葡萄霜霉病菌对羧酸酰胺类杀菌剂抗药性的Taqman-MGB检测方法技术

本发明专利技术涉及葡萄霜霉病菌纤维素合酶3基因第1105位核苷酸突变检测方法及其在羧酸酰胺类杀菌剂抗性监测中的应用，具体公开了检测该突变位点的特异引物对和探针序列。通过设计的引物和探针进行荧光PCR反应，一步即可判断出该菌株对羧酸酰胺类杀菌剂的敏感性，并且可以区分敏感菌株的杂合和纯合型。本发明专利技术提供的检测霜霉病菌对羧酸酰胺类药剂产生抗药性的分子诊断方法，灵敏度高、稳定性好、检测周期短，可以用于高通量监测田间葡萄霜霉病菌对羧酸酰胺类药剂的抗性发生、发展情况，实现霜霉病菌对羧酸酰胺类药剂抗性的早期预警，对及时有效地控制葡萄霜霉病菌抗药性的发展具有重要意义。

Taqman-MGB method for detection of resistance of downy mildew of grape to carboxylic amide fungicides

The invention relates to a method for detecting the 1105 nucleotide mutation of cellulose synthase 3 gene of downy mildew of grape and its application in monitoring the resistance of carboxylic amide fungicides. Specific primer pairs and probe sequences for detecting the mutation site are specifically disclosed. The sensitivity of the strain to carboxylic amide fungicides can be determined by fluorescent PCR with the designed primers and probes, and the heterozygous and homozygous strains can be distinguished. The molecular diagnostic method for detecting downy mildew resistance to carboxylic amide agents provided by the invention has high sensitivity, good stability and short detection period, and can be used for high-throughput monitoring of the occurrence and development of downy mildew resistance to carboxylic amide agents in the field, realizing early warning of downy mildew resistance to carboxylic amide agents, and timely and effective control of staphylococcus. The development of drug resistance of downy mildew of grape is of great significance.

【技术实现步骤摘要】
葡萄霜霉病菌对羧酸酰胺类杀菌剂抗药性的Taqman-MGB检测方法(一)
本专利技术“葡萄霜霉病菌对羧酸酰胺类杀菌剂抗药性的Taqman-MGB检测方法”，专用于检测引起葡萄霜霉菌对羧酸酰胺类杀菌剂抗药性，属于抗药性检测
，与分子检测技术有关。(二)
技术介绍
葡萄霜霉病菌[PlasmoparaViticola(BerketCurtis)Ber.etdeToni]属于卵菌门葡萄单轴霉属，是一种专性寄生菌。由该菌引起的葡萄霜霉病是世界上危害葡萄的重大病害，该病是流行性病害，几乎存在于我国所有的葡萄生产园中，严重影响我国葡萄产业的发展。对于气传性流行性病害，化学防治是病害防控中最为重要的手段之一。然而，随着杀菌剂的连续、频繁使用，葡萄霜霉菌抗药性逐渐产生，导致杀菌剂防效下降。抗药性的检测为霜霉病的防治打下基础，为农药的合理使用提供科学依据。羧酸酰胺类杀菌剂(CAA)是防治霜霉病的主要化学药剂之一，是一类作用于纤维素合酶3(CesA3)的单靶标位点的化学农药，包括烯酰吗啉、氟吗啉等。自上世纪80年代投入市场以来，先后在法国、意大利等国发现了烯酰吗啉抗性菌株(Gisietal.，200本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测葡萄霜霉病菌对羧酸酰胺类杀菌剂抗药性的Taqman引物，其特征在于：包含一对扩增其纤维素合酶基因PvCesA3的第1105密码子处的特异性引物Cesa3F/Cesa3R和一对Taqman MGB探针Cesa3pR/Cesa3pS，其序列分别为：Cesa3F：5’‑GCACAAACACGACAATGTAGACAA‑3’Cesa3R：5’‑CGGCTGCTACCTTTACGGCAAA‑3’Cesa3pR：5’‑FAM‑AGCAACGAGCTGAA‑MGB‑3’Cesa3pS：5’‑VIC‑CAGCAACGAGCCGA‑MGB‑3’

【技术特征摘要】
1.一种用于检测葡萄霜霉病菌对羧酸酰胺类杀菌剂抗药性的Taqman引物，其特征在于：包含一对扩增其纤维素合酶基因PvCesA3的第1105密码子处的特异性引物Cesa3F/Cesa3R和一对TaqmanMGB探针Cesa3pR/Cesa3pS，其序列分别为：Cesa3F：5’-GCACAAACACGACAATGTAGACAA-3’Cesa3R：5’-CGGCTGCTACCTTTACGGCAAA-3’Cesa3pR：5’-FAM-AGCAACGAGCTGAA-MGB-3’Cesa3pS：5’-VIC-CAGCAACGAGCCGA-MGB-3’2.使用葡萄霜霉病菌对羧酸酰胺类杀菌剂抗药性的Taqman-MGB检测方法对葡萄霜霉病病原菌的抗药性进行快速检测，其步骤包括：1)抽提被测菌的DNA，制备DNA样品；2)用权利要求1中的所示的引物和探针对步骤1)中的DNA样品进行PCR扩增。3)根据步骤2)得到的扩增曲线，判断该病...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄晓庆，张昊，周连柱，孔繁芳，王喜娜，王忠跃，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11