一种山核桃多肽的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种山核桃多肽的提取方法，所述方法为：将脱脂山核桃粉，加入固相试剂中混合，在5～30Hz的条件下机械球磨混匀，获得球磨粉末；将球磨粉末加入缓冲溶液充分混合，调节pH值至8～9，加入碱性蛋白酶，在45～55℃的条件下酶解完全后，灭酶，将灭酶后的溶液离心，收集上清液，透析，获得山核桃多肽。本发明专利技术采用了机械化学结合酶解技术制备山核桃多肽，与传统酶解比较，脱脂山核桃粉与固相试剂进行共研磨粉碎,植物细胞壁在反复机械应力作用下破裂,有利于蛋白质等大分子的溶出，不仅缩短了酶解时间，改善了酶解效果，而且与普通酶解相比，山核桃多肽得率可以提高64.9％。

【技术实现步骤摘要】
一种山核桃多肽的提取方法
本专利技术属于食品或保健食品加工
，具体涉及一种利用机械化学辅助技术制备山核桃多肽并初步精制的方法。
技术介绍
山核桃(Caryacathayensis)是胡桃科(Juglandaceae)山核桃属(Carya)落叶乔木，别名野核桃、麻核桃，山核桃属的植物全世界共有18个种，2个亚种，我国为其原产地之一。山核桃在我国南北均有分布，云南、湖南、贵州、浙江等地区为我国山核桃的主产区。山核桃味甘，性平，始载于公元3世纪晋代张华所著《博物志》，后陶弘景的《名医别录》和李时珍的《本草纲目》亦有记载。其具有补气益血、调燥化痰、温补肾肺、解毒消肿等功效(李时珍.本草纲目[M].北京:中国档案出版社,2002:89-93)。山核桃全身都是宝，山核桃仁能滋养血脉、增进食欲、乌黑须发，调节神经衰弱、记忆衰退；鲜根皮煎汤浸洗，治脚痔；鲜外果皮捣取汁，擦治皮肤癣等症等(《浙江天目山药植志》[M].北京:科学出版社,2001:88-91)。现代研究表明，山核桃具有抗肿瘤、抑菌、抗氧化等作用。山核桃仁中含有丰富的蛋白质，章亭洲(章亭洲.山核桃的营养、生物学特性及开发利用现状[J].食品与发酵工业,2006,3218(6):90-93)检测发现山核桃蛋白质含量为7.8％-9.6％，氨基酸含量高达25％，王冀平(王冀平,李亚南,马建伟.山核桃仁中主要营养成分的研究[J].食品科学,1998,19(4):44-46)等检测了山核桃干制品的蛋白质含量为28.1％，山核桃中含有17种氨基酸，总量达到27.198％。其值与胡桃相似，而其中以谷氨酸含量最高，占总量的20.19％，精氨酸含量次之，占总量的13.22％。谷氨酸具有健脑作用，能促进脑细胞进行呼吸，有利于脑组织中的氨排除，而精氨酸对于心脑血管疾病等老年慢性疾病有显著的保健作用。山核桃中还含有丰富的必需氨基酸，比例达到49.41％，丰富的必需氨基酸表明山核桃蛋白质具有丰富的营养价值。近年来科学研究发现，人类摄取蛋白质经消化酶作用后，并非主要以氨基酸的形式吸收，而是以肽的形式吸收，一些肽不仅能提供人体生长、发育所需的营养物质，同时具有多种生理功能，如改善和提高矿物质运输和吸收、抗菌和病毒、提高免疫力、抗氧化、降胆固醇、抗癌作用，清除自由基抗衰老以及抗高血压和高血脂等。目前，生物活性肽的提取方法有酸水解法、碱水解法和酶解法。酸、碱水解多肽时，水解得到肽的片段长短不易控制，并且使部分氨基酸被破坏，污染了蛋白质。而酶解反应条件较为温和，水解程度易控制，对氨基酸破坏和环境污染程度低，且酶具有高效性和专一性，水解蛋白质得到产物的分子量分布比较均一。因此，目前提取多肽一般采用酶水解法(陈永浩.核桃蛋白肽制备及脱苦研究进展[J].安徽农业科学,2012,40(24):12219-12221)。酶法制备核桃多肽的研究比较多(CN101228918A)，该专利技术通过超声波法提取核桃蛋白质，将核桃蛋白质进行酶解，离心，取上清液，将上清液进行透析，去掉杂质和大分子化合物，然后对得到的透析液进行浓缩，最后再进行真空干燥，制成多肽粉。然而，核桃蛋白的普通酶解存在酶解时间较长、得率较低的缺点。近年来，机械化学在提取中的应用越来越广，这归功于机械化学打破植物细胞壁，提高有效成分的提取率，可以达到简化工艺，降低成本，减少环境污染的目的。目前，对于山核桃的利用除了直接加工食用外，部分用于油脂榨取，而压榨后的山核桃饼粕的综合利用研究报道甚少。大量的脱脂山核桃渣被作为饲料和肥料或丢弃，其附加值较低。为充分利用我国的山核桃资源并提高它的经济价值，对其进行深加工研究显得尤为重要。本专利技术同时以山核桃饼粕为原料，研究山核桃多肽的制备，为山核桃饼粕的综合利用和新产品开发提供技术依据。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种山核桃多肽的提取方法，在高能机械力以及辅助化学试剂的作用下，植物细胞壁在物理及化学作用下颗粒度减小并产生裂缝，有利于蛋白质等大分子物质的溶出；无需使用大量的酸碱试剂，绿色环保且能在比较温和的条件下高效快速提取山核桃多肽，使其在生产工艺上缩短繁琐的步骤，减少成本，达到高效、环保等优点。为了实现上述目的，本专利技术提出如下技术方案：本专利技术提供一种山核桃多肽的提取方法，所述方法按如下步骤进行：(1)将山核桃仁干燥、粉粹，再用正己烷在69℃下回流提取(优选重复提三次，每次1小时)，真空抽滤，滤饼干燥，获得脱脂山核桃粉。(2)将步骤(1)得到的脱脂山核桃粉，加入固相试剂中混合，在5～30Hz(优选为15～25Hz)的条件下机械球磨混匀，获得球磨粉末；所述固相试剂为下列之一：氢氧化钠、氢氧化钾、硼酸、柠檬酸、硅胶、碳酸钙、碳酸钠、碳酸氢钠、氯化钾、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、十二烷基硫酸钠或硼砂中的一种或几种任意比例的混合物；(3)将步骤(2)获得的球磨粉末加入缓冲溶液充分混合，调节pH值至8～9，加入碱性蛋白酶，在45～55℃的条件下酶解完全后，灭酶，将灭酶后的溶液离心(优选在7500r/min离心机上离心10min)，收集上清液，用截留分子量为0.3kDa的透析膜于去离子水中透析(优选3天)，收集截留液，冷冻干燥，获得山核桃多肽。进一步，步骤(1)中所述山核桃仁包括新鲜山核桃仁、山核桃仁熟制品、或山核桃仁榨油饼粕。进一步，步骤(1)所述正己烷体积用量以山核桃仁重量计为5ml/g。进一步，步骤(1)滤饼干燥后过40目筛，获得脱脂山核桃粉。进一步，步骤(2)所述固相试剂为下列之一：氢氧化钠、柠檬酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钾、碳酸钙、氢氧化钠与碳酸钙质量比1:1的混合、氢氧化钠与碳酸钠质量比1:1的混合、氢氧化钠与磷酸氢二钠质量比1:1的混合、氢氧化钠与磷酸二氢钠质量比1:1的混合。进一步，步骤(2)所述球磨是在粒径8mm的氧化锆球磨珠作用下进行，个数为6～20个，优选为8～14个。进一步，步骤(2)所述机械球磨方法为：球磨10min、间歇5min为一个周期，共研磨1～10个周期，优选为3～8个周期。进一步，步骤(2)所述固相试剂与脱脂山核桃粉质量比为0.01～0.1:1，优选为0.02～0.06:1。进一步，步骤(3)所述缓冲溶液加入量以球磨粉末重量计为10～100ml/g，优选为20～60ml/g；所述缓冲溶液为pH9的磷酸盐或硼酸-硼砂缓冲溶液。进一步，步骤(3)所述碱性蛋白酶优选地衣芽孢杆菌蛋白酶，酶活200U/mg，所述碱性蛋白酶与球磨粉末质量比为1～6:100，优选为1.5～3:100。进一步，步骤(3)所述酶解条件为在45～55℃、转速为170rpm的摇床中振摇酶解30～90min，优选为60～90min。进一步，步骤(3)所述灭酶为沸水浴中灭酶10min。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术采用了机械化学结合酶解技术制备山核桃多肽，与传统酶解比较，脱脂山核桃粉与固相试剂进行共研磨粉碎,植物细胞壁在反复机械应力作用下破裂,有利于蛋白质等大分子的溶出，不仅缩短了酶解时间，改善了酶解效果，而且与普通酶解相比，山核桃多肽得率可以提高64.9％。(2)实现了山核桃资源综合利用，山核桃富含优质脂肪以及高质量的蛋白，本专利技术以山核桃为原料，研究山核桃多肽的制备，实现了山核本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山核桃多肽的提取方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：(1)将山核桃仁干燥、粉粹，再用正己烷在69℃下回流提取，真空抽滤，滤饼干燥，获得脱脂山核桃粉；(2)将步骤(1)得到的脱脂山核桃粉，加入固相试剂中混合，在5～30Hz的条件下机械球磨混匀，获得球磨粉末；所述固相试剂为下列之一：氢氧化钠、柠檬酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钾、碳酸钙、碳酸钠一种或几种任意比例的混合物；(3)将步骤(2)获得的球磨粉末加入缓冲溶液充分混合，调节pH值至8～9，加入碱性蛋白酶，在45～55℃的条件下酶解完全后，灭酶，将灭酶后的溶液离心，收集上清液，用截留分子量为0.3kDa的透析膜于去离子水中透析，收集截留液，冷冻干燥，获得山核桃多肽。

【技术特征摘要】
1.一种山核桃多肽的提取方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：(1)将山核桃仁干燥、粉粹，再用正己烷在69℃下回流提取，真空抽滤，滤饼干燥，获得脱脂山核桃粉；(2)将步骤(1)得到的脱脂山核桃粉，加入固相试剂中混合，在5～30Hz的条件下机械球磨混匀，获得球磨粉末；所述固相试剂为下列之一：氢氧化钠、柠檬酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钾、碳酸钙、碳酸钠一种或几种任意比例的混合物；(3)将步骤(2)获得的球磨粉末加入缓冲溶液充分混合，调节pH值至8～9，加入碱性蛋白酶，在45～55℃的条件下酶解完全后，灭酶，将灭酶后的溶液离心，收集上清液，用截留分子量为0.3kDa的透析膜于去离子水中透析，收集截留液，冷冻干燥，获得山核桃多肽。2.如权利要求1所述山核桃多肽的提取方法，其特征在于步骤(1)中所述山核桃仁包括生新鲜山核桃仁、山核桃仁熟制品或山核桃仁榨油饼粕。3.如权利要求1所述山核桃多肽的提取方法，其特征在于步骤(1)所述正己烷体积用量以山核桃仁重量计为5ml/g。4.如权利要求1所述山核桃多肽的提取方法，其特征在于步骤(1)滤饼干燥后过40目筛，获得脱脂山核桃...

【专利技术属性】
技术研发人员：许文灏，王鲁黔，苏为科，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33