基于DNA纳米三棱柱构建组蛋白乙酰转移酶电化学发光生物传感器及其应用制造技术

本发明专利技术公开了基于DNA纳米三棱柱构建组蛋白乙酰转移酶电化学发光生物传感器及其应用，具体步骤如下：(1）HAT‑适配体反应：①乙酰化反应，分别取HATp300与多肽，乙酰辅酶A在磷酸缓冲溶液中(PBS，10mM，pH7.0)充分混合；②向①的反应溶液中加入CoA适配体；③向②的溶液中加入cDNA；(2)电化学发光传感器的制备：a.Au电极；b.prism/Au电极；c.cDNA/prism/Au电极；d.H1‑H2/cDNA/prism/Au电极；e.Ru/H1‑H2/cDNA/prism/Au电极。在乙酰化反应中，改变p300浓度及其小分子抑制剂浓度，探究所制备的一系列传感器对电化学发光信号的影响。优点是特异性好、灵敏度高、检测速度快、结果准确可靠、成本低。

【技术实现步骤摘要】
基于DNA纳米三棱柱构建组蛋白乙酰转移酶电化学发光生物传感器及其应用
本专利技术涉及一种电化学发光传感器及其检测方法，尤其是涉及基于DNA纳米三棱柱构建组蛋白乙酰转移酶电化学发光生物传感器及其应用，属于功能生物材料和生物传感

技术介绍
组蛋白乙酰化转移酶(HAT)是一种典型的的生物酶，它通过将乙酰辅酶A上的乙酰基转移至底物组蛋白或者非组蛋白底物多肽的特定赖氨酸残基上，达到调节染色体结构进而调控基因的表达的目的。组蛋白乙酰化功能紊乱或者乙酰转移酶的异常作用与一系列疾病有关，如癌症、代谢综合征和神经失调等。测定HAT活性和它们抑制剂的效力将大大有助于基因转录的生化研究以及抗癌剂的药物发现。通过抗体识别和酶联免疫的方法对HAT进行检测的工作最为典型，如基于多肽连接的量子点以及乙酰基特异性抗体的荧光检测方法和抗体介导的金纳米粒子的比色分析方法等。这些方法虽然具有一定的优势，但是它们还是存在一些内在的缺点，如不同批次之间抗体的差异以及昂贵的抗体标记等。DNA是遗传信息的载体，携带着引导生物发育与生命机能运作的遗传指令，主要功能是储存遗传信息，所以被誉为生命的“蓝图”。随着DNA纳米技本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于DNA纳米三棱柱构建组蛋白乙酰转移酶电化学发光生物传感器及其应用，其特征在于，机理如下：采用三条DNA链作为原料，经过退火杂交能够形成DNA三棱柱纳米结构，该结构一个底面含有3个巯基，可以通过Au‑S相互作用修饰到金电极表面，另一个底面还有3个悬挂端，可以通过碱基互补配对原则捕获“CoA‑适配体‑辅助DNA”体系中释放的辅助DNA，引发HCR反应，通过电化学发光实现HATp300的检测。

【技术特征摘要】
1.基于DNA纳米三棱柱构建组蛋白乙酰转移酶电化学发光生物传感器及其应用，其特征在于，机理如下：采用三条DNA链作为原料，经过退火杂交能够形成DNA三棱柱纳米结构，该结构一个底面含有3个巯基，可以通过Au-S相互作用修饰到金电极表面，另一个底面还有3个悬挂端，可以通过碱基互补配对原则捕获“CoA-适配体-辅助DNA”体系中释放的辅助DNA，引发HCR反应，通过电化学发光实现HATp300的检测。2.基于DNA纳米三棱柱构建组蛋白乙酰转移酶电化学发光生物传感器及其应用，具体步骤如下：(1)HAT-适配体反应①乙酰化反应：分别取HATp300(100～1200nM，0.1～1.2μL)与多肽(0.5～1.5mM，0.1～1.2μL)，乙酰辅酶A(0.5～1.5mM，0.5～1.5μL)在磷酸缓冲溶液中(PBS，10mM，pH7.0)充分混合，总体积1～5μL。将反应液置于28～38℃恒温水浴锅中孵育25～55min；②向①中溶液加入CoA适配体(0.5～3.5μL，0.5～1.5μM)振荡混合均匀，28～38℃水浴反应0.5～3.5h；③向②中加入cDNA(0.5～3.5μL，0.5～1.5μM)振荡混合均匀，总体积5～10μL，28～38℃水浴反应0.5～1.5h，备用。(2)电化学发光传感器的制备a.Au电极金电极(Au)使用前分别用直径为0.3μm和0.05μm的Al2O3粉末进行打磨，利用超纯水通过超声清洗3次，之后置于氮气流中干燥，再将其浸泡于0.1MH2SO4溶液中，在-...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡宇芳，张青青，胡丹丹，马少华，郭智勇，王邃，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33