一种柴达木双层环伞菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种柴达木双层环伞菌及其应用，属于生物技术领域。所述柴达木双层环伞菌由来源于青海省柴达木盆地的野生大肥菇组织分离并纯化获得，命名为柴达木双层环伞菌亚种ZJU‑CDMA‑12，已于2018年05月04日保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO:M 2018250。从该菌株提取分离出的子实体多糖、发酵液多糖和菌丝体多糖具有抗疲劳、抗缺氧活性。柴达木双层环伞菌亚种ZJU‑CDMA‑12菌丝体可作为提取抗疲劳、抗缺氧活性因子的来源，也可作为制备具有抗疲劳、抗缺氧功能的食品或者食药两用因子，具有非常广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种柴达木双层环伞菌及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种柴达木双层环伞菌亚种高等真菌ZJU-CDMA-12菌株及其应用。
技术介绍
青藏高原汇集了全球分布最高的大型真菌，被称为世界“高山真菌宝库”，适于耐寒性、耐缺氧大型真菌生长。据初步统计，喜马拉雅海拔3000～5800m，就有大型真菌300余种，金针菇、黄绿蜜环菌、铅色灰球菌等分布超过海拔4000m，为世界所罕见。柴达木双层环伞菌又名柴达木大肥蘑菇(Agaricusbitorquis(Quél.)Sacc.Qaidam)，为罕见的担子菌亚门(Basidiomycotina)、伞菌目(Agaricales)、蘑菇科、蘑菇属的低温型地生蘑菇，作为青藏高原真菌资源宝库中的代表种，被公认为最有开发价值的名贵野生药食兼用真菌之一。研究表明，从植物、真菌等中提取活性多糖具有调节免疫、抗肿瘤、降血糖、抗疲劳、抗缺氧、抗氧化等多种生物学功能。国内外研究者发现多糖可以通过多条细胞信号，包括G蛋白介导的信号转导途径、受体酪氨酸蛋白激酶(Receptortyrosineproteinkinase，RTPK)途径、NO信号转导途径、核转录因子κB(Nuclearfactor-kappaB，NF-κB)信号转导途径作用于相关细胞，从而发挥其免疫调节活性(Weimin，Z.，Wuren,M.,Jing,Z.etal.“Theimmunoregulatoryactivitiesofastragaluspolysaccharideliposomeonmacrophagesanddendriticcells”，《InternationalJournalofBiologicalMacromolecules》，105，852-861(2017))。多糖类化合物具有清除自由基，抑制脂质过氧化，抑制亚油酸氧化等抗氧化作用。不少研究提示，多糖的抗氧化性可能是抗肿瘤、抗衰老、抗感染等其它活性的作用机理之一。人参多糖具有抗疲劳作用，可以提高小鼠血中LDH、CK、葡葡萄糖和MDA水平，降低血清中TG和GSH-Px水平，其抗疲劳作用机理可能是通过调节抗氧化酶的活性来减慢脂质氧化过程，从而减弱细胞膜的氧化损害(Jia,W.,Shanshan,L.,Yuying,F.etal.“Anti-fatigueactivityofthewater-solublepolysaccharidesisolatedfromPanaxginsengC.A.Meyer”，《JournalofEthnopharmacology》，130，421-423(2010))。从粒盘毛菌种提取分离的真菌多糖LEP-1可以延长常压缺氧条件小鼠的游泳时间，同时在亚硝酸钠中毒试验中LEP-1能对缺氧损伤的细胞起到保护作用，从而表现出抗缺氧活性(Zhanzhan,D.,Shuai,Z.,MaheenMahwish,S.“Strtcturalcharacterizationandanti-hypoxiaactivityofanexopolysaccharideisolatedfromfermentationbrothofLachnumsp.”，《ProcessBiochemistry》，51，1290-1298(2016))。黑灵芝多糖能抑制缺氧/复氧引起的LDH的释放及细胞活力的下降，这种保护作用伴随着MDA含量减少，SOD、CAT、GSH-Px活性增强及蛋白表达量增大，并且能减少缺氧/复氧引起的ROS的释放及细胞凋亡；且黑灵芝多糖通过调节半胱氨酸蛋白酶、Bcl-2和氧化还原系统保护心肌细胞，防止缺氧/复氧诱导的线粒体介导的细胞凋亡(Wen-Juan,L.,Shao-Ping,N.,Yi,C.etal.,“GanodermaatrumPolysaccharideProtectsCardiomyocytesAgainstAnoxia/Reoxygenation-InducedOxidativeStressbyMitochondrialPathway”，《JournalofCellularBiochemistry》，110，191-200，(2010))。研究表明，许多天然多糖成分具有改善运动性疲劳的作用，其作用机制大多与提高机体糖储备以及提高机体免疫能力等方面有关，多糖抗运动性疲劳方面的研究成为近几年运动营养学领域研究一个热点。研究发现从玛卡中分离得到的多糖组分MPS-1和MPS-2均能延长小鼠的游泳时间，降低小鼠血清中LA、LDH和BUN水平，提高HG水平，表明该两种多糖具有抗疲劳作用(Jing,L.,Qingrui,S.,Qingran,M.etal.“Anti-fatigueactivityofpolysaccharidefractionsfromLepidiummeyeniiWalp.(maca)”，《InternationalJournalofBiologicalMacromolecules》，95，1305-1311(2017))。目前，涉及抗疲劳、抗缺氧的食品、保健品和药物也相继有开发报道。但是，涉及具有抗疲劳抗缺氧活性的食用菌多糖专利申请文件较少，CN105192514A公布了一种由黑木耳多糖浓缩液、大豆分离蛋白、乳清蛋白、果糖、植物油、麦芽糊精等成分构成的黑木耳多糖能量棒，该产品可以明显延长小鼠负重游泳时间，降低血乳酸和血尿素氮含量，同时具有增加机体糖原储备的作用，具有明显的抗疲劳和消除疲劳作用。综上，研究高效、经济、低毒甚至无毒的抗疲劳、抗缺氧食品功能因子具有十分重要研究意义和实际应用价值。基于新食品资源和特征功效成分的发掘是我国健康食品或维护人体健康的重要公益研究领域，其中围绕高海拔地域的独特食品资源发掘和关键功效成分解析具有重要战略意义和实际应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于重点挖掘一种生长在青藏高原柴达木盆地地区地下深层生长萌发的柴达木双层环伞菌亚种食用资源，并挖掘其活性多糖的抗疲劳、抗缺氧功能，开发具有更高生物活性功能的食用菌多糖，为开发天然、低毒甚至无毒、高效的抗疲劳、抗缺氧食品功能因子以及保健食品资源提供新的途径和解决方案。本专利技术提供了一种柴达木双层环伞菌，从青藏高原青海省柴达木大盆地生长在盆地戈壁地区表面盐层50-60cm下的野生柴达木双层环伞菌子实体中组织分离，经人工正常大气压下纯化与培养，得到新的菌株，命名为柴达木双层环伞菌亚种ZJU-CDMA-12(AgaricusbitorquisZJU-CDMA-12)，这是首次在低海拔地区正常条件下培养获得的柴达木双层环伞菌菌株。利用形态特征、培养形状和生理生化特征等微生物学特性对柴达木双层环伞菌亚种ZJU-CDMA-12鉴定为担子菌亚门(Basidiomycotina)、伞菌目(Agaricales)、蘑菇科、蘑菇属的低温型地生蘑菇Agaricusbitorquis(Quél.)Sacc.Qaidam，该菌株已于2018年5月4日保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCCNO:M2018250，保藏地址：中国武汉，武汉大学。该菌株具有下述生物学特性：菌体特征：为食用真菌，菌体长约52-74μm，宽约18-32μm。菌落特征：在P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种柴达木双层环伞菌，其特征在于，该菌株命名为柴达木双层环伞菌亚种ZJU‑CDMA‑12，其保藏号为CCTCC NO:M 2018250。

【技术特征摘要】
1.一种柴达木双层环伞菌，其特征在于，该菌株命名为柴达木双层环伞菌亚种ZJU-CDMA-12，其保藏号为CCTCCNO:M2018250。2.如权利要求1所述的柴达木双层环伞菌在制备抗疲劳或抗缺氧的药物或保健品中的应用。3.一种柴达木双层环伞菌多糖的制备方法，所述柴达木双层环伞菌多糖为子实体多糖、菌丝体多糖或发酵液多糖，其特征在于，所述子实体多糖的制备方法，包括：取如权利要求1所述的柴达木双层环伞菌的子实体，加入水中，于70-90℃水浴中浸提，收集上清液，浓缩后醇沉，收集沉淀，复溶后制得子实体多糖；所述菌丝体多糖的制备方法，包括：(1)将活化的如权利要求1所述的柴达木双层环伞菌菌种接入种子培养基，16-28℃避光培养，得到种子液；(2)将种子液接入液体扩大培养基中，16-28℃避光振荡培养，培养结束后，收集固形菌丝体，干燥；(3)将干燥的菌丝体粉碎后加入水中，细胞破碎，于70-90℃水浴中浸提，收集上清液，浓缩后醇沉，收集沉淀，复溶后制得菌丝体多糖；所述发酵液多糖的制备方法，包括：(a)将活化的如权利要求1所述的柴达木双层环伞菌菌种接入种子培养基，16-28℃避光培养，得到种子液；(b)将种子液接入液体发酵培养基中，16-28℃避光振荡培养；(c)过滤收集发酵液，浓缩后醇沉，收集沉淀，复溶后制得发酵液多糖。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(a)中，菌株活化时，将柴达木双层环伞菌亚种ZJU-CDMA-12菌种接种于PDA斜面培养基中，12-25℃避光培养7-40天。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述PDA斜面培养基中含有质量百分比为0.2％-0.7％的蛋白胨。6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，活化的条件为先在18℃下培养2天，再转移到23℃下避光培养19-28天。7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(a)中，所述种子培养基的组分包括：100-400g/L土豆提取物、10-35g/L葡萄糖、2-10g/L蛋白胨、0.01-0.1g/LCaCl2，pH值为3.0-7.8；种子液制备条件为：16-28℃避光振荡培养7-20天，转速为90-160rpm。8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养基的组分包括：200g/L土豆提取物、20g/L葡萄糖、5g/L蛋白胨、0.05g/LCaCl2，pH值为5.0；种子液制备条件为：23℃避光振荡培养14天，转速120rpm。9.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述扩大培养基的组分包括：10-60g/L葡萄糖、0-60g/L果糖、0-40g/L蔗糖、0-40g/L麦芽糖、2-10g/L蛋白胨、0.01-0.1g/LCaCl2、0...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈启和，旷慧，焦迎春，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33