一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，包括盒体、试剂架和盖体，所述盒体的内部固定有试剂架，试剂架上的一侧分别设有一个组织清洗液放置区、一个细胞洗涤液放置区以及两个细胞培养液放置区，试剂架上的另一侧分别设有一个骨髓冲洗液放置区、一个细胞分离液放置区、一个红细胞裂解液放置区、一个接种包被液放置区、一个细胞消化液放置区。本实用新型专利技术提供了大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养过程中涉及到的所有试剂，并且提供了一套经过反复优化的细胞分离、培养方案，实验人员可参照优化的实验方案、使用试剂盒内的试剂简便、快速地完成大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养实验。

【技术实现步骤摘要】
一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒
本技术涉及生物
，具体为一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒。
技术介绍
内皮祖细胞(EndothelialProgenitorCells，EPCs)是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞(Angioblast)，在生理或病理因素刺激下，可从骨髓动员到外周血参与损伤血管的修复。1997年，Asahara等首次证明循环外周血中存在能分化为血管内皮细胞的前体细胞，并将其命名为血管内皮祖细胞。EPCs是一群具有游走特性，能进一步增殖分化的幼稚内皮细胞，缺乏成熟内皮细胞的特征性表型，其功能主要为参与了出生后缺血组织的血管发生和血管损伤后的修复。研究显示，EPCs在血管再生和心血管疾病的细胞治疗和基因治疗中具有广阔的应用前景。例如，利用EPCs修复心肌梗死患者的心脏，治疗Ⅰ临床肢体缺血，治疗冠状动脉疾病，改善血管移植物的通畅率，改善糖尿病患者的血管形成能力，定向抑制肿瘤血管生成，作为基因治疗导向载体和靶细胞，等等，并为缺血性疾病的研究治疗提供了新思路，EPCs生物学特性和治疗作用的研究成为这一领域新的热点。内皮祖细胞主要存在于骨髓、脐血和外周血等组织中，三者内皮祖细胞含量之比约为15:10:1；其中，外周血内皮祖细胞占外周血细胞比例约为0.01%，骨髓来源内皮祖细胞在骨髓中的比例仅为0.1-0.15%，含量极少。众多来源的内皮祖细胞中，骨髓来源内皮祖细胞应用相对广泛，由于骨髓采集方便、易于获取，备受实验研究人员的亲睐。目前，关于EPCs分离、培养的方法过程繁复，研究人员实验前后需要准备的试剂、耗材很多，且最终细胞得率较低；极大地耗损了实验人员的精力，并无形中延长了整个实验研究周期，给相关实验人员带来了不便。
技术实现思路
本技术的目的在于为了解决骨髓来源内皮祖细胞分离、培养过程中，耗时长、成本高、效率低等技术问题，本技术提供了一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，该试剂盒中所有试剂均为无菌，可供实验人员方便、快捷使用，大大缩短了细胞分离前期试剂配制及准备工作所消耗的时间。为实现上述目的，本技术提供如下技术方案：一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，包括盒体、试剂架和盖体，所述盒体的内部固定有试剂架，试剂架上的一侧分别设有一个组织清洗液放置区、一个细胞洗涤液放置区以及两个细胞培养液放置区，试剂架上的另一侧分别设有一个骨髓冲洗液放置区、一个细胞分离液放置区、一个红细胞裂解液放置区、一个接种包被液放置区、一个细胞消化液放置区。优选的，所述试剂架为泡沫材料制备的支架。优选的，所述组织清洗液放置区内放置有一个盛放100mL组织清洗液的无菌、密封塑料方瓶，且组织清洗液主要由磷酸盐缓冲液、青-链霉素组成。优选的，所述骨髓冲洗液放置区内放置有一个盛放50mL骨髓冲洗液的无菌、密封试剂瓶，且骨髓冲洗液主要由DMEM/F12基础培养基、青-链霉素组成。优选的，所述细胞分离液放置区内放置有一个盛放50mL细胞分离液的无菌、密封试剂瓶，且细胞分离液主要由Percoll组成。优选的，所述红细胞裂解液放置区内放置有一个盛放50mL红细胞裂解液的无菌、密封试剂瓶，且红细胞裂解液主要由KHCO3、NH4Cl、EDTA-Na2组成。优选地，所述接种包被液放置区内放置有一个盛放20mL接种包被液的无菌、密封试剂瓶，且接种包被液主要由纤维连接蛋白组成。优选的，所述细胞洗涤液放置区内放置有一个盛放100mL细胞洗涤液的无菌、密封塑料方瓶，且细胞洗涤液主要由DMEM/F12基础培养基、胎牛血清、青-链霉素组成。优选的，所述细胞培养液放置区内放置与两个盛放100mL细胞培养液的无菌、密封塑料方瓶，且细胞培养液主要由无血清培养基、胎牛血清、EGF、bFGF、VEGF、IGF-1、氢化可的松、肝素、抗坏血酸、青-链霉素组成。优选的，所述细胞消化液放置区内放置有一个盛放50mL细胞消化液的无菌、密封试剂瓶，且细胞消化液主要由胰蛋白酶、EDTA-Na2组成。与现有技术相比，本技术的有益效果是：该试剂盒提供了大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养过程中涉及到的所有试剂，并且提供了一套经过反复优化的细胞分离、培养方案，实验人员可参照优化的实验方案、使用试剂盒内的试剂简便、快速地完成大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养实验；既缩短了细胞分离前期试剂配制及准备工作所消耗的时间，又提高了最终的细胞得率、存活率及纯度，操作简便，节省人力、物力及时间，提高了实验效率。附图说明图1为本技术的内部结构示意图；图2为本技术的盒体仰视示意图；图3为本技术的盒盖结构示意图。图中：1、组织清洗液放置区；2、骨髓冲洗液放置区；3、细胞分离液放置区；4、红细胞裂解液放置区；5、接种包被液放置区；6、细胞洗涤液放置区；7、细胞培养液放置区；8、细胞消化液放置区；9、盒体；10、试剂架；11、盖体。具体实施方式下面将结合本技术实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。请参阅图1-3，本技术提供的一种实施例：一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，包括盒体9、试剂架10和盖体11，所述盒体9的内部固定有试剂架10，试剂架10为泡沫材料制备的支架，具备更好的弹性及缓冲性，试剂盒在运输途中遇到剧烈的晃动或震动时，可牢牢地将各试剂固定在试剂架10上，并极大地降低震荡程度，试剂架10上的一侧分别设有一个组织清洗液放置区1、一个细胞洗涤液放置区6以及两个细胞培养液放置区7，试剂架10上的另一侧分别设有一个骨髓冲洗液放置区2、一个细胞分离液放置区3、一个红细胞裂解液放置区4、一个接种包被液放置区5、一个细胞消化液放置区8，组织清洗液放置区1内放置有一个盛放100mL组织清洗液的无菌、密封塑料方瓶，且组织清洗液主要由磷酸盐缓冲液、青-链霉素组成，骨髓冲洗液放置区2内放置有一个盛放50mL骨髓冲洗液的无菌、密封试剂瓶，且骨髓冲洗液主要由DMEM/F12基础培养基、青-链霉素组成，细胞分离液3放置区内放置有一个盛放50mL细胞分离液的无菌、密封试剂瓶，且细胞分离液主要由Percoll组成，红细胞裂解液放置区4内放置有一个盛放50mL红细胞裂解液的无菌、密封试剂瓶，且红细胞裂解液主要由KHCO3、NH4Cl、EDTA-Na2组成，接种包被液放置区5内放置有一个盛放20mL接种包被液的无菌、密封试剂瓶，且接种包被液主要由纤维连接蛋白组成，细胞洗涤液放置区6内放置有一个盛放100mL细胞洗涤液的无菌、密封塑料方瓶，且细胞洗涤液主要由DMEM/F12基础培养基、胎牛血清、青-链霉素组成，细胞培养液放置区7内放置与两个盛放100mL细胞培养液的无菌、密封塑料方瓶，且细胞培养液主要由无血清培养基、胎牛血清、EGF、bFGF、VEGF、IGF-1、氢化可的松、肝素、抗坏血酸、青-链霉素组成，细胞消化液放置8区内放置有一个盛放50mL细胞消化液的无菌、密封试剂瓶，且细胞消化液主要由胰蛋白酶、EDTA-N本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，包括盒体（9）、试剂架（10）和盖体（11），其特征在于：所述盒体（9）的内部固定有试剂架（10），试剂架（10）上的一侧分别设有一个组织清洗液放置区（1）、一个细胞洗涤液放置区（6）以及两个细胞培养液放置区（7），试剂架（10）上的另一侧分别设有一个骨髓冲洗液放置区（2）、一个细胞分离液放置区（3）、一个红细胞裂解液放置区（4）、一个接种包被液放置区（5）、一个细胞消化液放置区（8）。

【技术特征摘要】
1.一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，包括盒体（9）、试剂架（10）和盖体（11），其特征在于：所述盒体（9）的内部固定有试剂架（10），试剂架（10）上的一侧分别设有一个组织清洗液放置区（1）、一个细胞洗涤液放置区（6）以及两个细胞培养液放置区（7），试剂架（10）上的另一侧分别设有一个骨髓冲洗液放置区（2）、一个细胞分离液放置区（3）、一个红细胞裂解液放置区（4）、一个接种包被液放置区（5）、一个细胞消化液放置区（8）。2.根据权利要求1所述的一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，其特征在于：所述试剂架（10）为泡沫材料制备的支架。3.根据权利要求1所述的一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，其特征在于：所述组织清洗液放置区（1）内放置有一个盛放100mL组织清洗液的无菌、密封塑料方瓶。4.根据权利要求1所述的一种大鼠骨髓来源内皮祖细胞分离、培养试剂盒，其特征在于：所述骨髓冲洗液放置区（2）内放置有一个盛放50mL骨髓冲洗液的无菌、密封试剂瓶。5.根据权利要求1所述的一种大鼠骨髓来源内皮祖...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：武汉普诺赛生命科技有限公司，
类型：新型
国别省市：湖北,42