一种诊治胶质瘤的分子标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种诊治胶质瘤的分子标志物及其应用。本发明专利技术首次公开了GALE(UDP‑半乳糖‑4‑差向异构酶)基因及其表达产物在胶质瘤中上调表达，且与胶质瘤分级的增加呈正相关；同时，研究进一步发现，miR‑let‑7i‑5p具有靶向调控GALE基因的作用，miR‑let‑7i‑5p通过与通过GALE 3'‑UTR结合，抑制GALE蛋白产生，从而降低胶质瘤细胞增殖和迁移，诱导人胶质瘤细胞周期阻滞和凋亡。因此，miR‑let‑7i‑5p和GALE基因及其表达产物可以作为诊治胶质瘤的分子标志物。

【技术实现步骤摘要】
一种诊治胶质瘤的分子标志物及其应用
本专利技术属于生物医药和分子生物学
，具体涉及一种诊治胶质瘤的分子标志物及其应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。人脑胶质瘤是最常见和最致命的原发性脑瘤，约占所有原发性脑肿瘤的75％。根据世界卫生组织(世卫组织)，胶质瘤在组织病理学上分为4个肿瘤级别(I-IV)。世卫组织IV级或多型胶质母细胞瘤(GBM)预后最差，在初次诊断后，平均生存时间仅为12至15个月。miRNA是一类内源性20-22核苷酸(nt)长的单链非编码rna，已被确认为转录后水平基因表达的负调控因子。microRNA(miRNA)在人类癌症的发生发展、进展和复发中发挥了重要作用。Let-7首先在秀丽隐杆线虫中被鉴定为一种基因，由于幼虫生长异常，其突变对这些生物是致命的。生物信息学分析表明let-7microRNA在不同动物物种中高度保守，支持其在早期发育阶段的关键作用。Let-7确保与退出细胞周期和终端分化相关的事件的正确时间。专利技术人发现，miR-let-7家族低水平表达已在许多胶质瘤中得到报道，包括胰腺癌、人类结肠癌、人类肺癌和乳腺癌细胞。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供一种诊治胶质瘤的分子标志物及其应用。经试验研究证明，GALE(UDP-半乳糖-4-差向异构酶)基因及其表达产物在胶质瘤中上调表达，且与胶质瘤分级的增加呈正相关；同时，研究进一步发现，miR-let-7i-5p具有靶向调控GALE基因的作用，miR-let-7i-5p通过与通过GALE3'-UTR结合，抑制GALE蛋白产生，从而降低胶质瘤细胞增殖和迁移，诱导人胶质瘤细胞周期阻滞和凋亡。因此，miR-let-7i-5p和GALE基因及其表达产物可以作为诊治胶质瘤的分子标志物。本专利技术是通过如下技术方案实现的：本专利技术的第一个方面，提供miR-let-7i-5p和/或GALE基因及其表达产物在制备胶质瘤分子标志物中的应用。进一步的，miR-let-7i-5p和/或GALE基因及其表达产物在制备胶质瘤分子标志物中的应用，所述标志物用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展。所述胶质瘤的进展包括胶质瘤细胞的增殖、生长和/或迁移；所述胶质瘤包括低级别胶质瘤(I-II级)和高级别胶质瘤(III-IV级)；其中，所述miR-let-7i-5p和/或GALE基因及其表达产物均可为人源。本专利技术的第二个方面，提供一种用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展的组合物，其包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测胶质瘤样品中miR-let-7i-5p和/或GALE的转录；或基于免疫检测方法检测胶质瘤样品中miR-let-7i-5p调控的靶基因的表达情况或GALE表达产物情况的物质。其中，所述靶基因包括GALE基因；优选采用Northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交检测胶质瘤样品中miR-let-7i-5p和/或GALE的转录；采用ELISA、胶体金试纸条、蛋白芯片检测胶质瘤样品中miR-let-7i-5p调控的靶基因的表达情况或GALE表达产物情况；更进一步的，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包括用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展的组合物。本专利技术的第三个方面，提供能够促进miR-let-7i-5p表达和/或活性提高的物质和/或抑制GALE基因及其表达产物和/或活性降低的物质在如下(a')-(c')至少一种中的应用：(a')抑制胶质瘤细胞的迁移，或制备用于抑制胶质瘤细胞迁移的产品；(b')抑制胶质瘤细胞的增殖，或者制备用于抑制胶质瘤细胞增殖的产品；(c')抑制胶质瘤细胞的生长，或者制备用于抑制胶质瘤细胞生长的产品。所述胶质瘤包括低级别胶质瘤(I-II级)和高级别胶质瘤(III-IV级)；本专利技术的第四个方面，提供一种用于治疗或预防胶质瘤的药物组合物，其包含促进miR-let-7i-5p表达和/或活性提高的物质和/或抑制GALE基因及其表达产物和/或活性降低的物质；对于促进miR-let-7i-5p表达和/或活性提高的物质而言，包括采用基于RNA的microRNA功能性获得技术和/或基因特异性miRMimics技术上调miR-let-7i-5p表达和/或促进其活性；优选为人工合成miR-let-7i-5p的短发夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)或上调miR-let-7i-5p表达的启动子。对于抑制GALE基因及其表达产物和/或活性降低的物质而言，包括GALE蛋白特异的抗体、针对GALEmRNA的RNA干扰分子或反义寡核苷酸、小分子抑制剂、siRNA；进一步的，所述抗体为人抗体。在本专利技术中，“治疗或预防”指的是能够抑制胶质瘤细胞的迁移、增殖和/或生长。进一步的，所述药物组合物还包含至少一种或多种药学上或食品学上可接受的辅料。所用辅料可为固态或液态。优选的，所述药物为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。进一步优选的，所述药物为片剂、分散片、肠溶片、咀嚼片、口崩片、胶囊、糖衣剂、颗粒剂、干粉剂、口服溶液剂、注射用小水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。本专利技术有益效果：本专利技术首次证明GALE(UDP-半乳糖-4-差向异构酶)基因及其表达产物在胶质瘤中上调表达，且与胶质瘤分级的增加呈正相关；同时，研究进一步发现，miR-let-7i-5p具有靶向调控GALE基因的作用，miR-let-7i-5p通过与通过GALE3'-UTR结合，抑制GALE蛋白产生，从而降低胶质瘤细胞增殖和迁移，诱导人胶质瘤细胞周期阻滞和凋亡。因此，miR-let-7i-5p和GALE基因及其表达产物可以作为诊治胶质瘤的分子标志物，为胶质瘤等相关疾病的诊断和治疗提供了新的靶点，从而指导临床医师为受试者提供预防方法或者治疗方案，就有良好的实际应用之价值。附图说明图1为GALE的表达与胶质瘤的肿瘤分级相关系列图；其中，图1a为定量分析TCGA数据集中GALEmRNA在胶质瘤中的表达水平图；图1b和图1c分别是在TCGA(n＝667)数据库中分析GALE在低级别胶质瘤LGG和胶质母细胞瘤GBM患者中的预后意义图；图1d为不同级别胶质瘤和正常脑标本GALE免疫组化染色的代表性图，图1d中上方图放大倍数×200，下方图放大倍数×400，分界点设在GALE表达量的中值。*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。图2为GALE沉默可降低胶质瘤细胞的增殖系列图；其中，图2a和图2b为实时荧光定量PCR分析显示，si-GALE转染后GALE的相对mRNA水平显著降低，以GAPDH为对照，免疫印迹的溶解产物(12μg)从U87和U251细胞转染和阴性对照(NC)和GALEsiRNAs孵化与GALE抗体；β-Actin作为内参；图2c和图2d为CCK-8检测基于OD450的U87和U251细胞生长曲线图；图2e和图2f为EdU分析在转染48小时后进行图；图2g为si-GALE处理胶质母细胞瘤细胞克隆性降低图。*P<0.05；**P<0.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miR‑let‑7i‑5p和/或GALE基因及其表达产物在制备胶质瘤分子标志物中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-let-7i-5p和/或GALE基因及其表达产物在制备胶质瘤分子标志物中的应用。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述胶质瘤分子标志物用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展。3.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述胶质瘤的进展包括胶质瘤细胞的增殖、生长和/或迁移；优选的，所述胶质瘤包括低级别胶质瘤(I-II级)和高级别胶质瘤(III-IV级)。4.一种用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展的组合物，其特征在于，包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测胶质瘤样品中miR-let-7i-5p和/或GALE的转录；或基于免疫检测方法检测胶质瘤样品中miR-let-7i-5p调控的靶基因的表达情况或GALE表达产物情况的物质；其中，所述靶基因包括GALE基因；优选的，采用Northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交检测胶质瘤样品中miR-let-7i-5p和/或GALE的转录；采用ELISA、胶体金试纸条、蛋白芯片检测胶质瘤样品中miR-let-7i-5p调控的靶基因的表达情况或GALE表达产物情况。5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求4所述用于诊断、检测、监测或预测胶质瘤的进展的组合物。6.促进miR-let-7i-5p表达和/或活性提高的物质和/或抑制GALE基因及...

【专利技术属性】
技术研发人员：李刚，薛皓，孙晓朋，邓林，郭兴，于锐，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：山东,37