腈在合成过程中易产生2-(二溴甲基)-4-氟苯腈。其产生过程如下：2-(二溴甲基)-4-氟苯腈是具备卤代烷烃结构，此类警示结构的化合物被ICH(人用药物注册技术要求国际协调会)、FDA(美国食品药品监督管理局)和EMEA(欧洲药品审评署)定义为潜在基因毒性杂质，因此，需要在琥珀酸曲格列汀中控制2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的含量。参考ICH《人用药物遗传毒性试验和结果分析指导原则》，每天最多摄入1.5μg的基因毒性杂质，被认可为大多数药品可以接受的风险。琥珀酸曲格列汀的每周最大摄入量为100mg，为了严格控制基因毒性杂质，我们设定其每天计量为100mg，所以2-(二溴甲基)-4-氟苯腈相应限度为(1.5μg/day)/(100mg/day)＝15ppm。近年来，随着国内外药政部门相关法规的逐步健全，基因毒性杂质研究已经成为保证产品质量的关键之一。目前，USP、EP、JP和中国药典及相关文献、专利均未见琥珀酸曲格列汀基因毒性杂质的报道。
技术实现思路
本专利技术提供一种高效液相色谱法分析测定琥珀酸曲格列汀中潜在基因毒性杂质即2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的方法。本专利技术提供一种利用HPLC法分析测定琥珀酸曲格列汀中基因毒性杂质2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的方法，该方法包括：(1)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸水溶液为流动相A，乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱方式；(2)样品溶液的配置：采用乙腈水溶液作为溶剂将待检测样品配置成样品溶液；(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成珀酸曲格列汀基因毒性杂质的测定，其中，所述基因毒性杂质为2-(二溴甲基)-4-氟苯腈。本专利技术的上述方法中，其特征在于，所述固定相十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱的粒径为3.5um，长度为100mm，内径4.6mm。本专利技术的上述方法中，其特征在于，步骤(2)中作为溶剂使用的乙腈溶液中乙腈浓度为20％～80％，优选50％。本专利技术的上述方法中，其特征在于，作为流动相A的磷酸水溶液中，磷酸的浓度为0.05％～0.15％。优选磷酸浓度为0.1％。本专利技术的上述方法中，其特征在于，所述流动相的流速为0.9～1.1ml/min，优选1.0ml/min。本专利技术的上述方法中，其特征在于，所述色谱柱的柱温为35℃～45℃，优选38℃～42℃，更优选40℃。本专利技术的上述方法中，其特征在于，检测波长为234nm；进样体积为10μl。本专利技术的上述方法中，其特征在于，洗脱梯度为：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0.050506.050506.01109010.0109010.10505016.05050专利技术人通过对杂质2-(二溴甲基)-4-氟苯腈和琥珀酸曲格列汀的结构分析，针对化合物具备的酸碱性差异等情况，选择十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，磷酸水溶液和乙腈作为流动相，保证了2-(二溴甲基)-4-氟苯腈与琥珀酸曲格列汀和相邻未知杂质之间的分离效果；采用2个等度洗脱的梯度洗脱方式，第一个等度(磷酸水溶液与乙腈的比例为50:50)是用于2-(二溴甲基)-4-氟苯腈与琥珀酸曲格列汀和其他未知杂质基线分离开，第二个等度(磷酸水溶液与乙腈的比例为10:90)是用于将琥珀酸曲格列汀中极性小的杂质从体系中洗脱出来，以防干扰下一个样品的检测；专利技术人同时考虑到2-(二溴甲基)-4-氟苯腈无解离基团、极性小，琥珀酸曲格列汀极性大易溶于水，采用水与乙腈体积比为50:50的溶液作为稀释液(与第一个等度相同的有机相比例)，既达到了样品溶解的目的，又防止样品产生溶剂效应等特点，以提高2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的提取回收率。本专利技术的分析测定珀酸曲格列汀中基因毒性杂质2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的方法，灵敏度可达1.6ppm，对于珀酸曲格列汀原料药及制剂质量标准的制定和提升具有重要作用，同时也为其他采用类似起始原材料和合成路线的药物的基因毒性杂质研究提供了参考依据。附图说明图1实施例1中琥珀酸曲格列汀的定位溶液图；图2实施例1中2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的定位溶液图；图3实施例1中2-溴甲基-6-氟苯腈的定位溶液图；图4实施例1中空白溶剂的局部放大图；图5实施例1中专属性溶液的局部放大图；图6实施例2中检测限溶液的局部放大图；图7实施例2中定量限溶液的局部放大图；图8实施例3中线性溶液的局部放大图；图9实施例3中2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的线性工作曲线图。具体实施方式下面通过具体实施例来进一步说明本专利技术。应当理解为：本专利技术的实施例仅仅是用于说明本专利技术，而不是对本专利技术的限制。在本专利技术技术方案的基础上对本专利技术的简单改进或者采用惯用手段或成分进行等同替换所得得到的技术方案均属于本专利技术的保护范围。实施例一专属性与杂质定位试验(1)样品溶液的配制溶剂：50％乙腈水溶液定位溶液：琥珀酸曲格列汀、2-(二溴甲基)-4-氟苯腈、2-溴甲基-6-氟苯腈各适量，精密称定，分别置不同的量瓶中，加溶剂(50％乙腈水溶液)溶解并稀释制成含琥珀酸曲格列汀、2-(二溴甲基)-4-氟苯腈、2-溴甲基-6-氟苯腈各6.67mg/ml、1mg/ml、1ug/ml的溶液，作为化合物定位溶液。专属性溶液：取2-(二溴甲基)-4-氟苯腈10mg，精密称定，置10ml的量瓶中，加溶剂(50％乙腈水溶液)溶解稀释至10ml刻度，摇匀。取上述溶液100ul于100ml容量瓶中，用稀释液混匀，定容，作为2-(二溴甲基)-4-氟苯腈储备液；取琥珀酸曲格列汀66.67mg，精密称定，置10ml量瓶中，同时精密量取2-(二溴甲基)-4-氟苯腈储备液1ml置该量瓶中，加溶剂(50％乙腈水溶液)溶解琥珀酸曲格列汀并稀释至10ml刻度，摇匀，制成含琥珀酸曲格列汀6.667mg/ml、2-(二溴甲基)-4-氟苯腈1μg/ml的溶液，作为专属性溶液。精密量取空白溶剂、定位溶液、专属性溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，按照本专利技术实施例所述色谱条件检测。(2)色谱条件：高效液相色谱仪本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分析测定琥珀酸曲格列汀中基因毒性杂质2‑(二溴甲基)‑4‑氟苯腈的方法，其特征在于，(1)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸水溶液为流动相A，以乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱方式；(2)样品溶液的配制：采用乙腈水溶液为溶剂将待检测样品配置成样品溶液；(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成琥珀酸曲格列汀基因毒性杂质2‑(二溴甲基)‑4‑氟苯腈的测定。

【技术特征摘要】
1.一种分析测定琥珀酸曲格列汀中基因毒性杂质2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的方法，其特征在于，(1)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以磷酸水溶液为流动相A，以乙腈溶液为流动相B，梯度洗脱方式；(2)样品溶液的配制：采用乙腈水溶液为溶剂将待检测样品配置成样品溶液；(3)分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成琥珀酸曲格列汀基因毒性杂质2-(二溴甲基)-4-氟苯腈的测定。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定相十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的粒径为3.5μm，长度为100mm，内径为4.6mm。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中作为溶剂使用的乙腈水溶液中乙腈的浓度为20％～90％。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中作为溶剂使用的乙腈水溶液中乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱王科，王红燕，黄冰，郑文瑾，
申请(专利权)人：浙江华贝药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33