一种山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法技术

本发明专利技术提供了一种山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法。本发明专利技术方法包括：在不同时期，对处于越冬期内的山葡萄进行抗寒性以及生理指标测定；然后，将不同生理指标与抗寒性进行相关性以及灰色关联分析，灰色关联度数值最大的生理指标，即为与山葡萄抗寒性最相关生理指标。本发明专利技术中，通过对越冬过程中与抗寒性相关生理指标变化进行统计和分析，得出可溶性糖含量与山葡萄抗寒性最为相关，通过进一步对于可溶性糖组分的检测和分析，进而得出与山葡糖抗寒性最为相关的可溶性糖种类为果糖、葡萄糖和海藻糖的结论，填补了相关领域研究的空白。

【技术实现步骤摘要】
一种山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法
本专利技术涉及抗寒性鉴定领域，具体而言，涉及一种山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法。
技术介绍
山葡萄是葡萄属中最抗寒的一个种，而且山葡萄对于白腐病、白粉病、炭疽病以及黑豆病等病害也有较强的抵抗能力，是葡萄抗性育种的重要资源。植物在响应低温胁迫过程中会启动一系列信号传导反应，并发生组织含水量下降、渗透调节物质积累、抗氧化酶活性增强等生理生化变化以增强抗寒能力。但不同作物，或者同一作物不同器官如幼苗和枝条对低温的响应会也会不同。有些学者指出：抗氧化系统及激素调节在植物越冬过程中起作用；也有学者认为，可溶性糖中的蔗糖与植物抗寒性密切相关。目前，对于葡萄抗寒性鉴定的方法主要是采用电导法，专利技术人在前期的研究中，也开发了一种采用TTC染色方法鉴定山葡萄抗寒性的方法(具体可参见CN105409708A)。然而，对于影响山葡萄抗寒性能的具体指标因素(水分、渗透调节物质、抗氧化酶、植物激素等)和相关性分析方法，现有技术中却没有相关的研究报道。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供种山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法。本专利技术方法中，通过分析越冬过程中与抗寒性相关的生理指标的变化，寻找与山葡萄抗寒性最为相关的指标，以此作为耐寒葡萄品种筛选及选育的理论依据，同时也为后续转基因耐寒葡萄品种选育及基因编辑研究提供基础。本专利技术的第二目的在于提供一种山葡萄抗寒性检测的方法。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法，包括：在不同时期，对处于越冬期内的山葡萄进行抗寒性以及生理指标测定；然后，将不同生理指标与抗寒性进行相关性以及灰色关联分析，灰色关联度数值最大的生理指标，即为与山葡萄抗寒性最相关生理指标。优选的，本专利技术所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法包括：分别在10,11,12以及1月对处于越冬期内的山葡萄进行抗寒性以及生理指标测定。优选的，本专利技术所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法包括：对不同品种的山葡萄进行抗寒性以及生理指标测定。优选的，本专利技术所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法包括：对‘左山二’，‘双丰’，以及‘201230’三种不同的山葡萄进行抗寒性以及生理指标测定。优选的，本专利技术所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法中，所述抗寒性以低温半致死温度表征。优选的，本专利技术所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法中，所述生理指标包括：总水，自由水，束缚水，可溶性糖，淀粉，脯氨酸，可溶性蛋白，SOD，CAT，APX，GR，GA，ABA以及IAA。优选的，本专利技术所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法中，还进一步包括对灰色关联度数值最大的生理指标中具体所含组分以及含量进行测定，以及将不同组分与抗寒性进行相关性分析，得出与抗寒性相关组分的步骤。优选的，本专利技术所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法包括：根据相关性以及灰色关联度分析，得出与抗寒性灰色关联度数值最大的生理指标为可溶性糖；然后，取山葡萄枝条试样，提取纯化后，对提取物进行可溶性糖组分检测和各组分含量分析；将所检测到的包括蔗糖，果糖，葡萄萄，海藻糖，以及山梨醇的可溶性糖组分与抗寒性进行相关性分析，得出与抗寒性相关的可溶性糖为果糖，葡萄糖，以及海藻糖。同时，本专利技术还提供了一种山葡萄抗寒性检测的方法，包括：对低温处理后山葡萄枝条试样中的可溶性糖含量进行检测，得出不同品种山葡萄抗寒性。优选的，本专利技术所提供的一种山葡萄抗寒性检测的方法包括：对低温处理后山葡萄枝条试样中的果糖，葡萄糖，以及海藻糖含量进行检测，得出不同品种山葡萄抗寒性的步骤。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术中，通过对越冬过程中与抗寒性相关生理指标变化进行统计和分析，得出可溶性糖含量与山葡萄抗寒性最为相关，而通过进一步对于可溶性糖组分的检测和分析，也得出与山葡糖抗寒性最为相关的可溶性糖种类为果糖、葡萄糖和海藻糖的结论，补充了相关领域研究的空白。(2)本专利技术中，通过测定不同山葡萄枝条中可溶性糖，特别是果糖、葡萄糖和海藻糖含量，可以直接分析比较出不同种类山葡萄抗寒能力，提供了一种山葡萄抗寒能力快速检测分析的新思路。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为不同抗寒性的山葡萄越冬过程中LT50值变化情况示意图；图2为不同抗寒性的山葡萄中五种可溶性糖含量示意图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。山葡萄是葡萄属中最抗寒的一个种，但山葡萄种质种内抗寒性存在强弱差异。前期，专利技术人研发了一种山葡萄抗寒性的快速、准确的鉴定方法，这也为抗寒生理机制分析提供了有价值的理论参考，为本专利技术奠定了一定的基础。然而与山葡萄抗寒性最为相关的指生理标为何，影响山葡萄抗寒性的关键物质为何，仍是待解决的技术问题。本专利技术中，通过选取不同抗寒区域的三种山葡萄品种及品系，分析越冬过程中与抗寒性相关的生理指标的变化，寻找与山葡萄抗寒性最为相关的指标，并以此作为耐寒葡萄品种筛选及选育的理论依据，而这也能够为后续转基因耐寒葡萄品种选育及基因编辑研究提供基础。本专利技术所采用的检测和分析方法主要包括如下步骤：分别在10,11,12，以及1月，对处于越冬期内的耐寒1区(高抗)的‘左山二’，耐寒2区(抗寒)的‘双丰’，以及耐寒3区(中抗)的‘201230’三种不同的山葡萄进行枝条取样(每月进行一次，不同山葡萄取样在同日进行)；然后，对取样的山葡萄枝条进行低温半致死温度LT50(抗寒性指标的具体反映方式)确定，以及总水，自由水，束缚水，可溶性糖，淀粉，脯氨酸，可溶性蛋白，SOD，CAT，APX，GR，GA，ABA，以及IAA等十四项生理指标分别进行测定；接着，将不同生理指标与抗寒性进行相关性以及灰色关联分析，灰色关联度数值最大的生理指标，即为与山葡萄抗寒性最相关生理指标。经如上的检测和分析得出，与抗寒性相关性最高的生理指标为可溶性糖，由此也可以得出山葡萄枝条中越冬过程中可溶性糖含量的高低可以决定其越冬抗寒能力这一结论。因而，可以通过可溶性糖含量的比较，进行抗寒性山葡萄资源进行初步筛选(即筛选抗寒性更为优异的山葡萄品种)，而这也能够避免现有方法中低温处理、或者染色等过程步骤的繁杂，以及由于操作步骤较多所引起的筛选检测结果不准确等问题。为了确定对于山葡萄抗寒性更为相关的具体生化因素，本专利技术进一步对于山葡萄中的可溶性糖种类，以及不同可溶性糖与抗寒性相关性进行了进一步的检测分析，以得出对于山葡萄抗寒性相关性最为显著的可溶性糖种类。具体方法可参考如下：取山葡萄枝条试样(直接取样，无需人工冷冻处理)，加入预冷乙醇溶液，冰浴条件下研磨后，离心取上清液，然后氮气吹除残余乙醇，上清液以蒸馏水洗涤后，过尼龙注射器和硅胶柱纯化；纯化后样品以高效液相色谱进行组分分析，并根据样品峰高和各种化合物的标准曲线计算各组分含量。经如上检测分析，由三种山葡萄枝条本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法，其特征在于，包括：在不同时期，对处于越冬期内的山葡萄进行抗寒性以及生理指标测定；然后，将不同生理指标与抗寒性进行相关性以及灰色关联分析，灰色关联度数值最大的生理指标，即为与山葡萄抗寒性最相关生理指标。

【技术特征摘要】
1.一种山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法，其特征在于，包括：在不同时期，对处于越冬期内的山葡萄进行抗寒性以及生理指标测定；然后，将不同生理指标与抗寒性进行相关性以及灰色关联分析，灰色关联度数值最大的生理指标，即为与山葡萄抗寒性最相关生理指标。2.根据权利要求1所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法，其特征在于，包括：分别在10,11,12以及1月对处于越冬期内的山葡萄进行抗寒性以及生理指标测定。3.根据权利要求1所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法，其特征在于，包括：对不同品种的山葡萄进行抗寒性以及生理指标测定。4.根据权利要求3所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法，其特征在于，包括：对‘左山二’，‘双丰’，以及‘201230’三种不同的山葡萄种质进行抗寒性以及生理指标测定。5.根据权利要求1所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法，其特征在于，所述抗寒性以低温半致死温度表征。6.根据权利要求1所述的山葡萄越冬抗寒性相关指标分析的方法，其特征在于，所述生理指标包括：总水，自由水，束缚水，可溶性糖，淀粉，脯氨酸，可溶性蛋白，S...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵滢，艾军，杨义明，路文鹏，张宝香，刘迎雪，曹建冉，
申请(专利权)人：中国农业科学院特产研究所，
类型：发明
国别省市：吉林,22