一株高产血红素的洛伊希瓦氏菌基因工程菌及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种高产血红素的洛伊希瓦氏菌基因工程菌及其构建方法，通过转座子随机插入突变的方法获得一株深红色表型的洛伊希瓦氏菌（Shewanellaloihica）突变株，经基因鉴定和遗传互补实验证实ypiD基因被插入突变失活造成胞外红色物质的积累，经质谱鉴定该红色物质为血红素，随后又利用同源重组的方法敲除ypiD基因，从而得到高产血红素的洛伊希瓦氏菌工程菌PV‑4△ypjD，该菌株可在胞外分泌大量血红素，在摇瓶培养条件下，生物量（OD600）达到2.4‑2.6时，血红素产量为90‑120mg/L，具有较大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一株高产血红素的洛伊希瓦氏菌基因工程菌及其构建方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一株敲除基因ypjD的洛伊希瓦氏菌工程菌及其构建方法，所述的工程菌可用于生产血红素。
技术介绍
血红素是含有二价铁离子的原卟啉IX，而原卟啉IX含有4个吡咯环结构，广泛的存在于自然界中，从微生物到人体细胞中都含有该分子，它参与了很多生物过程，包括氧分子的转运和储存(血红蛋白和肌红蛋白)、氧化磷酸化作用中的电子传递(b-型细胞色素和c-型细胞色素)、碳氢化合物的氧化作用(细胞色素P450和细胞色素氧化酶)。而在微生物中，原卟啉IX主要是细胞色素、维生素B12及细菌叶绿素等合成的主要成分，进而参与菌体呼吸、光合作用、气体转运、过氧化物的降解等重要生理活动。在应用方面，根据血红素的分子结构和物理化学性质，我们可以知道它具有重要的生理功能和很高的使用价值。在医药领域，由于血红素中含有丰富的铁，易于被机体吸收利用，血红素铁有良好的促进骨髓造血和治疗动物溶血性和失血性贫血的作用，是人类迄今所知的最为理想的抗贫血药物。在食品方面，由于血红素是一类以卟啉环为结构的吡咯类色素，血红素在溶液中呈红色，是一种天然色本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株高产血红素的洛伊希瓦氏菌基因工程菌，其特征在于，所述工程菌是将洛伊希瓦氏菌(Shewanella loihica)PV‑4的基因ypjD敲除后获得的，基因ypjD的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一株高产血红素的洛伊希瓦氏菌基因工程菌，其特征在于，所述工程菌是将洛伊希瓦氏菌(Shewanellaloihica)PV-4的基因ypjD敲除后获得的，基因ypjD的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.权利要求1所述洛伊希瓦氏菌基因工程菌在生产血红素中的应用。3.权利要求1所述的高产血红素的洛伊希瓦氏菌基因工程菌的构建方法，包括以下步骤：(1)敲除洛伊希瓦氏菌染色体上编码具有限制性内切酶PstI和甲基化酶PstM活性的两个基因，序列如SEQIDNO.6和7所示，获得的菌株易于进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱东茹，戴景程，周集中，
申请(专利权)人：中国科学院水生生物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42