本发明专利技术属于肿瘤分子生物学技术领域，具体涉及circCDYL2及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和诊断制剂。首次发现circCDYL2在鼻咽癌细胞系中高表达，且能促进鼻咽癌细胞的侵袭与转移，提示circCDYL2可能成为鼻咽癌诊断标记物，以及用于制备诊断鼻咽癌的试剂。具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。
CircCDYL2 and its application in the preparation of diagnostic preparations for nasopharyngeal carcinoma
The invention belongs to the technical field of tumor molecular biology, in particular to circCDYL2 and its application in preparing diagnostic preparations for nasopharyngeal carcinoma and diagnostic preparations. It was found for the first time that circCDYL2 was highly expressed in nasopharyngeal carcinoma cell lines and could promote the invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma cells, suggesting that circCDYL2 might be a diagnostic marker for nasopharyngeal carcinoma and a reagent for the preparation of diagnostic reagents for nasopharyngeal carcinoma. It has far-reaching clinical significance and important application prospects.
【技术实现步骤摘要】
circCDYL2及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和诊断制剂
本专利技术属于肿瘤分子生物学
，具体涉及一种环状RNAcircCDYL2及其在制备鼻咽癌诊断制剂中的应用和诊断制剂。
技术介绍
鼻咽癌(Nasopharyngealcarcinoma,NPC)是一种高转移的恶性肿瘤，具有不同的发病机制和组织病理学表现。遗传易感性，表观遗传，种族衍生，地理分布，环境因素和EBV病毒感染导致NPC的恶性。鼻咽癌的发生有明显的区域特征，东南亚特别是华南和北非的病例占多数。NPC的治疗策略主要是放疗辅以化疗。虽然早期NPC患者的5年总生存率高达95％，但鼻咽和颈淋巴结复发率为8.6％～23.7％。这是由于NPC的发生和发展涉及复杂的基因调控和多阶段过程，其分子机制尚不清楚，加之肿瘤异质性和放疗抵抗引起的个体差异，传统放疗的治疗效果不是非常的理想。因此，研究治疗鼻咽癌的治疗靶标和诊断的分子标记物至关重要。circRNA主要来源于蛋白质编码基因的外显子区，也可以由内含子区、UTR区、基因间区、非编码RNA位点及已知转录物的反义位点形成。CircRNA是由前体mRNA(precursormessengerRNA,pre-mRNA)反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形成环状套索结构的非编码RNA分子。CircRNA形成过程可以分为两大类，即外显子环化(exoncircularization)和内含子环化(introncircularization)两大机制。Jeck等提出外显子来源的circRNA(exoniccircRNA,ecircRNA)可以分为套索驱动环化(lariat-drivencircularization)和内含子配对驱动环化(intron-pairing-drivencircularization)两种形成方式，套索驱动环化是外显子3’端作为剪接供体(splicedonor)攻击5’端剪接受体(splicereceptor),Alu区共价结合而形成套索结构，套索结构进行内部拼接后切除内含子形成circRNA；内含子配对驱动环化是两个内含子碱基互补配对形成环状结构后，剪除内含子形成circRNA。其实内含子本身也可以环化，可以形成内含子来源circRNA(circularintronicRNA,ciRNA)。CircRNA是由前体mRNA反向拼接而形成的一类不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共价键形式形成的封闭环形结构的非编码RNA分子。有着高度的稳定性、保守性、特异性，并且含量高的特点。CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次发现，随后HsuMT等人使用电子显微镜技术在猴的肾细胞质中发现了circRNA的存在。近年来越来越多的circRNA被发现，目前为止已知的circRNA数目已经达到三万多个。CircRNA也不再被认为是错误的RNA转录本，而是作为非编码RNA研究中的耀眼之星冉冉升起。发现更多的新型circRNA作为肿瘤诊断和预后的生物标志物及其应用，并能尽早在专利领域得到好的保护，能显著提升我国在该
的国际竞争力。我们检测到一个长度为592bp的circCDYL2。通过实验发现该环状RNA在鼻咽癌中高表达且能促进鼻咽癌的侵袭转移，有可能作为鼻咽癌诊断标记物，以及治疗的靶点。
技术实现思路
本专利技术发现了一个大小592bp的circCDYL2，并发现了它与鼻咽癌之间存在的关系，有可能作为鼻咽癌诊断标记物和治疗的靶点。本专利技术的第一个目的是提供一种环状RNAcircCDYL2，序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术的第二个目的是提供一种检测环状RNAcircCDYL2表达量的试剂在制备诊断鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNAcircCDYL2序列如SEQIDNO.1所示。进一步的，所述的检测环状RNAcircCDYL2表达量的试剂包括但不限于PCR检测试剂。进一步的，所述的PCR检测试剂中的引物优选为：上游引物：5’-CCTGGCTTGGATTTGAATGA-3’下游引物：5’-CTCCCGTAGCCTTTCCATC-3’，但不限于上述具体的引物。本专利技术的第三个目的是提供一种诊断鼻咽癌的制剂，包括检测环状RNAcircCDYL2表达量的试剂，所述的环状RNAcircCDYL2序列如SEQIDNO.1所示。进一步的，所述的检测环状RNAcircCDYL2表达量的试剂包括但不限于PCR检测试剂。进一步的，所述的PCR检测试剂中的引物优选为：上游引物：5’-CCTGGCTTGGATTTGAATGA-3’下游引物：5’-CTCCCGTAGCCTTTCCATC-3’，但不限于上述具体的引物。进一步的，所述的PCR检测试剂还包括内参对照：上游引物：5’-TCACCAACTGGGACGACATG-3’下游引物：5’-GTCACCGGAGTCCATCACGAT-3’；但不限于上述具体的阴性对照。本专利技术首次发现circCDYL2在鼻咽癌细胞系中高表达，且能促进鼻咽癌细胞的侵袭与转移，提示circCDYL2可能成为鼻咽癌诊断标记物，以及用于制备诊断鼻咽癌的试剂。具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。附图说明图1为RNA测序中显示的circCDYL2的表达情况及qRT-RCR检测鼻咽癌细胞系中circCDYL2的表达水平；左图N为非肿瘤鼻咽上皮组织，样本数为3例；T为鼻咽癌组织，样本数为10例，n为样本数量，均采用t检验，P<0.05具有统计学意义；右图中检测circCDYL2在鼻咽癌细胞系中的表达，NP69是永生化的正常鼻咽上皮细胞，作为参照，其余均为鼻咽癌细胞系。图2为Sanger法测序；a.circCDYL2由CDYL2的2号外显子首尾拼接形成，E表示exon(外显子)，下划线序列表示首尾的接头序列；b.circRNA形成的示意图；c.测序结果的峰图，黑色箭头表示从此处头尾相接。图3为核质分离RNA实验检测circCDYL2在细胞中的定位；利用核质分离试剂盒抽提鼻咽癌细胞中的RNA，以GAPDH为胞质的内参，U6为细胞核的内参，结果显示circCDYL2约70％位于核内，30％位于胞质中。图4为qRT-PCR技术检测鼻咽癌细胞系中circCDYL2ASO的沉默效率；a.qRT-PCR检测在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中circCDYL2ASO的沉默效率,circCDYL2表达水平分析以β-actin作为参照；b.在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2中转染ASO后，检测线性RNA的表达，ns代表无意义，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。图5为过表达载体的质粒图谱；图6为qRT-PCR检测circCDYL2过表达效率；在HONE1、HNE2和CNE2细胞系中用qRT-PCR实验检测circCDYL2过表达效率，circCDYL2表达水平分析以β-actin作为参照，将pcDNA3.1组标准化为1，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。图7为体外沉默circCDYL2对鼻咽癌细胞增殖的影响；在鼻咽癌细胞系HONE1、HNE2和CNE2用hipe本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种环状RNA circCDYL2，序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种环状RNAcircCDYL2，序列如SEQIDNO.1所示。2.检测环状RNAcircCDYL2表达量的试剂在制备诊断鼻咽癌制剂中的应用，所述的环状RNAcircCDYL2序列如SEQIDNO.1所示。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的检测环状RNAcircCDYL2表达量的试剂包括PCR检测试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的PCR检测试剂中的引物为：上游引物：5’-CCTGGCTTGGATTTGAATGA-3’下游引物：5’-CTCCCGTAGCCTTTCCATC-3’。5.一种诊断鼻咽癌的制剂，其特征在于，包括检测环状RNAcircCDYL2表达量的试剂，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾朝阳，范春梅，郭灿，熊炜，邓湘赢，王忆安，莫勇真，廖前进，周钰娟，李征，李小玲，李桂源，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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