疫苗及其诱导针对SARS-COV2的免疫应答的用途制造技术

本文提供重组修饰的安卡拉痘苗(MVA)病毒载体，其包含编码一种或多种SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】2005；102(39):14040
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5；Rest et al.,SARSassociated coronavirus has a recombinant polymerase and coronaviruseshave a history of host
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shifting.Infect Genet Evol.2003；3(3):219
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25。跨物种屏障跳跃使得CoV如SARS CoV和中东呼吸综合征CoV(MERS) 表现为有毒性的人类病毒。Schoeman和Fielding,Coronavirus envelopeprotein:current knowledge.Virology 2019；16:69。例如，2003年SARS冠状病毒导致8096例确诊病例，全世界报告774例死亡，死亡率为9.6％。世界卫生组织WHO。从2002年11月1日至2003年7月31日发病的可能SARS病例的概述。可获自： http://www.who.int/csr/sars/country/table2004_04_21/en/index.html。自 2012年4月以来，已经报告了2229例MERS确诊病例，其中792例相关死亡，导致死亡率为35.5％。世界卫生组织WHO。WHO MERS
‑
CoV 全球概述和风险评估，2018年8月(WHO/MERS/RA/August18)。可获自： http://www.who.int/csr/disease/coronavirus_infections/risk
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assessment
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augu st
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2018.pdf？ua＝1。
[0010]最近，一种新型冠状病毒SARS
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CoV2与疫情有关。参见关于新型冠状病毒(SARS
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CoV2)爆发的国际卫生条例(2005)紧急委员会第二次会议的声明，世界卫生组织，2020年1月30日。自2020年1月31 日开始存档，可从 https://www.who.int/news
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room/detail/30
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01
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2020
‑
statement
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on
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the
‑
second
‑ꢀ
meeting
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of
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the
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international
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health
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regulations
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(2005)
ꢀ‑
emergency
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committee
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regarding
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the
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outbreak
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of
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novel
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coronavirus
‑ꢀ
(SARS
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CoV2)获得。许多早期病例大型海鲜和动物市场有关，该病毒被认为具有人畜共患疾病来源。Perlman,Another Decade,AnotherCoronavirus.NEJM(24January 2020)；doi:10.1056/NEJMe200112610；CWu,Joseph et al.,The Lancet(31January 2020)；doi:10.1016/S0140
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6736 (20)30260
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9。对该病毒和其它病毒样品的基因序列的比较显示与 SARS
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CoV(79.5％)和蝙蝠冠状病毒(96％)具有相似性(Zhou,et al.,Apneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable batorigin,Nature(Feb.3,2020；1
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4；doi:10.1038/s41586
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020
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2012
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7)，并且 SARS
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CoV2与β冠状病毒成簇，与两种蝙蝠来源的SARS样菌株一起形成沙贝病毒(Sarbecovirus)亚属的谱系B中的不同进化枝。该病毒的起源尚不清楚。与SARS
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CoV类似，最新研究证实血管紧张素转化酶2 (ACE 2)，一种膜外肽酶，是SARS
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CoV2用于进入人类细胞使用的受体。
[0011]为了控制爆发扩散，已经在全世界各地实施了隔离和旅行限制。尽管如此，截至2021年2月，全世界已经报告了超过1.07亿个个体病例，并且超过230万例死亡，估计该病毒的死亡率为约0.7％。
[0012]产生用于人类冠状病毒的治疗性疫苗的历史说明了该问题的复杂性和挑战性。尽管分别在2012年和2003年发现了该病毒，但是仍然没有针对MERS
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CoV和SARS
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CoV的商业疫苗。实现安全性、耐受性和必需的免疫原性持续时间的期望结果的框架和抗原组分的选择是困难的，并且可能涉及多次失败。
[0013]正在开发许多疫苗以减少或预防SARS
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CoV2感染。在2020年12 月11日，美国食品药品监督管理局(FDA)颁布了对Pfizer
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BioNTechCOVID
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19疫苗(BNT162b2)在16岁及以上人员中预防COVID
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19的紧急使用授权(EUA)。在2020年12月18日，美国食品和药物管理局颁布了对第二种疫苗的紧急使用授权(EUA)，以预防由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)引起的冠状病毒疾病2019 (COVID
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19)。紧急使用授权允许ModernatX公司的COVID
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19疫苗 (mRNA
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1272)在美国销售，用于18岁及以上的个体。Pfizer和Modema 疫苗都是仅编码SARS
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CoV2刺突蛋白的mRNA疫苗。
[0014]与其他SARS相关冠状病毒一样，SARS
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CoV2已显示高突变率，这种突变率驱使SARS
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CoV2进化和基因组变异性，从而潜在地使 SARS
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CoV2逃避宿主免疫和目前疫苗提供的免疫。自从最初报告 SARS
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CoV2基因组序列以来，已经鉴定了大量SARS
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CoV2变体，这些变体可能潜在地影响各种疫苗接种策略的治疗功效。例如，最近在结构刺突蛋白中鉴定的大量突变已经引起了疫苗策略可能由于突变逃逸而变得无效的担忧。最近对刺突蛋白的突变已经本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组修饰的安卡拉痘苗(rMVA)病毒载体，其包含编码来源于严重急性呼吸综合征
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冠状病毒2(SARS
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CoV2)的刺突(S)蛋白、其肽片段或变体，膜(M)蛋白和包膜(E)蛋白的异源核酸序列，所述异源核酸序列可操作地连接至与痘病毒表达系统相容的启动子，其中，在宿主细胞中表达时，所述S蛋白、其肽片段或变体，M蛋白和E蛋白能够一起形成病毒样颗粒。2.权利要求1的rMVA，其中所述异源核酸序列编码全长S蛋白。3.权利要求1或2的rMVA，其中所述全长S蛋白包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。4.权利要求3的rMVA，其中所述全长S蛋白包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。5.权利要求1
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2的rMVA，其中编码所述S蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：3，或与其至少95％同源的序列。6.权利要求5的rMVA，其中编码所述全长S蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：3。7.权利要求1或2的rMVA，其中所述全长S蛋白包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。8.权利要求7的rMVA，其中所述全长S蛋白包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列。9.权利要求1
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8的rMVA，其中所述E蛋白包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。10.权利要求9的rMVA，其中所述E蛋白包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列。11.权利要求1
‑
10的rMVA，其中编码所述E蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：42，或与其至少95％同源的序列。12.权利要求11的rMVA，其中编码所述E蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：42。13.权利要求1
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12的rMVA，其中所述M蛋白包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。14.权利要求13的rMVA，其中所述M蛋白包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列。15.权利要求1
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14的rMVA，其中编码所述M蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：45，或与其至少95％同源的序列。16.权利要求15的rMVA，其中编码所述E蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：45。17.权利要求1的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：1、40和43的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。18.权利要求17的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：1、40和43的氨基酸序列。19.权利要求1的rMVA，其中所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：3、42和45，或与其至少95％同源的序列。20.权利要求19的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：3、42和45。21.权利要求1的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：6、40和43的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。22.权利要求21的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：6、40和43的氨基酸序列。23.权利要求1
‑
22的rMVA，其中所述S蛋白包含一个或多个选自K986P、V987P、K417T、
K417N、E484K或N501Y的氨基酸取代。24.权利要求23的rMVA，其中所述S蛋白包含氨基酸取代K417T、E484K和N501Y。25.权利要求1
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24的rMVA，其中编码所述S蛋白、E蛋白和M蛋白的所述异源核酸序列可操作连接至一个或多个选自p11启动子、pmH5启动子、pH5启动子、p7.5启动子、pSyn和pHyb的与痘病毒表达系统相容的启动子。26.权利要求25的rMVA，其中所述启动子为p7.5启动子。27.权利要求26的rMVA，其中所述启动子为pmH5启动子。28.权利要求26的rMVA，其中所述启动子为p11启动子。29.权利要求27的rMVA，其中所述启动子为SEQ ID NO：154。30.权利要求28的rMVA，其中所述启动子为SEQ ID NO：155。31.权利要求1的rMVA，其中所述rMVA异源核酸序列包含选自SEQ ID NO：46、47、156的核酸序列。32.一种重组修饰的安卡拉痘苗(rMVA)病毒载体，其包含编码来源于严重急性呼吸综合征
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冠状病毒2(SARS
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CoV2)的稳定化的刺突(S)蛋白、其肽片段或变体，膜(M)蛋白和包膜(E)蛋白的异源核酸序列，所述异源核酸序列可操作地连接至与痘病毒表达系统相容的启动子，其中，在宿主细胞中表达时，所述稳定化的S蛋白、其肽片段或变体，M蛋白和E蛋白能够一起形成病毒样颗粒。33.权利要求32的rMVA，其中所述异源核酸序列编码全长稳定化的S蛋白。34.权利要求32或33的rMVA，其中所述全长稳定化的S蛋白包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。35.权利要求34的rMVA，其中所述全长稳定化的S蛋白包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列。36.权利要求32
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33的rMVA，其中编码所述稳定化的S蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：10，或与其至少95％同源的序列。37.权利要求36的rMVA，其中编码所述全长稳定化的S蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：10。38.权利要求32或33的rMVA，其中所述全长稳定化的S蛋白包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。39.权利要求38的rMVA，其中所述全长稳定化的S蛋白包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列。40.权利要求32
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39的rMVA，其中所述E蛋白包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。41.权利要求40的rMVA，其中所述E蛋白包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列。42.权利要求32
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41的rMVA，其中编码所述E蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：42，或与其至少95％同源的序列。43.权利要求42的rMVA，其中编码所述E蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：42。44.权利要求32
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43的rMVA，其中所述M蛋白包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。45.权利要求44的rMVA，其中所述M蛋白包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列。46.权利要求32
‑
45的rMVA，其中编码所述M蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：
45，或与其至少95％同源的序列。47.权利要求46的rMVA，其中编码所述E蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：45。48.权利要求32的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：8、40和43的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。49.权利要求48的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：8、40和43的氨基酸序列。50.权利要求32的rMVA，其中所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：10、42和45，或与其至少95％同源的序列。51.权利要求50的rMVA，其中所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：10、42和45。52.权利要求32的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：11、40和43的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。53.权利要求52的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：11、40和43的氨基酸序列。54.权利要求32的rMVA，其中所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：12、42和45，或与其至少95％同源的序列。55.权利要求54的rMVA，其中所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：12、42和45。56.权利要求32
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55的rMVA，其中编码所述S蛋白、E蛋白和M蛋白的所述异源核酸序列可操作地连接至一个或多个选自p11启动子、pmH5启动子、pH5启动子、p7.5启动子、pSyn和pHyb的与痘病毒表达系统相容的启动子。57.权利要求56的rMVA，其中所述启动子为p7.5启动子。58.权利要求56的rMVA，其中所述启动子为pmH5启动子。59.权利要求56的rMVA，其中所述启动子为p11启动子。60.权利要求58的rMVA，其中所述启动子为SEQ ID NO:154。61.权利要求59的rMVA，其中所述启动子为SEQ ID NO:155。62.权利要求32的rMVA，其中所述rMVA异源核酸序列选自包含SEQ ID NO：48、49、50、157、159、160的核酸序列，或与其至少95％同源的核酸序列。63.一种重组修饰的安卡拉痘苗(rMVA)病毒载体，其包含编码来源于严重急性呼吸综合征
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冠状病毒2(SARS
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CoV2)的刺突(S)蛋白受体结合结构域(RBD)的线性表位、膜(M)蛋白和包膜(E)蛋白的异源核酸序列，所述异源核酸序列可操作地连接至与痘病毒表达系统相容的启动子，其中，在宿主细胞中表达时，所述线性表位、M蛋白和E蛋白能够一起形成病毒样颗粒。64.权利要求63的rMVA，其中所述异源核酸序列编码所述S蛋白RBD结构域的氨基酸331
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524。65.权利要求63或64的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。66.权利要求65的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列。67.权利要求63
‑
66的rMVA，其中编码所述S蛋白RBD的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：24，或与其至少95％同源的序列。68.权利要求67的rMVA，其中编码所述S蛋白RBD的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：
24。69.权利要求63的rMVA，其中所述异源核酸序列编码所述S蛋白RBD结构域的氨基酸327
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524。70.权利要求63或69的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。71.权利要求70的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：20的氨基酸序列。72.权利要求63或69
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71的rMVA，其中编码所述S蛋白RBD的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：25，或与其至少95％同源的序列。73.权利要求72的rMVA，其中编码所述S蛋白RBD的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：25。74.权利要求63的rMVA，其中所述RBD结构域包含一个或多个选自K417N、K417T、E484K或N501Y的取代。75.权利要求74的rMVA，其中所述RBD结构域包含取代K417T、E484K和N501Y。76.权利要求63的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：33的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。77.权利要求77的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：33的氨基酸序列。78.权利要求63的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。79.权利要求78的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：32的氨基酸序列。80.权利要求63
‑
79的rMVA，其中所述E蛋白包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。81.权利要求80的rMVA，其中所述E蛋白包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列。82.权利要求63
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81的rMVA，其中编码所述E蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：42，或与其至少95％同源的序列。83.权利要求82的rMVA，其中编码所述E蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：42。84.权利要求62
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83的rMVA，其中所述M蛋白包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。85.权利要求84的rMVA，其中所述M蛋白包含SEQ ID NO：43的氨基酸序列。86.权利要求63
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85的rMVA，其中编码所述M蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：45，或与其至少95％同源的序列。87.权利要求86的rMVA，其中编码所述E蛋白的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：45。88.权利要求63的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：20、40和43的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。89.权利要求88的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：20、40和43的氨基酸序列。90.权利要求63的rMVA，其中所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：24、42和45，或与其至少95％同源的序列。91.权利要求90的rMVA，其中所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：24、42和45。92.权利要求63的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：21、40和43的氨基
酸序列，或与其至少95％同源的序列。93.权利要求92的rMVA，其中所述异源核酸序列编码包含SEQ ID NO：21、40和43的氨基酸序列。94.权利要求63的rMVA，其中所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：25、42和45，或与其至少95％同源的序列。95.权利要求63的rMVA，其中所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：25、42和45。96.权利要求63
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95的rMVA，其中所述S RBD结构域进一步包含来源于所述S蛋白的信号肽和跨膜肽。97.权利要求96的rMVA，其中所述S信号肽包含SEQ ID NO：55。98.权利要求96或97的rMVA，其中所述S跨膜肽包含SEQ ID NO：57。99.权利要求63
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98的rMVA，其中编码所述S蛋白、E蛋白和M蛋白的所述异源核酸序列可操作地连接至一个或多个选自p11启动子、pmH5启动子、pH5启动子、p7.5启动子、pSyn和pHyb的与痘病毒表达系统相容的启动子。100.权利要求99的rMVA，其中所述启动子为p7.5启动子。101.权利要求99的rMVA，其中所述启动子为pmH5启动子。102.权利要求99的rMVA，其中所述启动子为p11启动子。103.权利要求101的rMVA，其中所述启动子包含SEQ ID NO：154。104.权利要求102的rMVA，其中所述启动子包含SEQ ID NO：155。105.权利要求63的rMVA，其中所述rMVA异源核酸序列选自包含SEQ ID NO：51、52、53或54的序列，或与其至少95％同源的核酸序列。106.一种重组修饰的安卡拉痘苗(rMVA)病毒载体，其包含编码来源于严重急性呼吸综合征
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冠状病毒2(SARS
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CoV2)的刺突(S)蛋白受体结合结构域(RBD)的线性表位、膜(M)蛋白和包膜(E)蛋白的异源核酸序列，所述异源核酸序列可操作地连接至与痘病毒表达系统相容的启动子，其中，所述线性S表位RBD结构域进一步包含来源于所述S蛋白的信号肽和跨膜肽，其中，在宿主细胞中表达时，所述线性S表位RBD结构域、M蛋白和E蛋白能够一起形成病毒样颗粒。107.权利要求106的rMVA，其中所述S信号肽包含SEQ ID NO：55。108.权利要求106或107的rMVA，其中所述S跨膜肽包含SEQ ID NO：57。109.权利要求106
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108的rMVA，其中所述异源核酸序列编码所述S蛋白RBD结构域的氨基酸327
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524。110.权利要求106
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109的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列。111.权利要求110的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列。112.权利要求106
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110的rMVA，其中所述S蛋白RBD由包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列，或与其至少95％同源的序列编码。113.权利要求112的rMVA，其中所述S蛋白RBD由包含SEQ ID NO：65的核酸编码。114.权利要求106
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108的rMVA，其中所述异源核酸序列编码所述S蛋白RBD结构域的氨基酸327
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524。115.权利要求106
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108和114的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：62的氨基酸序
列，或与其至少95％同源的序列。116.权利要求115的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列。117.权利要求114
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117的rMVA，其中编码所述S蛋白RBD的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：66，或与其至少95％同源的序列。118.权利要求117的rMVA，其中编码所述S蛋白RBD的所述异源核酸序列包含SEQ ID NO：66。119.权利要求106的rMVA，其中所述RBD结构域包含一个或多个选自K417N、K417T、E484K或N501Y的取代。120.权利要求119的rMVA，其中所述RBD结构域包含取代K417T、E484K和N501Y。121.权利要求106的rMVA，其中所述S蛋白RBD包含SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：吉奥瓦科斯公司，
类型：发明
国别省市：