用于产生对乙型肝炎病毒的免疫应答的组合物和方法技术

描述了用于产生对乙型肝炎病毒的免疫应答的组合物和方法。本文所述的组合物和方法涉及编码一种或多种病毒抗原的修饰痘苗安卡拉(MVA)载体，其用于在给予载体的受试者中产生对乙型肝炎病毒的保护性免疫应答。本发明专利技术的组合物和方法在预防和治疗上均可用，并可用于预防和/或治疗由乙型肝炎病毒引起的感染。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生对乙型肝炎病毒的免疫应答的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年5月30日提交的US62/343,074的权益，其内容在此通过引用整体并入。
本专利技术涉及用于在给予组合物的受试者中产生对乙型肝炎病毒的免疫应答的组合物，包括疫苗组合物，以及这些组合物的制备和使用方法。更具体地，本文所述的组合物和方法涉及编码一种或多种病毒抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其适用于在给予载体的受试者中产生对乙型肝炎病毒的保护性免疫应答。本专利技术的组合物和方法在预防和治疗上均可使用。
技术介绍
尽管抗病毒治疗取得了很大进展，但乙型肝炎病毒(HBV)感染仍然是一个主要的全球公共健康问题。全世界大约有20亿人在其一生中已经受到感染，且超过3.5亿人是该病毒的慢性携带者(LiawYF,etal.Lancet2009,373:582-592)。HBV本身不是细胞病变的，但其宿主对包膜、衣壳和Pol蛋白的抗病毒免疫应答导致肝细胞损伤。具体来说，已经显示CD4+和CD8+T细胞应答在感染结果中起重要作用(BauerTetal.,DigDis.2011;29:423–433)。各种研究表明，CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞介导的免疫应答决定HBV感染的结果。因此，HBV感染的自发病毒清除的特征在于急性感染期剧烈且持续的多表位特异性CD4+和CD8+T细胞应答。相反，HBV慢性感染与晚期、短暂、微弱或有限集中的CD4+和CD8+T细胞应答相关(FerrariC.etal.,JImmunol.1990;145:3442–3449;RehermannB.etal.,JExpMed.1995;181:1047–1058)。然而，重要的是注意到，CD4+和CD8+T细胞应答的效果不仅对病毒控制很重要，而且还涉及肝损伤和HBV感染中肝病的发展(MainiMK,etal.,JExpMed.2000;191:1269–1280)。HBV感染可能引起急性和慢性肝炎，其导致肝硬化(LC)和肝细胞癌(HCC)(ChuCM.JGastroenterolHepatol200015Suppl:E25-30)。并非所有可用的HBV疫苗都广泛有效。目前市场上的HBV疫苗，其预防性地保护大多数人免受HBV感染，仅含有S抗原。几乎5％至10％的预防接种现有疫苗的人未能产生足够的抗体应答来提供保护(KubbaAK,etal.CommunDisPubIicHealth20036:106-112)。此外，目前可用的HBV疫苗中还没有在治疗上是有效的。一旦HBV感染确定为慢性感染，对病毒产生有效的免疫应答变得更加困难，因为免疫系统对持久性病毒变得耐受。所需要的是疫苗或免疫应答刺激组合物，以破坏对乙型肝炎表面抗原(HBsAg/澳大利亚抗原)和其它HBV抗原的耐受性，以诱导抗HBsAg中和抗体，并诱导生产性CD4+和CD8+T细胞应答。
技术实现思路
本文所述的本专利技术的组合物和方法可用于在有需要的受试者中产生对至少一种乙型肝炎病毒的免疫应答。有利地，所述组合物和方法可以预防性地用于免疫受试者以抵抗乙型肝炎病毒感染，或治疗性地用于预防、治疗或改善疾病的发作和严重程度。在第一方面，本专利技术是重组修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其包含一种或多种编码乙型肝炎病毒多肽或融合蛋白的核酸序列，其中在至少一种与痘病毒表达系统相容的启动子的控制下，将至少一种核酸序列插入到MVA载体中。在一个实施方案中，重组MVA载体包含两种或更多种编码乙型肝炎病毒蛋白的核酸序列，其中在至少两种能够与痘病毒表达系统相容的启动子的控制下，将至少两种核酸序列插入到MVA载体中。在一个实施方案中，重组MVA载体包含编码一种或多种肝炎结构蛋白的第一核酸序列和编码一种或多种乙型肝炎非结构蛋白的第二核酸序列，其中在与痘病毒表达系统相容的启动子的控制下，将第一和第二核酸序列都插入到MVA载体中。在一个实施方案中，乙型肝炎病毒结构蛋白包含PreS2-S蛋白或其片段。在一些实施方案中，乙型肝炎病毒结构蛋白包含缺少全部或部分S结构域的PreS2-S蛋白的片段。在一个实施方案中，乙型肝炎病毒结构蛋白是融合蛋白。在一个实施方案中，乙型肝炎病毒结构蛋白是preS.HA融合蛋白。在一个实施方案中，乙型肝炎病毒非结构蛋白选自PreC-C和截短的X蛋白及其片段。在一个实施方案中，乙型肝炎病毒非结构蛋白选自PreC-C和X蛋白及其片段。在一个实施方案中，乙型肝炎病毒非结构蛋白是融合蛋白。在一个实施方案中，乙型肝炎病毒非结构蛋白是M1.P41A。在一个实施方案中，将第一和第二核酸序列插入到重组MVA载体的一个或多个缺失位点中。在一个实施方案中，将第一和第二核酸序列插入到重组MVA载体中的天然缺失位点、修饰的天然缺失位点、或必需或非必需MVA基因之间。在另一个实施方案中，将第一和第二核酸序列插入到相同的天然缺失位点、修饰的天然缺失位点、或相同的必需或非必需MVA基因之间。在另一个实施方案中，将第一核酸序列插入到选自I、II、III、IV、V或VI的缺失位点中，并且将非结构蛋白序列插入选自I、II、III、IV、V或VI的缺失位点中。在另一个实施方案中，将第一核酸序列插入第一缺失位点中，并且将第二核酸序列插入第二缺失位点中。在一个具体的实施方案中，将第一核酸序列插入到两个必需和高度保守的MVA基因之间，并将第二核酸序列插入重构和修饰的缺失位点III中。在一个具体的实施方案中，将第一核酸序列插入两个必需和高度保守的MVA基因之间以限制活性缺失突变体的形成。在一个具体的实施方案中，将第一核酸序列插入到MVA基因I8R和G1L之间。在一个具体的实施方案中，将第一核酸序列插入到MVA基因I8R和G1L之间，并且将第二核酸序列插入修饰的缺失位点III中。在一个实施方案中，启动子选自Pm2H5、PsynII、mH5启动子或其组合。在一个实施方案中，重组MVA载体表达组装成VLP的一种或多种结构蛋白和非结构蛋白。在一个实施方案中，结构蛋白序列和非结构蛋白序列来自乙型肝炎基因型A、B、C、D、E、F、G或H。在一个实施方案中，结构蛋白序列和非结构蛋白序列来自乙型肝炎基因型D。在第二方面，本专利技术是药物组合物，其包含本专利技术的重组MVA载体和药学上可接受的载体。在一个实施方案中，重组MVA载体配制用于腹膜内、肌内、皮内、表皮、粘膜或静脉内给药。在一个实施方案中，重组MVA载体配制用于肌内给药。在第三方面，本专利技术是包含第一重组MVA载体和第二重组MVA载体的药物组合物，每个载体包含编码乙型肝炎病毒结构蛋白的第一核酸序列和编码乙型肝炎病毒非结构蛋白的第二核酸序列，其中(i)第一重组MVA载体的第一核酸序列不同于第二重组MVA载体的第一核酸序列和/或(ii)第一重组MVA载体的第二核酸序列不同于第二重组MVA载体的第二核酸序列。在一个具体的实施方案中，第一和第二重组MVA载体的第一核酸序列编码PreS2_S或PreS.HA，并且第一重组MVA载体的第一核酸序列来自与第二重组MVA载体的第一核酸序列相同或不同的基因型。在一个实施方案中，第一重组MVA载体的第一和第二序列来自基因型B，并且第二重组MVA载体的第一和第二序列来自基因型C。在一个实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其包含至少一种编码乙型肝炎病毒多肽或融合蛋白的核酸序列，其中在至少一种与痘病毒表达系统相容的启动子的控制下，将所述至少一种核酸序列插入到MVA载体中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.30 US 62/3430741.一种修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其包含至少一种编码乙型肝炎病毒多肽或融合蛋白的核酸序列，其中在至少一种与痘病毒表达系统相容的启动子的控制下，将所述至少一种核酸序列插入到MVA载体中。2.权利要求1的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中重组MVA载体包含至少两种编码乙型肝炎病毒蛋白的核酸序列，其中在至少两种能够与痘病毒表达系统相容的启动子的控制下，将所述至少两种核酸序列插入到MVA载体中。3.权利要求1的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中重组MVA载体包含编码肝炎结构蛋白的第一核酸序列和编码至少一种乙型肝炎非结构蛋白的第二核酸序列，其中在与痘病毒表达系统相容的启动子的控制下，将所述第一和第二核酸序列都插入到MVA载体中。4.权利要求3的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中所述乙型肝炎病毒结构蛋白包含PreS2-S蛋白或其片段。5.权利要求3的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中所述乙型肝炎病毒结构蛋白是融合蛋白。6.权利要求3的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中所述乙型肝炎病毒结构蛋白是preS.HA融合蛋白。7.权利要求3的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中所述乙型肝炎病毒非结构蛋白选自PreC-C和截短的X蛋白及其片段。8.权利要求3的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中所述乙型肝炎病毒非结构蛋白是融合蛋白。9.权利要求3的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中所述乙型肝炎病毒非结构蛋白是M1.P41A。10.权利要求3的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中将所述第一核酸序列插入到MVA基因I8R和G1L之间。11.权利要求3的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中将所述第一核酸序列插入到MVA基因I8R和G1L之间，并且将所述第二核苷酸序列插入修饰的缺失III中。12.权利要求1的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中所述启动子选自Pm2H5、PsynII、mH5启动子或其组合。13.权利要求1的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中重组MVA载体表达组装成VLP的至少一种结构蛋白和至少一种非结构蛋白。14.权利要求1的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体，其中所述结构蛋白和非结构蛋白来自乙型肝炎基因型A、B、C、D、E、F、G或H。15.一种药物组合物，其包含权利要求1的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体和药学上可接受的载体。16.权利要求15的药物组合物，其中所述修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体被配制用于腹膜内、肌内、皮内、表皮、粘膜或静脉内给药。17.权利要求15的药物组合物，进一步包含第二MVA载体，其中第一核酸序列编码PreS2_S或PreS.HA，并且第一MVA载体的第一核酸序列来自与第二MVA载体的第一核酸序列相同或不同的基因型。18.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：F圭拉胡，A多米，NP麦柯利，R巴苏，M罗，
申请(专利权)人：吉奥瓦科斯公司，乔治亚州大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国,US