环介导恒温扩增结合纳米生物传感检测肺炎支原体的方法技术

本发明专利技术公开了一种环介导恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测肺炎支原体特异基因P1的方法，本发明专利技术还提供了用于上述扩增的一组引物序列。所述方法在环介导恒温扩增中的内引物FIP的5’端标记荧光素(FITC)，在环引物LF的5’端标记生物素(biotin)，所述方法针对肺炎支原体特异基因P1的扩增产物能被纳米生物传感器可视化检测。所述方法便捷、快速、敏感、特异，灵敏度范围为60ng～600fg，并能准确地鉴别肺炎支原体，具有优异的特异性。

【技术实现步骤摘要】
环介导恒温扩增结合纳米生物传感检测肺炎支原体的方法
本专利技术公开了一种基因扩增方法，属于分子生物学

技术介绍
肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)，属柔膜体纲，支原体目，支原体科，支原体属，它是介于细菌和病毒之间的能在无生命培养基中生长繁殖的最小的原核生物。MP是社区获得性肺炎的重要病原体之一，约占社区获得性肺炎的10％-40％，在流行高峰年或者在半封闭的空间MP感染率甚至可高达50％-80％，在某些地区MP甚至已经超过肺炎链球菌成为最常见的社区获得性肺炎的病原菌。MP感染在人群中呈现常年散发和周期性流行的特点，一般每3-7年会有区域性的MP流行高峰出现。同时，MP可在人群中暴发流行，易发生在封闭或半封闭的环境中，特别是学校、军营和养老院是暴发流行的好发地点。MP在各年龄均可发病，尤其是儿童和青少年。MP感染后临床症状呈现多样性，轻者可无任何症状，重者除了可引起常见的呼吸系统疾病，如发热、咳嗽、咳痰、全身不适、支气管炎、细支气管炎、肺不张、呼吸窘迫等，还可以引起全身多系统肺外并发症，涉及到血液系统、心血管系统、消化系统、泌尿系统等。MP引起的临床症本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种环介导恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法包括以下步骤：(1)提取待检测样品的基因组；(2)提供如SEQ ID NO：1所示的外引物F3，SEQ ID NO：2所示的外引物B3，SEQ ID NO：3所示的内引物FIP，SEQ ID NO：4所示的内引物BIP，SEQ ID NO：5所示的环引物LF，SEQ ID NO：6所示的环引物LB，其中，选择以上任一引物的5’端标记半抗原，选择任意另一种引物的5’端标记生物素；(3)在链移位型聚合酶Bst 2.0、解链温度调节剂、引物、以及脱氧核糖核苷三磷酸存在下，使用待检测样品的基因组核酸作为模板恒温扩增DNA；(4)使...

【技术特征摘要】
1.一种环介导恒温扩增结合高分子纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法包括以下步骤：(1)提取待检测样品的基因组；(2)提供如SEQIDNO：1所示的外引物F3，SEQIDNO：2所示的外引物B3，SEQIDNO：3所示的内引物FIP，SEQIDNO：4所示的内引物BIP，SEQIDNO：5所示的环引物LF，SEQIDNO：6所示的环引物LB，其中，选择以上任一引物的5’端标记半抗原，选择任意另一种引物的5’端标记生物素；(3)在链移位型聚合酶Bst2.0、解链温度调节剂、引物、以及脱氧核糖核苷三磷酸存在下，使用待检测样品的基因组核酸作为模板恒温扩增DNA；(4)使用高分子纳米生物传感器检测步骤(3)的扩增产物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在5’端标记有半抗原的引物为FIP，在5’端标记有生物素的引物为LF。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在引物FIP的5’端标记的半抗原为FITC。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述高分子纳米生物传感器包括一背板，在所述背板上依次设置装有样品垫、结合垫...

【专利技术属性】
技术研发人员：申阿东，王亚翠，王毅，焦伟伟，孙琳，李洁琼，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京儿童医院，
类型：发明
国别省市：北京,11