一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条及其制备方法，包括底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫组成，所述样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上。所述胶体金垫上包含有胶体金标记的通用型HA单克隆抗体mAb1，浓度为8～12μg/mL。所述胶体金的最大吸收波长为510～550nm。本发明专利技术胶体金试纸条可以实现血液样本中异嗜性抗体HA干扰物的快速、全面检测，结果直观、可靠，为临床工作者准确判读和分析实验结果提供可行性解决方案。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条及其制备方法
本专利技术属于临床检验
，尤其涉及一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条及其制备方法。
技术介绍
近二十年来，国内外大量文献报道了免疫分析实验中存在的假阳性、假阴性或其它特异性干扰现象。目前已知的干扰物有：溶血、高血脂、高胆红素、抗凝剂、补体、异嗜性抗体、自身抗体、结合蛋白、药物及其代谢物等，其中异嗜性抗体对双抗体夹心法免疫分析系统造成的干扰尤为严重。异嗜性抗体(HeterophilicAntibodies,HA)是存在于人类血液中，由已知或未知的抗原物质刺激人体产生的，可以与啮齿类动物免疫球蛋白相结合的一类抗体。HA可与试剂中抗体的Fc或者F(ab)区域的决定簇结合，从而干扰免疫反应。异嗜性抗体(HA)产生的主要途径有：类风湿性关节炎、流行性感冒、过敏、输血、自身免疫疾病、免疫抑制药物、心肌病变、注射疫苗、动物接触、特定食物(奶酪)、动物辅助治疗(胸腺细胞、胚胎细胞、羊细胞)、血液透析、母婴传递、肠胃炎(E.coli)等。根据大量文献报道，超过30％的人群血液样本中存在异嗜性抗体干扰。这些干扰作用对免疫分析结果的准确性是一个很大的威胁，已经引起业内的高度关注。我国临床医疗总误诊率为27.8％，比国际平均临床医疗总误诊率25％高2.8个百分点，其中恶性肿瘤误诊率为40％，抗体干扰是其中主要原因之一。一旦假阳性或假阴性结果没有被发现，患者将要承受不必要的治疗及身体和精神上的痛苦。因而，鉴定和排除这些干扰物成为当务之急。由于异嗜性抗体种类的多样性和复杂性，目前国内外针对异嗜性抗体HA干扰物的检测和鉴定方法，既不全面，也不成熟，主要鉴别方法有：1)系列稀释样本之后，观察测定值是否成比例，如果不成比例说明可能有HA干扰；2)用参考试剂盒测定进行结果对比，如果有明显差异，说明可能存在HA干扰；3)加入清洁抗体进行结果对比，如果有明显差异，说明可能存在HA干扰。这些方法费时费力，而且无法做到HA干扰物的全面检测，结果也不够直观，所以急需一种能够方便、全面、准确检测HA干扰物的方法
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，本专利技术的目的是建立一种血液样本中异嗜性抗体HA干扰物的快速、全面、准确检测方法，为临床工作者准确判读和分析实验结果提供可行性解决方案。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案来实现：一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，包括底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫组成，所述样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上。所述胶体金垫上包含有胶体金标记的通用型HA单克隆抗体mAb1，浓度为8～12μg/mL。所述胶体金的最大吸收波长为510～550nm。所述包被膜上依次设置有检测线和质控线，检测线包被有另外一株不同表位的通用型HA单克隆抗体mAb2，浓度为0.8～1.8mg/mL，划膜量为1ul/cm；质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为0.8～1.8mg/mL，划膜量为1ul/cm。所述检测线和质控线间隔距离为3～5mm，检测线在质控线的下方。所述样品垫为玻璃纤维材质，胶体金垫为玻璃纤维材质，包被膜为硝酸纤维素NC材质，底板为PVC胶板材质，吸水垫为滤纸材质。此外本专利技术还提供了一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条的制备方法，主要包括以下步骤：步骤一、胶体金的制备采用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备胶体金，将质量百分浓度为1％的氯金酸溶液和质量百分浓度为1％的柠檬酸三钠溶液按1:1-1:2体积比混合煮沸，制备浓度为0.01％的胶体金溶液；用紫外-可见光分光光度计进行全波长扫描。步骤二、胶体金垫的制备每ml胶体金中加入0.2M碳酸钾溶液2-4ul调整pH，然后加入8-12ug通用型HA单克隆抗体mAb1，混合均匀，保持2-8℃静置反应过夜，继续加入1％BSA，封闭1小时以上，以10℃、10000rpm离心20分钟，弃上清；沉淀用含20mMTris、10％蔗糖、1％BSA，pH8.0-8.5的溶液复溶至原胶体金体积的1/10，将复溶后的原胶体金标记物用专用设备按5-10μl/cm喷涂在玻璃纤维上，置于烘箱中37℃鼓风干燥1小时，得到胶体金垫。步骤三、包被膜的制备将通用型HA单克隆抗体mAb2用pH7.2-7.4的20mMPBS调节至浓度为0.8-1.8mg/mL，1ul/cm划线在NC膜的检测线处；将羊抗鼠IgG用pH7.2-7.4的20mMPBS调节至浓度为0.8-1.8mg/mL，1ul/cm划线在NC膜的质控线处，置于烘箱中37℃鼓风干燥1小时，得到包被膜。步骤四、样品垫的制备将含有50mMTris、1％PVP、0.5％NaCl、1％Brij35、pH8.5-9.0的处理液均匀涂布在玻璃纤维素上，置于空气湿度低于40％的条件下，室温自然晾干，得到样品垫。步骤五、试纸条的组装在底板上顺次相互搭接地粘贴样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫，制作试纸大板，用专用切条机切割成所需宽度的试纸条。本专利技术采用胶体金免疫层析分析原理、夹心法，定性检测人血液样本中的异嗜性抗体HA干扰物。在玻璃纤维上预包埋胶体金标记的通用型HA单克隆抗体mAb1，在硝酸纤维素NC膜上检测线T和质控线C处分别包被另外一株不同表位的通用型HA单克隆抗体mAb2和羊抗鼠IgG多克隆抗体。当样本中含有HA时，HA与胶体金标记的mAb1结合形成金标复合物，由于层析作用复合物沿试纸条向前移动，经过检测线时与预包被的mAb2反应，形成免疫夹心复合物而显现红色条带，游离的金标复合物则在质控线与羊抗鼠IgG结合显现红色条带。若样本中不含HA，则仅质控线显色。本专利技术胶体金试纸条可以实现血液样本中异嗜性抗体HA干扰物的快速、全面检测，结果直观、可靠，为临床工作者准确判读和分析实验结果提供可行性解决方案。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明。图1为本专利技术胶体金试纸条的结构示意图。图2为本专利技术胶体金试纸条配套的塑料外壳示意图。其中：1、样品垫；2、胶体金垫；3、包被膜；4、吸水垫；5、底板；6、检测线；7、质控线，8、加样孔；9、观察窗。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。实施例如图1所示，在该实施例中，底板5上顺次相互搭接地粘贴样品垫1、胶体金垫2、包被膜3以及吸水垫4；样品垫1是加样区，用于吸取待测样本；包被膜3上设有检测线6和质控线7；所述检测线和质控线间隔距离为4mm，检测线在质控线的下方。胶体金垫2上包含有胶体金标记的通用型HA单克隆抗体mAb1，浓度为10μg/mL。包被膜3上的检测线6包被有另外一株不同表位的通用型HA单克隆抗体mAb2，浓度为1.0mg/mL，划膜量为1ul/cm。包被膜3上的质控线7包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为1.0mg/mL，划膜量为1ul/cm。所述样品垫为玻璃纤维材质，胶体金垫为玻璃纤维材质，包被膜为硝酸纤维素NC材质，底板为PVC胶板材质，吸水垫为滤纸材质。一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条的制备方法，主要包括以下步骤：1.胶体金的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，由底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫组成，其特征在于：所述样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，由底板、样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫组成，其特征在于：所述样品垫、胶体金垫、包被膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上。2.根据权利要求1所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述胶体金垫上包含有胶体金标记的通用型HA单克隆抗体mAb1，浓度为8～12μg/mL。3.根据权利要求2所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述胶体金的最大吸收波长为510～550nm。4.根据权利要求1所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述包被膜上依次设置有检测线和质控线，检测线包被有另外一株不同表位的通用型HA单克隆抗体mAb2，浓度为0.8～1.8mg/mL，划膜量为1ul/cm；质控线包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体，浓度为0.8～1.8mg/mL，划膜量为1ul/cm。5.根据权利要求4所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述检测线和质控线间隔距离为3～5mm，检测线在质控线的下方。6.根据权利要求1所述一种快速检测血液样本中异嗜性抗体HA的胶体金试纸条，其特征在于：所述样品垫为玻璃纤维材质，胶体金垫为玻璃纤维材质，包被膜为硝酸纤维素NC材质，底板为PVC胶板材质，吸水垫为滤纸材质。7.一种根据权利要求1所述的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于：主要包括以下步骤：步骤一、胶体金的制备采用氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备胶体金，将质量百分浓度为1％的氯金酸溶液和质量百分浓度为1％的柠檬酸三钠溶液按1:1-1:2体积比混合煮沸，制备浓度为0.01％的胶体金溶液；用紫外-可见光分光光度计进行全波长扫描；步骤二、胶体金垫的制备每ml步骤一中得...

【专利技术属性】
技术研发人员：王璐，王国涛，沈诗逸，张甜甜，
申请(专利权)人：杭州毕肯莱博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33