一株白及内生真菌1-G1及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物应用技术领域，尤其涉及一株白及内生真菌1‑G1及其应用。一株白及内生真菌1‑G1，分类命名为间座壳属(Diaporthe spectabilis)，于2018年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC NO.60382。本发明专利技术首次从药用植物白及内部分离筛选到一株内生真菌(Diaporthe spectabilis)1‑G1，该菌株对白及各方面生长具有较强的促生作用，为白及的产量、质量控制带来广阔的应用前景。

A Strain of Endophytic Fungus 1-G1 from Bletilla striata and Its Application

The invention belongs to the field of microbial application technology, in particular to a white and endophytic fungus 1 G1 and its application. A strain of Endophytic fungus, Diaporthe spectabilis, was collected in Guangdong Microbial Species Preservation Center on June 06, 2018. The preservation number is GDMCC NO. 60382. For the first time, a strain of endophytic fungi (Diaporthe spectabilis) 1 G1 was isolated and screened from the interior of medicinal plant Bletilla striata. The strain has strong stimulating effect on the growth of Bletilla striata and various aspects, and has broad application prospects for the yield and quality control of Bletilla striata.

【技术实现步骤摘要】
一株白及内生真菌1-G1及其应用
本专利技术属于微生物应用
，尤其涉及一株白及内生真菌1-G1及其应用。
技术介绍
现代农业对植物病害的防治过度依赖于化学农药的使用，大量化学农药的施放不仅对生态环境具有长期的破坏作用，也引起农产品品质下降，农药残留超标、病原菌的耐药性以及对人畜有害等诸多问题。寻找更为安全、有效的病害防治方法具有重大的意义，利用生物的方法来防治植物病害可以有效解决上述问题。白及Bletillastriata(Thunb.)Reichb.F.为兰科白及属多年生草本植物，名白鸡儿、羊角七、军求子、地螺丝等，白及是我国传统的中药材之一，其肉质肥厚且具黏性的块茎可入药，具有止血、保护粘膜、抗肿瘤、抗菌等功效，很少有植物多糖具有收敛的功效，因此素有“必涩而收，入肺止血，生肌治疮，外科最善”之称，为白及糖浆、白及冲剂、胃康灵、快胃片等中成药的主要组方原料。近年来，由于野生白及受到过度开发和自然栖息地的破坏，野生白及资源直线下降，白及药材的产量和质量得不到保证，现已被国家列为重点保护的野生药用植物之一，目前已经濒危。由于白及种子无胚乳，难以直播成苗，且组培苗种植成活率较低。这都使得进行白及大规模种植困难重重。目前，广西地区白及的人工栽培过程中，多采用野生白及分块茎种植，大苗种植三年收获。但种苗质量标准缺乏、品种与质量控制技术研发应用滞后，都是制约白及产业可持续发展的关键问题。因此，为此筛选出能促进白及生长的内生真菌具有重大意义，筛选进而开发利用白及内生真菌也是有效保证白及药材质量的措施之一。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一株白及内生真菌1-G1，该菌株具有促进白及生长的作用，从而能有效促进白及生长、提高产量，更进一步提高白及的质量。本专利技术提供的技术方案如下：一株白及内生真菌1-G1，分类命名为间座壳属(Diaporthespectabilis)，于2018年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCCNO.60382。本专利技术还提供了所述的白及内生真菌1-G1在促进白及生长作用中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术首次从药用植物白及内部分离筛选到一株内生真菌(Diaporthespectabilis)1-G1，该菌株对白及各方面生长具有较强的促生作用，为白及的产量、质量控制带来广阔的应用前景。附图说明图1为本专利技术的白及内生真菌1-G1菌落形态图；图2为本专利技术的白及内生真菌1-G1活性菌株发酵液IAA含量的测定；图3为本专利技术的白及内生真菌1-G1活性菌株铁载体合成能力检测；图4为24株白及内生真菌与其相似真菌的系统发育关系。保藏信息说明Diaporthespectabilis，其保藏编号为GDMCCNO.60382，保藏日期为2018年06月06日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC，地址：中国广州市先烈中路100号省微生物所实验楼五楼，邮政编码：510070)。具体实施方式以下实施例以便更好的理解本专利技术，并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的定量实验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例1：菌株的分离、筛选与鉴定1.1菌株的分离供试材料：采自广西资源县和环江自治县的野生白及。培养基：1000ml马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)；PDA培养基含马铃薯300g、葡萄糖20g、琼脂20g，培养基pH值为6.0±0.2；DE培养基含0.111mgCaCl2，0.174mgK2SO4，27.8mgFeSO4·7H20，6.501mgMnCl2·4H20，0.241mgNaMo4，0.123mgMgSO4·7H20，0.0544mgKH2PO4，1.545mgH3BO4，0.80516mgZnSO4·7H20，52.108mgNa2EDTA·2H20，9g可溶性淀粉，1g酵母膏，8g琼脂，1000mL水，pH值6.0。表面消毒：将野生白及植株根和块茎上的泥土和附着物轻轻抖落，于流水下冲洗，将洗净的白及根和块茎置于滤纸上吸干水分备用。在超净工作台上，将白及根和块茎置于无菌水中，充分振荡洗净捞出，按顺序进行表面消毒，75％酒精中表面消毒15s，2％的次氯酸钠溶液消毒6-10min，无菌水冲洗4-5次。采用常规的组织块分离法，将组织表面消毒后的白及根和块茎置于无菌的滤纸上，吸干水分。菌株的分离、纯化：将消毒后的白及根和块茎截成1cm×1cm的小块，将根和块茎组织块分别接种于PDA平板培养基上，每个培养皿接种4个组织块，置于霉菌培养箱中，28℃恒温，黑暗，倒置培养。为保证白及根和块茎表明灭菌彻底，用无菌的移液枪取最后一次清洗白及根和块茎的无菌水涂布于新的PDA培养基上，重复3组培养皿，置于霉菌培养箱中，28℃倒置培养7d，若PDA平板上无杂菌长出，则证明组织表面消毒彻底，分离得到的真菌为内生真菌。白及块茎组织在PDA培养基上培养2-3d后，可观察到有菌丝从组织块边缘长出，待菌丝长至肉眼可见的菌落时，用无菌的牙签从菌落边缘挑取少量菌丝接种到新的PDA培养基上，重复转接至得到纯菌落。将分离到的内生真菌接种于PDA平板内，28℃下培养7-10天后待用。1.2筛选采用白及无菌苗与内生真菌共生培养对供试白及内生真菌进行促生活性的初筛。按DE培养基配方提前配置共生培养基，分装置250mL组培瓶中，每瓶121℃，30min灭菌备用。在超净工作台上，将白及无菌组培苗取出，用无菌水洗净根部带出的培养基，置于无菌滤纸上吸干水分，然后移入DE培养基中。每瓶接4株，呈“口”字居中排列，转接完成后放入培养室中培养15d，温度25-26℃，每天光照8-12h，光照强度为2000-3000Lux。待白及无菌苗于DE培养基上生长15d后，其生长状态基本稳定。此时，分别从已活化的白及内生真菌母菌落边缘打取直径为0.6cm的菌饼作为接种材料，挑取菌饼接种到4株白及苗的中间，距苗约2cm，每个组培瓶内接种一块，每个菌株重复3瓶，对照组接入无菌的PDA琼脂块。接种完成后封口，放于培养室中培养，温度25-26℃，每天光照8-12h，光照强度为2000-3000Lux。定期观察真菌及白及组培苗的生长状态。共生培养30天后，以菌生长速度适中且白及无菌苗正常生长为标准，挑选出能与白及无菌苗良好共生的真菌。将初筛得到的菌株，以相同的方法，重新接种于DE培养基中，每瓶3株无菌苗，以接入相同大小的无菌琼脂块作为对照。相同的培养条件，共生培养60d后，分别取出对照苗和共生苗，洗净根部残留培养基，用滤纸吸干表面水分。测定其株高、新生根数、新生芽数、块茎直径大小。结果共得到5株对白及促生效果都很强的促生真菌菌株，其中一株名称为1-G1。1.3鉴定(一)菌株形态特征菌体形态特征观察：将待鉴定的内生菌真菌菌株1-G1接种在PDA培养基上，置于28℃培养，分别在5、14及20天观察其培养特征和颜色变化。取稳定成熟的颜色特征作为其培养特征，作为鉴定的依本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株白及内生真菌1‑G1，其特征在于，分类命名为间座壳属(Diaporthe spectabilis)，于2018年06月06日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC NO.60382。

【技术特征摘要】
1.一株白及内生真菌1-G1，其特征在于，分类命名为间座壳属(Diaporthespectabilis)，于2018年06月06日保藏...

【专利技术属性】
技术研发人员：李良波，田佩雯，黄荣韶，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西,45