基于i-motif构型变化的末端转移酶电化学生物传感器制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了基于i‑motif构型变化的末端转移酶电化学生物传感器制备方法及应用，具体步骤如下：首先将巯基DNA探针固定到处理好的裸金电极，然后滴加巯基乙醇处理以置换电极表面非Au‑S键固定的捕获探针。随后向电极上滴加配制的TdT反应液，在37℃下放置1h。冲洗电极后，在电极表面滴加银离子溶液，室温孵育一段时间后再滴加龙胆紫溶液，室温孵育一段时间得到传感器，于PBS(0.1M，pH7.0)电解质溶液中检测其电化学响应。优点是特异性好、灵敏度高、检测速度快、结果准确可靠、成本低。

【技术实现步骤摘要】
基于i-motif构型变化的末端转移酶电化学生物传感器制备方法及应用
本专利技术涉及一种电化学生物传感器及其检测方法，尤其是涉及基于i-motif构型变化的末端转移酶电化学生物传感器制备方法及应用，属于功能生物材料和生物传感

技术介绍
脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)是一种不需模板就可以催化脱氧核苷酸结合到DNA分子3’-OH的DNA聚合酶。相关研究表明TdT在生物体系中的活性随着组织细胞异常而变化，可以通过检测特定组织细胞中TdT含量从而对某些疾病进行诊断及治疗。传统TdT检测方法主要依靠凝胶电泳分析，但凝胶电泳分析操作过程复杂、耗时长、费用昂贵、重现性较差，且只能给出半定量的结果。近几年，涌现了一些生物传感体系用于TdT活性检测，到目前为止仍然拥有较大的研究空间和意义。因此，开发一种简便、灵敏、低成本、选择性好的TdT检测手段势在必行。富含胞嘧啶(C)的DNA分子在酸性条件下通过质子化的C碱基和非质子化的C碱基形成C-CH+碱基对，反向平行排列的C-CH+碱基对交替排列和互相嵌入形成稳定的平行双螺旋链，两条双链因为氢键形成四螺旋结构，即i-motif结构。在室温及中性条件本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于i‑motif构型变化的末端转移酶电化学生物传感器制备方法及应用，其特征在于，机理如下：利用单链DNA上的巯基与Au通过Au‑S结合，TdT催化DNA的3’‑OH末端进行聚合延长，制备富C DNA长链，利用导致i‑motif形成的Ag(I)和堆叠到i‑motif表面的GV，成功制备传感器，TdT的浓度变化会影响电化学响应。

【技术特征摘要】
1.基于i-motif构型变化的末端转移酶电化学生物传感器制备方法及应用，其特征在于，机理如下：利用单链DNA上的巯基与Au通过Au-S结合，TdT催化DNA的3’-OH末端进行聚合延长，制备富CDNA长链，利用导致i-motif形成的Ag(I)和堆叠到i-motif表面的GV，成功制备传感器，TdT的浓度变化会影响电化学响应。2.基于i-motif构型变化的末端转移酶电化学生物传感器制备方法及应用，具体步骤如下：(1)传感器制备a.Electrode1的制备将2.5～7.5μL浓度为0.1～1μM的巯基DNA探针溶液滴加到干净且活化好的裸金电极(标记为Au)表面，4℃冰箱放置8～16h，再用0.1～1.0mM巯基乙醇(MCH)处理20～60min，通过MCH与Au表面的Au-S共价结合而置换电极表面非Au-S键固定的捕获探针，蒸馏水缓缓冲洗电极，标记为Electrode1。b.Electrode2的制备配制总体积为5～15μL的TdT反应液，其中含有2～6μL蒸馏水，0.5～1.5μL5×TdT缓冲液，0.5～1.5μL浓度为5～15mM的dCTP和0.5～1.5μL浓度为5～15U/mL的TdT，均匀混合后，滴于Electr...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡宇芳，张青青，胡丹丹，马少华，郭智勇，王邃，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33