诊断或治疗胶质瘤的分子标记物及其应用制造技术

本发明专利技术提供诊断或治疗治胶质瘤的分子标记物及其应用。经试验研究证明，胶质瘤中microRNA‑588的表达在低氧状态下较常氧明显上调，体外实验结果显示miR‑588能抑制胶质瘤细胞的侵袭迁移和VM形成能力，为明确其中的分子机制，进一步实验发现Robo1是胶质瘤中miR‑588的直接和功能相关靶点。敲除Robo1能抑制基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)表达，进而抑制胶质瘤的侵袭迁移及VM形成能力。因此，miR‑588和Robo1可以作为诊治胶质瘤的分子标记物。

【技术实现步骤摘要】
诊断或治疗胶质瘤的分子标记物及其应用
本专利技术属于生物医药和分子生物学
，具体涉及诊断或治疗胶质瘤的分子标记物及其应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，发病率为3-8/10万，占颅内肿瘤的40-50％。胶质瘤的生物学特点主要包括高死亡率和高复发率，强侵袭能力，很强的血管生成能力和广泛的低氧状态。实性肿瘤如乳腺癌、肝癌、胶质瘤等生长迅速及相对应的血供不足，低氧微环境在这些肿瘤中普遍存在。肿瘤的低氧与低生存期直接相关。目前有很多研究证实低氧与肿瘤的增殖、侵袭迁移、血管生成等进展相关。此外，胶质瘤血供丰富，抗血管生成药物治疗胶质瘤的应用前景备受瞩目。然而，专利技术人发现，抗血管疗法临床应用后普遍存在疗效短暂和疗效欠佳的问题。1999年血管拟态(VasculogenicmimicryVM)概念的提出，使人们意识到在肿瘤组织中除了由内皮细胞构成的血管外，还有其他的血液供应形式。血管拟态是由肿瘤细胞在特定情况下模拟血管内皮细胞形成的一种功能上类似于正常血管的管道，与肿瘤微循环相通连，构成网状的血液输送循环，为肿瘤提供营养支持。目前已经证实，包括胶质瘤在内的多种恶性肿瘤中均存在血管拟态，并且其阳性率与肿瘤级别及患者的不良预后密切相关，低氧微环境与血管拟态形成息息相关。尽管目前已经有数个机制阐述低氧诱导的肿瘤细胞的侵袭迁移，仍有很多研究者在探讨miR(microRNA)在肿瘤低氧效应中的作用。MicroRNA是一系列内源性的20-22个核苷酸序列的单股非编码RNA，在转录后水平负相调节基因表达。在之前，有研究证实在肺癌、胃癌、乳腺癌等疾病中miR-588起抑癌作用，在前列腺癌中miR-588被发现具有促进肿瘤细胞增殖作用而表现为促癌基因。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供诊断或治疗治胶质瘤的分子标记物及其应用。经试验研究证明，胶质瘤中microRNA-588的表达在低氧状态下较常氧明显上调，体外实验结果显示miR-588能抑制胶质瘤细胞的侵袭迁移和VM形成能力，为明确其中的分子机制，进一步实验发现Robo1是胶质瘤中miR-588的直接和功能相关靶点。敲除Robo1能抑制基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)表达，进而抑制胶质瘤的侵袭迁移及VM形成能力。因此，miR-588和Robo1可以作为诊治胶质瘤的分子标记物。本专利技术是通过如下技术方案实现的：本专利技术的第一个方面，提供如下任意一种或多种物质在制备胶质瘤分子标记物中的应用，所述物质包括miR-588、Robo1基因及其表达产物、基质金属蛋白酶2(MMP2)基因及其表达产物和基质金属蛋白酶9(MMP9)基因及其表达产物。进一步的，所述应用中，所述标记物用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展。所述胶质瘤的进展包括胶质瘤细胞的迁移、侵袭和/或血管拟态(Vasculogenicmimicry,VM)形成；其中，所述miR-588、Robo1基因及其表达产物、MMP2基因及其表达产物、MMP9基因及其表达产物均可为人源。本专利技术的第二个方面，提供一种用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展的组合物，其包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测胶质瘤样品中miR-588、Robo1基因及其表达产物、MMP2基因及其表达产物和/或MMP9基因及其表达产物；或者基于免疫检测方法检测胶质瘤样品中miR-588调控的靶基因的表达情况、Robo1表达产物情况、MMP2蛋白表达情况和/或MMP9表达产物情况的物质。其中，所述miR-588调控的靶基因包括Robo1基因；优选采用Northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交检测胶质瘤样品中miR-588、Robo1、MMP2和/或MMP9的转录；采用ELISA、胶体金检测、蛋白芯片检测胶质瘤样品中miR-588调控的靶基因的表达情况、Robo1表达产物情况、MMP2蛋白表达情况和/或MMP9表达产物情况；进一步的，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包括用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展的组合物；所述胶质瘤的进展包括胶质瘤细胞的迁移、侵袭和/或血管拟态(Vasculogenicmimicry,VM)形成。本专利技术的第三个方面，提供能够促进miR-588表达和/或活性提高的物质、抑制Robo1基因及其表达产物和/或活性降低的物质、抑制MMP2基因及其表达产物和/或活性降低的物质、和/或抑制MMP9基因及其表达产物和/或活性降低的物质在如下(I)-(III)至少一种中的应用：(I)抑制胶质瘤细胞的迁移，或制备用于抑制胶质瘤细胞迁移的产品；(II)抑制胶质瘤细胞的侵袭，或者制备用于抑制胶质瘤细胞侵袭的产品；(III)抑制胶质瘤细胞的血管拟态，或者制备用于抑制胶质瘤细胞生长的产品。本专利技术的第四个方面，提供一种用于治疗或预防胶质瘤的药物组合物，其包含促进miR-588表达和/或活性提高的物质、抑制Robo1基因及其表达产物和/或活性降低的物质、抑制MMP2基因及其表达产物和/或活性降低的物质、和/或抑制MMP9基因及其表达产物和/或活性降低的物质；所述促进miR-588表达和/或活性提高的物质，包括采用基于RNA的microRNA功能性获得技术和/或基因特异性miRMimics技术上调miR-let-7i-5p表达和/或促进其活性；进一步优选为人工合成的miR-588短发夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)或上调miR-588表达的启动子。所述抑制Robo1基因及其表达产物和/或活性降低的物质，包括Robo1蛋白特异的抗体、针对Robo1mRNA的RNA干扰分子或反义寡核苷酸、小分子抑制剂、siRNA；进一步的，所述抗体为人抗体。所述抑制MMP2基因及其表达产物和/或活性降低的物质，包括MMP2蛋白特异的抗体、针对MMP2mRNA的RNA干扰分子或反义寡核苷酸、小分子抑制剂、siRNA；进一步的，所述抗体为人抗体。所述抑制MMP9基因及其表达产物和/或活性降低的物质，包括MMP9蛋白特异的抗体、针对MMP9mRNA的RNA干扰分子或反义寡核苷酸、小分子抑制剂、siRNA；进一步的，所述抗体为人抗体。在本专利技术中，“治疗或预防”指的是能够抑制胶质瘤细胞的迁移、侵袭和/或血管拟态。进一步的，所述药物组合物还可以包含通常使用的适量载体、赋形剂及稀释剂。而且，根据通常的方法，可以制作成粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、喷雾剂等的口服剂、外用剂、栓剂及无菌注射溶液形式的剂型使用。可以包含的载体、赋形剂及稀释剂有乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油等。本专利技术有益效果：本专利技术首次证明胶质瘤中microRNA-588的表达在低氧状态下较常氧明显上调，而且体外实验结果显示miR-588能抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如下任意一种或多种物质在制备胶质瘤分子标记物中的应用，所述物质包括miR‑588、Robo1基因及其表达产物、MMP2基因及其表达产物和MMP9基因及其表达产物。

【技术特征摘要】
1.如下任意一种或多种物质在制备胶质瘤分子标记物中的应用，所述物质包括miR-588、Robo1基因及其表达产物、MMP2基因及其表达产物和MMP9基因及其表达产物。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述标记物用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展。3.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述胶质瘤的进展包括胶质瘤细胞的迁移、侵袭和/或血管拟态形成；优选的，所述miR-588、Robo1基因及其表达产物、MMP2基因及其表达产物、MMP9基因及其表达产物均为人源。4.一种用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展的组合物，其特征在于，其包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测胶质瘤样品中miR-588、Robo1基因及其表达产物、MMP2基因及其表达产物和/或MMP9基因及其表达产物；或者基于免疫检测方法检测胶质瘤样品中miR-588调控的靶基因的表达情况、Robo1表达产物情况、MMP2蛋白表达情况和/或MMP9表达产物情况的物质。优选的，所述miR-588调控的靶基因包括Robo1基因。5.如权利要求4所述的一种组合物，其特征在于，采用Northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交检测胶质瘤样品中miR-588、Robo1、MMP2和/或MMP9的转录；采用ELISA、胶体金检测、蛋白芯片检测胶质瘤样品中miR-588调控的靶基因的表达情况、Robo1表达产物情况、MMP2蛋白表达情况和/或MMP9表达产物情况。6.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求4或5所述用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展的组合物。7.促进miR-588表达和/或活性提高的物质、抑制Robo1基因及其表达产物和/或活性降低的物质、抑制MMP2基...

【专利技术属性】
技术研发人员：李刚，薛皓，于锐，孙中正，郭钦栋，申杰，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：山东,37