一种心肌肌钙蛋白I核酸适配子及其应用、试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种心肌肌钙蛋白I核酸适配子及其应用、试剂盒。该心肌肌钙蛋白I核酸适配子的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明专利技术提供的心肌肌钙蛋白I核酸适配子经过改造后，其与心肌肌钙蛋白I的结合能力很强，且序列短，易于合成，合成成功率高，生产时间短，降低了合成成本，同时能够更有效的了解反应区域。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及生物
，特别涉及一种心肌肌钙蛋白I核酸适配子及其应用、试剂盒。该心肌肌钙蛋白I核酸适配子的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。本专利技术提供的心肌肌钙蛋白I核酸适配子经过改造后，其与心肌肌钙蛋白I的结合能力很强，且序列短，易于合成，合成成功率高，生产时间短，降低了合成成本，同时能够更有效的了解反应区域。【专利说明】-种心肌肌钙蛋白I核酸适配子及其应用、试剂盒
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种心肌肌钙蛋白I核酸适配子及其应用、 试剂盒。
技术介绍
心血管疾病是当今社会影响人类健康的重要疾病之一，而在心血管疾病中，急性 心肌梗死是造成病人死亡的主要原因。在世界卫生组织建议的急性心肌梗死诊断标准中， 心肌坏死的血清心肌标志物浓度的动态改变是一个非常关键的判断依据，所以现阶段有不 少用于早期心肌损伤血清标志物的诊断试剂。肌钙蛋白是心肌与骨骼肌的收缩调节蛋白， 心肌肌钙蛋白是由心肌肌钙蛋白I (cTnl)、心肌肌钙蛋白C (cTnC)、心肌肌钙蛋白T (cTnT) 三个亚单位组成，而cTnl具有高度的心肌特异性，其对微小心肌损伤检测有特殊临床价 值，可以诊断心肌梗死和心肌细胞损伤，是目前诊断急性心肌梗死的新的"金标准"。现有的 cTnl检测产品大多基于免疫技术，利用抗原抗体反应，但是基于抗体的产品存在较多的局 限性，主要在于抗体本身的稳定均一性、保存环境、生产周期等方面。 核酸适配子（适配子/适体，aptamer)，是指通过指数富集的配基系统进化技术 (SELEX)筛选分离得到的一条DNA或者RNA分子，它可以与其靶物质（氨基酸、蛋白质、金属 离子、甚至整个细胞）进行高亲和力、专一性结合。因此，它在生化分析、环境监测、基础医 学、新药的合成及筛选等方面展现出广阔的应用前景。 目前，现有的cTnl的核酸适配子即是由SELEX技术筛选得到，主要 包括2条cTnl核酸适配子，其中一个cTnl核酸适配子的序列为：GCTTAATCGA GGGTATCGTGGGGCAGTTGGGAGGG，另一个 cTnl 核酸适配子的序列为：GCCGTCAACATGTCCTAGTAG GGGTCTCAGGGGTG〇 然而，在现有的SELEX技术中，由于受制于方法和筛选环境的影响，有的筛选得到 的核酸适配子并不是与靶物质产生作用的最简序列，或者说是关键序列，如果涉及到实际 应用，这样的适配子将会产生一些不必要的合成等方面的浪费，而且也不利于关键结合序 列的分析。因此，提供一种序列短、高亲和力的cTnl核酸适配子具有重要的现实意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种心肌肌钙蛋白I核酸适配子及其应用、试剂盒。该心 肌肌钙蛋白I核酸适配子经过改造后，其与心肌肌钙蛋白I的结合能力很强，且序列短，易 于合成，合成成功率高，生产时间短，降低了合成成本，同时能够更有效的了解反应区域。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案： 本专利技术提供了一种心肌肌钙蛋白I核酸适配子，其核苷酸序列如SEQ ID N0 :1所 /_J、1 〇 在本专利技术中，对现有序列进行简化，去除无关序列，同时为了进一步分析其关键序 列的位置，通过大量的试验和筛选获得简化后的核苷酸序列，其具有固定碱基的位置是结 合心肌肌钙蛋白I的关键位置。获得的简化核苷酸序列和心肌肌钙蛋白I的结合能力与简 化前的结合能力相当，且更易于合成，其序列更短，合成成功率更高，生产时间更短，降低了 合成成本，能更有效的了解反应区域。 作为优选，心肌肌钙蛋白I核酸适配子的核苷酸序列如SEQ ID N0 :2所示。 作为优选，心肌肌钙蛋白I核酸适配子的核苷酸序列如SEQ ID N0 :3所示。 本专利技术还提供了核苷酸序列如SEQ ID N0 :1所示心肌肌钙蛋白I核酸适配子在非 诊断目的检测肌钙蛋白I中的应用。 本专利技术还提供了核苷酸序列如SEQ ID N0 :2所示心肌肌钙蛋白I核酸适配子在非 诊断目的检测肌钙蛋白I中的应用。 本专利技术还提供了核苷酸序列如SEQ ID N0 :3所示心肌肌钙蛋白I核酸适配子在非 诊断目的检测肌钙蛋白I中的应用。 本专利技术还提供了核苷酸序列如SEQ ID N0 :1所示在肌钙蛋白I纯化中的应用。 本专利技术还提供了核苷酸序列如SEQ ID N0 :2所示在肌钙蛋白I纯化中的应用。 本专利技术还提供了核苷酸序列如SEQ ID N0 :3所示在肌钙蛋白I纯化中的应用。 本专利技术还提供了一种试剂盒，包括如核苷酸序列如SEQ ID N0 :1、核苷酸序列如 SEQ ID N0 :2或核苷酸序列如SEQ ID N0 :3的心肌肌钙蛋白I核酸适配子。 本专利技术提供了一种心肌肌钙蛋白I核酸适配子及其应用、试剂盒。该心肌肌钙蛋 白I核酸适配子的核苷酸序列如SEQ ID N0 :1所示。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳试 验，结果显示本专利技术提供的cTnl核酸适配子与cTnl有明显结合现象，但与干扰蛋白无结合 现象；通过抗体夹心法考察本专利技术提供的cTnl核酸适配子与cTnl蛋白的结合情况，结果显 示本专利技术提供的cTnl核酸适配子与不同浓度cTnl的孵育产物，吸光度显示出了较大的梯 度，证明本专利技术提供的cTnl核酸适配子与cTnl有较好的结合，与HSA的结合很少；由表面 等离子体共振法检测cTnl核酸适配子与cTnl的结合常数为8. 32nM?10. 39nM之间，说明 本专利技术提供的cTnl核酸适配子与目标蛋白cTnl有较高的亲和力，均已经达到nM级别。 另外，本专利技术提供的cTnl核酸适配子还具有如下优势： 本专利技术提供的cTnl核酸适配子序短，易于合成，合成成功率更高； 生产时间短，降低了合成成本； 更有效的了解反应区域。 【专利附图】【附图说明】 图1实施例3中SEQ ID NO :2、SEQ ID N0 :3所示cTnl核酸适配子与cTnl蛋白结 合情况的电泳图；其中，泳道1示空白对照组泳道，只有cTnl蛋白；泳道2、3示阴性对照组 泳道，泳道2的处理为0· 5 μ g cTnI+100pmol阴性对照，泳道3的处理为1 μ g cTnI+100pmol 阴性对照；泳道4?7示试验组泳道，泳道4的处理为0. 5 μ g cTnI+100pmol SEQ ID NO :2 所示cTnl核酸适配子，泳道5的处理为1 μ g cTnl+lOOpmol SEQ ID NO :2所示cTnl核酸 适配子，泳道6的处理为0. 5 μ gcTnl+lOOpmol SEQ ID NO :3所示cTnl核酸适配子，泳道7 的处理为1 μ g cTnl+lOOpmol SEQ ID NO :3所示cTnl核酸适配子； 图2实施例3中第一阳性对照、第二阳性对照与cTnl蛋白结合情况的电泳图；其 中，泳道1示空白对照组泳道，只有cTnl蛋白；泳道2、3示阴性对照组泳道，泳道2的处理 为0. 5 μ g cTnl+lOOpmol阴性对照，泳道3的处理为1 μ g cTnl+lOOpmol阴性对照；泳道 4?7示阳性对照组泳道，泳道4的处理为0. 5 μ g cT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种心肌肌钙蛋白I核酸适配子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘振华，
申请(专利权)人：三诺生物传感股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43