【技术实现步骤摘要】
一种利用固定化黄芪细胞生产黄芪活性成分的方法
本专利技术涉及药用植物细胞工程领域，更具体地说，本专利技术涉及一种利用固定化黄芪细胞生产黄芪活性成分—黄芪多糖和黄芪皂苷的方法。
技术介绍
黄芪又名绵芪、北芪、元芪或黄耆，是豆科黄芪属多年生草本植物，在我国分布较广，主要生长于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江、吉林、辽宁、陕西、河北、山东、宁夏等地，此外青海、四川、新疆等地区以及朝鲜、蒙古、俄罗斯亦有分布。按照《中华人民共和国药典》收录，中药黄芪为膜荚黄芪和蒙古黄芪的干燥根，为我国传统滋补中药材，至今已有400多年的药用历史，目前仍为中医临床治疗最常用的药物之一。黄芪早在《神农本草经》中就有记载有补益强壮之功效。传统中医学认为，黄芪具有补气固表、利尿排毒、敛疮生肌、补中益气的作用。随着科学技术的飞速发展，采用现代科学技术手段研究传统中药已成为时代特色，经过研究证实，黄芪含有多种活性成分，其中最主要的有多糖类、皂苷类、黄酮类化合物，还含有多种氨基酸、微量元素和其它化合物。这些活性成分使得黄芪具有以下药理作用：1、增强机体免疫功能，参与机体免疫调节，促进免疫因子的生成；2、降血压...
【技术保护点】
1.一种利用固定化黄芪细胞生产黄芪活性成分的方法，其特征在于，该方法的技术流程如下：1）黄芪外植体的消毒：选取黄芪幼嫩的茎段作为外植体，用自来水冲洗10~20min，在无菌条件下先用75%乙醇消毒30s，再用0.1%升汞消毒3min，最后用无菌水冲洗4~5次，滤纸吸干水分，获得无菌的黄芪外植体；2）愈伤组织的诱导与增殖：将黄芪外植体切成0.5~0.7cm长的小段接种于含诱导培养基的培养皿上，置于25±1℃、黑暗条件下培养诱导出愈伤组织，选择生长良好的愈伤组织接种于含增殖培养基的三角瓶中，在相同条件下进行继代增殖培养，每21d继代1次；3）黄芪细胞的悬浮与分散：继代2~3次后...
【技术特征摘要】
1.一种利用固定化黄芪细胞生产黄芪活性成分的方法，其特征在于，该方法的技术流程如下：1）黄芪外植体的消毒：选取黄芪幼嫩的茎段作为外植体，用自来水冲洗10~20min，在无菌条件下先用75%乙醇消毒30s，再用0.1%升汞消毒3min，最后用无菌水冲洗4~5次，滤纸吸干水分，获得无菌的黄芪外植体；2）愈伤组织的诱导与增殖：将黄芪外植体切成0.5~0.7cm长的小段接种于含诱导培养基的培养皿上，置于25±1℃、黑暗条件下培养诱导出愈伤组织，选择生长良好的愈伤组织接种于含增殖培养基的三角瓶中，在相同条件下进行继代增殖培养，每21d继代1次；3）黄芪细胞的悬浮与分散：继代2~3次后挑选出生长旺盛、质地较为疏松的愈伤组织，接入含100mL悬浮培养基的500mL三角瓶中摇床振荡培养，培养条件为25±1℃、黑暗、转速100~120r/min，每14d继代1次，继代3~4次逐渐形成稳定的黄芪细胞悬浮培养系，采用酶解法对黄芪细胞进行分散，然后将细胞悬浮液依次用0.9mm和0.1mm的筛网进行过滤，取滤液进行固定化操作；4）黄芪细胞的固定化：配制浓度为40g/L的无菌海藻酸钠溶液，并添加0.1%（W/V）的鼠李糖脂和2%（W/V）的Fe3O4，将步骤3）的滤液与此海藻酸钠溶液混合均匀，用注射器将混合液逐滴滴入浓度为20g/L的无菌CaCl2溶液中，在磁力搅拌器的搅拌下形成直径约为3mm的固定化凝胶珠，静置30min后放入冰箱过夜，取出用生理盐水洗涤2~3次；5）固定化细胞的磁场处理：将固定化凝胶珠置于无菌三角瓶中，放入磁场强度为500Gs的低强磁场中处理30min；6）固定化细胞的培养：使用气升式生物反应器进行培养，在无菌条件下，将磁化后的固定化凝胶珠以10%的接种量接入生产培养基中，装液量为50~60%，通气量为0.10~0.15VVM，温度为25±1℃，在培养的第8d接入5%的芽孢杆菌混悬液，100μmol/L的硫氢化钠，继续培养6-8d后放出培养液，用于黄芪活性成分（黄芪多糖和黄芪皂苷）的分离纯化。2.根据权利要求1所述的一种利用固定化黄芪细胞生产黄芪活性成分的方法，其特征在于，所述步骤2）中诱导培养基的成分为MS基本培养基+1.0g/L水解乳蛋白+0.5mg/LD-泛酸钙+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.1mg/L氯化胆碱+30g/L蔗糖+5g/L结...
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