仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙在制备抗癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及仙鹤草内酯‑6‑O‑葡萄糖甙在制备抗癌药物中的应用。提供了仙鹤草内酯‑6‑O‑葡萄糖甙对肝癌具有较好的抗肿瘤效果，有望开发成为抗肿瘤新型药物，并进一步推进临床研究的发展。

【技术实现步骤摘要】
仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙在制备抗癌药物中的应用
本专利技术属于医药
，具体涉及仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙在制备抗癌药物中的应用。
技术介绍
仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙(Agrimonolide6-O-glucoside，CAS号：126223-29-8)为蔷薇科植物仙鹤草中黄酮类成分，分子式为C24H28O10，分子量476.5。仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙为白色粉末，不溶于水，可溶于乙醇和二甲基亚砜。最新研究发现，仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙具有明显的抗炎活性。但目前尚未有文献报道仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙具有较为突出的抗癌效果。
技术实现思路
针对上述问题和现有技术的不足，本专利技术提供了仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙在制备抗癌药物中的应用，所述的仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙的化学结构式如式Ⅰ所示，CAS号：126223-29-8：进一步地，所述的癌症为肝癌。本专利技术的有益效果在于：提供了仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对肝癌具有较好的抗肿瘤效果，有望开发成为抗肿瘤新型药物，并进一步推进临床研究的发展。附图说明图1：仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对细胞增殖Wnt信号蛋白表达影响的免疫印迹实验(n＝3)具体实施方式实施例1仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对人源性肝癌细胞(HepaRG)的细胞毒作用1、药品及试剂：仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙购自天津万象恒远科技有限公司，纯度98.51％。噻唑蓝(MTT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒、二甲基亚砜(DMSO)、十二烷基硫酸钠(SDS)均购自美国Sigma公司；RPMI1640液体培养基、青-链霉素双抗及胰蛋白酶-EDTA溶液购自美国Thermo公司。2、细胞株HepaRG细胞株购于上海中科院细胞库。3、仪器设备CO2培养箱及全自动酶标仪为美国Thermo公司生产；倒置显微镜为日本OLYMPUS公司产品；台式低温离心机为美国Sigma公司产品。4、实验方法4.1细胞培养及药物配制细胞用含10％小牛血清和青、链霉素各100U/ml的RPMI1640培养液，置37℃、5％CO2的培养箱培养。2天换液一次，取对数生长期细胞进行实验。称取仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙，用5％DMSO溶解，并用细胞培养液稀释成应用浓度。4.2MTT法测定细胞增殖活性取对数生长期细胞，用RPMI1640培养液调整细胞浓度至1×105/ml，在96孔培养板中以90μl/孔加入细胞悬液，10μl/孔加入药物，培养24或48小时。于实验终止前4h加入MTT(10μl/孔)，实验终止时加入10％SDS(100μl/孔)，震荡10分钟，于波长570nm处测定吸光值。根据下式计算抑制率(IR)值。抑制率(IR.％)＝((阴性OD均值－受试药OD均值)/阴性OD均值)×100％。4.3LDH法测定细胞毒作用取对数生长期细胞，用RPMI1640培养液调整细胞浓度至1×105/ml，在96孔培养板中以90μl/孔加入细胞悬液，10μl/孔加入药物，应用1％血清培养基继续培养24或48小时。收集细胞培养液，根据LDH检测试剂盒操作说明进行测定,以给药组数据与对照组数据的比值计算LDH释放率。4.4统计分析计量资料数据用均数±标准差表示，采用SPSS19.0进行t检验统计分析。P＜0.05为有统计学意义。5、实验结果5.1仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对HepaRG细胞增殖的影响由表1可以看出，仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对HepaRG细胞增殖均有一定抑制作用，且在浓度为12.5～400μmol/L的剂量范围内呈明显的剂量和时间依赖性。处理时间为48h时，仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对HepaRG细胞的IC50为520.68μmol/L。表1仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对HepaRG细胞增殖的影响(n＝4)注：*P＜0.01，**P＜0.001vs阴性对照组5.2仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对HepaRG细胞毒作用如表2所示，12.5～400μmol/L的仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙孵育HepaRG细胞24h及48h后，LDH释放率呈现明显的剂量和时间依赖性。50～400μmol/L仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙孵育后，HepaRG细胞中LDH的释放率显著高于阴性对照组(P＜0.05)。表2仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对HepaRG细胞LDH释放率的影响(n＝4)注；*P＜0.01，**P＜0.001vs阴性对照组6、结论本实验MTT细胞增殖实验及LDH细胞毒实验考察了仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对人源性肝癌HepaRG细胞增殖及细胞活力的影响。结果显示，仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙(12.5～400μmol/L)孵育细胞可显著抑制受试肿瘤细胞的增殖活性并具有明显的细胞毒作用，而且仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对肿瘤细胞的抑制及杀伤作用具有时间和剂量依赖性，提示仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙具有抗肿瘤细胞增殖及肿瘤细胞杀伤作用。实施例2仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对HepaRG细胞凋亡及细胞周期的影响1、实验材料1.1药品及试剂仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙购自天津万象恒远科技有限公司，纯度98.51％。二甲基亚砜(DMSO)和碘化丙啶(PI)均购自美国Sigma公司；RPMI1640液体培养基、青-链霉素双抗及胰蛋白酶-EDTA溶液购自美国Thermo公司。1.2细胞株HepaRG细胞株购于上海中科院细胞库。1.3仪器设备CO2培养箱为美国Thermo公司生产；Beckman-Coulter流式细胞仪为美国Fullerton公司产品；倒置显微镜为日本OLYMPUS公司产品；台式低温离心机为美国Sigma公司产品。2、实验方法取对数生长期HepaRG细胞，用含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液调节细胞浓度为1×105/ml，以9ml/瓶接种至100ml培养瓶内。培养48小时后，分别以1ml/瓶加入仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙或0.01％DMSO，继续培养24小时。实验终止时先将培养液离心(2g，10min)，再消化贴壁细胞离心，混合所得细胞沉淀用预冷的PBS洗2遍，用70％乙醇固定。细胞固定24小时后离心，弃去固定液，用PBS洗1遍；细胞沉淀中加入含RNA酶(50mg/ml)的碘化丙啶(PI，50mg/ml)溶液0.5ml，避光、室温放置30min后过300目细胞筛；流式细胞仪(激发波长488nm，吸收波长600nm)检测，用FlowJo10.0软件分析，计算凋亡细胞百分数和各细胞周期百分数。3、统计分析计量资料数据用均数±标准差表示，采用SPSS19.0进行t检验统计分析。P＜0.05为有统计学意义。4、实验结果4.1仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙对HepaRG细胞凋亡率的影响如表3所示，阴性对照组细胞无明显凋亡，凋亡率为0.12±0.08％。仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙50、100及200μmol/L处理HepaRG细胞在G1期前出现明显凋亡峰，凋亡率分别为4.7±2.7、13.4±1.8和21.1±2.3％；且仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙100及200μmol/L处理的HepaRG细胞的凋亡率均明显高于阴性组(P＜0.05)，说明仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙可诱导肿瘤细胞凋亡。表3仙鹤草内酯-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.仙鹤草内酯‑6‑O‑葡萄糖甙在制备抗癌药物中的应用，所述的仙鹤草内酯‑6‑O‑葡萄糖甙的化学结构式如式Ⅰ所示，CAS号：126223‑29‑8。

【技术特征摘要】
1.仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙在制备抗癌药物中的应用，所述的仙鹤草内酯-6-O-葡萄糖甙的化学结构式...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦红岩，席莉莉，姚佳，张磊，李汛，
申请(专利权)人：兰州大学第一医院，
类型：发明
国别省市：甘肃,62