心肌肌钙蛋白的测定方法及测定试剂技术

本发明专利技术公开一种心肌肌钙蛋白的测定方法及测定试剂，其不论试样种类或有无其它成分均可更准确地测定试样中所含的心肌肌钙蛋白量。心肌肌钙蛋白的测定方法包含前处理工序，所述前处理工序将从生物体中分离出的试样和含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合，通过免疫分析测定从生物体中分离出的试样中的心肌肌钙蛋白。心肌肌钙蛋白的免疫分析用试剂具备含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】心肌肌钙蛋白的测定方法及测定试剂
本专利技术涉及一种心肌肌钙蛋白的测定方法及测定试剂。
技术介绍
心肌肌钙蛋白参与心肌收缩的调节，以由心肌肌钙蛋白I、肌钙蛋白C、心肌肌钙蛋白T的3种亚单元构成的复合体的形态存在。心肌肌钙蛋白I和心肌肌钙蛋白T均在心脏中特异性地表达，心肌细胞受伤害时，被释放到血中，因此，在心肌梗塞的诊断、心脏疾病的监测中作为血中标记物被利用。作为与心肌肌钙蛋白的测定关联的技术，报道了以下技术。专利文献1中记载有：通过利用含有给定的阴离子型表面活性剂(具有1个磺酸基的烷基)的基质，可以将标准液中的心肌肌钙蛋白稳定化。专利文献2中记载有：在心肌肌钙蛋白的免疫学测定中，可以利用2价的阳离子。现有技术文献专利文献专利文献1:国际公开第2006/116005号专利文献2:日本专利第5864530号
技术实现思路
专利技术所要解决的技术问题血中的心肌肌钙蛋白作为心肌梗塞的诊断标记物被广泛利用，但在血中以由心肌肌钙蛋白I、肌钙蛋白C及心肌肌钙蛋白T构成的复合体形式存在，且与血中成分形成复合体。特别是心肌肌钙蛋白I容易由于其它成分等的状态而改变性状，如在肝素存在下与肝素显示相互作用，容易被血中蛋白酶分解等，在使用抗肌钙蛋白抗体的免疫测定中不显示稳定的值，因此，被看作不稳定的蛋白质。例如，将血清用作血液试样的情况的心肌肌钙蛋白I的测定值、及将血浆用作血液试样的情况的心肌肌钙蛋白I的测定值有时不一定显示相同的值。在医疗现场，含有各种抗凝固剂(例如肝素、EDTA、柠檬酸)的采血管被用于血浆的制备，但血浆中的心肌肌钙蛋白I的测定值有时根据用于血浆的制备的抗凝固剂的种类而显示不同的值。另外，在检测中使用不同抗体时，测定试剂间也可看到肌钙蛋白测定值的背离。因此，存在如下问题：在测定心肌肌钙蛋白I量的心肌梗塞的诊断中，在免疫测定法中难以规定心肌肌钙蛋白I的真值，因此，难以设定不受试样的种类或其它成分的影响的正常人的固定值。心肌肌钙蛋白T的测定仅使用单一的测定法，因此，如肌钙蛋白I那样的测定值背离的问题不严重，但如果报道了多种测定方法的情况下，有可能产生与心肌肌钙蛋白I同样的问题。本专利技术的目的在于，提供一种心肌肌钙蛋白的测定方法及测定试剂，所述测定方法不论试样种类或有无其它成分均可更准确地测定试样中所含的心肌肌钙蛋白量。用于解决问题的技术方案本专利技术人等为了实现上述目的进行了深入研究，结果发现，在使用以免疫学方式测定生物体试样中的心肌肌钙蛋白I的方法时，通过在将所述生物体试样供于免疫反应之前设置前处理工序，不论生物体试样的种类或有无其它成分，均可得到再现性好的心肌肌钙蛋白测定值，从而完成了本专利技术，其中，所述前处理工序将含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合。本专利技术的构成如下所述。(1)一种通过免疫分析测定从生物体中分离出的试样中的心肌肌钙蛋白的方法，其包含前处理工序，所述前处理工序将从生物体中分离出的试样和含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合。(2)根据(1)所述的方法，其中，所述前处理液还含有还原剂。(3)根据(1)或(2)所述的方法，其中，所述前处理液含有表面活性剂，该表面活性剂为选自由阴离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂、两性表面活性剂、非离子型表面活性剂构成的组中的1种以上的表面活性剂。(4)根据(3)所述的方法，其中，所述表面活性剂为阴离子型表面活性剂。(5)根据(3)所述的方法，其中，所述前处理工序在加热条件下进行。(6)根据(1)所述的方法，其中，所述前处理液含有酸性化剂，前处理工序中的酸性化剂的终浓度超过0.05N且为0.5N以下。(7)根据(1)～(6)中任一项所述的方法，其中，所述心肌肌钙蛋白为心肌肌钙蛋白I。(8)一种心肌肌钙蛋白的免疫分析用试剂，其具备含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液。专利技术效果根据本专利技术，可以提供一种心肌肌钙蛋白的测定方法及测定试剂，其通过使心肌肌钙蛋白从其它成分游离并降低相互作用导致的影响，不论试样的种类或有无其它成分，均可更准确地测定试样中所含的心肌肌钙蛋白量。另外，根据本专利技术，可以提供一种心肌肌钙蛋白的测定方法及测定试剂，其通过使心肌肌钙蛋白的性状均匀化，能够以高灵敏度稳定地测定心肌肌钙蛋白。附图说明图1是表示利用市售测定试剂得到的血清中的心肌肌钙蛋白I测定值、和利用伴有酸性化前处理的本专利技术的测定方法得到的血清中的心肌肌钙蛋白I测定值的相关性的图。图2是表示在伴有酸性化前处理的本专利技术的测定方法中显示高值的被检体的凝胶过滤色谱法的各级分对心肌肌钙蛋白I的检测给予的影响的图。图3是表示伴有酸性化前处理的本专利技术的测定方法中的前处理液的酸浓度和测定值的关系的图。具体实施方式<心肌肌钙蛋白的测定方法>用本专利技术的方法所测定的心肌肌钙蛋白可以为心肌肌钙蛋白I、肌钙蛋白C及心肌肌钙蛋白T中的任一种，优选为心肌肌钙蛋白I。心肌肌钙蛋白I(cTnI)为构成参与心肌收缩的调节的心肌肌钙蛋白复合体的3种亚单元(肌钙蛋白I、C及T)之一。本专利技术中所测定的心肌肌钙蛋白为源自任意动物的心肌肌钙蛋白，优选为源自哺乳动物(例如人、猴子、黑猩猩等灵长类；马、大鼠、兔等啮齿类；狗、猫等宠物；猪、牛等家畜；马、绵羊等驯化动物)的心肌肌钙蛋白，更优选为源自灵长类的心肌肌钙蛋白，特别优选为源自人的心肌肌钙蛋白。关于源自人的心肌肌钙蛋白I的氨基酸序列，例如参照GenBank：CAA62301.1。当然，源自人的心肌肌钙蛋白I并不限定于由上述编号中所参照的氨基酸序列构成的心肌肌钙蛋白I，也可以为其变异体(例如天然地产生的变异体)。另外，本专利技术中所测定的心肌肌钙蛋白I可以在生物体试样中以游离型、与肌钙蛋白C和/或肌钙蛋白T的复合体的形态、及与自身抗体等其它分子的复合体的形态存在。关于源自人的肌钙蛋白C的氨基酸序列，例如参照GenBank：AAA36772.1。关于源自人的心肌肌钙蛋白T的氨基酸序列，例如参照GenBank：CAA52818.1。1.前处理工序本专利技术的方法为通过使生物体试样和抗体反应、即免疫反应而测定存在于生物体试样中的心肌肌钙蛋白I的方法，其特征在于，包含在免疫反应(反应工序)之前将生物体试样和前处理液混合的前处理工序。通过前处理工序，可以使心肌肌钙蛋白I为游离状态，降低与其它蛋白质等成分的相互作用的影响。前处理液可以含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种，也可以含有两者。优选前处理液含有表面活性剂或酸性化剂中的任一种。在所述前处理工序中进行混合的生物体试样和前处理液的体积比优选设为1：10～10：1，特别优选设为1：5～5：1，进一步优选设为1：3～3：1。本专利技术中所使用的生物体试样只要是可能含有心肌肌钙蛋白I的试样，就没有特别限定，可举出例如：血清、血浆、全血、尿、便、口腔粘膜、咽粘膜、肠道粘膜及活检试样(例如肠道试样、肝脏试样)。优选生物体试样为血清或血浆。作为所述前处理液中所含的表面活性剂，可以使用阴离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂、两性表面活性剂、非离子型表面活性剂中的任一种，特别优选阴离子型表面活性剂。作为阴离子型表面活性剂，可以优选使用十二烷基硫酸钠(SDS)、N-月桂酰肌氨酸钠(NLS)、十二烷基硫酸锂、十二烷基苯磺本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过免疫分析测定从生物体中分离出的试样中的心肌肌钙蛋白的方法，其包含前处理工序，所述前处理工序将从生物体中分离出的试样和含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.13 JP 2016-1789191.一种通过免疫分析测定从生物体中分离出的试样中的心肌肌钙蛋白的方法，其包含前处理工序，所述前处理工序将从生物体中分离出的试样和含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述前处理液还含有还原剂。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述前处理液含有表面活性剂，该表面活性剂为选自由阴离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂、两性表面活性剂、...

【专利技术属性】
技术研发人员：榊瑞穗，北村由之，八木慎太郎，青柳克己，
申请(专利权)人：富士瑞必欧株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP