α-转氨酶及突变体以及在不对称合成L-草铵膦中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种新型转氨酶及其高活力突变体在制备L‑草铵膦中的应用，转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID:5所示，其突变体是将SEQ ID:5所示的氨基酸序列的第124、144、237、250、和328位中的一个或者多个进行单位点突变或多位点突变获得的。本发明专利技术实现高转化率转氨酶活力突变体基因的高效表达，酶活最高为840U/mg。本发明专利技术中所述转氨酶突变体的最适反应温度最高达到67℃，在该温度下催化800mM草铵膦前体酮利用无机胺正丁胺不对称合成L‑草铵膦中，转化率高达100％。该AcTA突变体解决了当前转氨酶制备L‑草铵膦工艺中，酶源少、酶活低、底物耐受性和氨基供体昂贵等技术难题，具有较好应用前景。

【技术实现步骤摘要】
α-转氨酶及突变体以及在不对称合成L-草铵膦中的应用(一)
本专利技术涉及一种新型转氨酶及其高活力突变体，及其在不对称合成L-草铵膦中的应用。(二)
技术介绍
草铵膦，4-[羟基(甲基)膦酰基]-DL-高丙氨酸(phosphinothricin,PPT)，为广谱、触杀型、灭生性、非残留的除草剂，具有高效、低毒、易降解等特点。PPT是外消旋体混合物，包含两种光学异构体，但只有L-型具有植物毒性。自除草剂草甘膦退出农药市场，制备光学纯L-PPT获得前所未有的市场机遇。制备光学纯L-PPT主要有化学合成法、手性拆分法和不对称合成法。化学合成法工艺步骤繁多，所需要的合成试剂价格昂贵，导致成本投入高，而且部分试剂对环境和人体都有一定的毒害作用，无法满足当今的绿色环保要求。手性拆分制备光学纯L-PPT过程用到手性试剂，拆分收率最高仅为50％，得到的D-PPT需要消旋后再利用，手性拆分过程复杂。不对称合成法具有立体选择性严格、反应条件温和，收率高以及容易分离纯化等优点，适用于大规模制备L-PPT。催化此类反应的酶主要包括谷氨酸脱氢酶和转氨酶，底物为草铵膦前体酮(2-羰基-4-(羟基甲基磷酰基)-丁本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种α‑转氨酶，氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

【技术特征摘要】
1.一种α-转氨酶，氨基酸序列如SEQIDNO：5所示。2.一种α-转氨酶突变体，由序列如SEQIDNO：5所示的氨基酸经定点突变而来，所述突变的位点为下列中的一个或多个：(1)第124位、(2)第144位、(3)第237位、(4)第250位、(5)第328位。3.如权利要求1所述的α-转氨酶突变体，其特征在于所述α-转氨酶突变体由序列如SEQIDNO：5所示的氨基酸经下列之一或多个位点突变而得：(1)第124位谷氨酰胺突变为亮氨酸，(2)第144位精氨酸突变为谷氨酸，(3)第237位脯氨酸突变为苏氨酸，(4)第250位苯丙氨酸突变为天冬酰胺，(5)第328位丙氨酸突变为酪氨酸。4.如权利要求1所述的α-转氨酶突变体，其特征在于所述α-转氨酶突变体氨基酸序列如SEQIDNO：7所示。5.权利要求1～4...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛亚平，贾东旭，郑裕国，刘子健，徐海鹏，李军良，金利群，柳志强，程峰，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33