ADCY2作为乳腺癌的分子标记物的应用制造技术

本发明专利技术公开了ADCY2作为乳腺癌的分子标记物的应用，本发明专利技术人发现ADCY2在乳腺癌组织或乳腺癌细胞中的表达上调。本发明专利技术还公开了用于乳腺癌检测或预后的试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增ADCY2的引物序列。利用本发明专利技术的试剂盒进行乳腺癌的辅助诊断和预后评估，对后续临床治疗具有指导意义。另外，还可将ADCY2抑制剂用来制备预防或治疗乳腺癌的药物组合物以用于乳腺癌的基因治疗、药物治疗等临床应用。

Application of ADCY2 as a Molecular Marker of Breast Cancer

The present invention discloses the application of ADCY2 as a molecular marker of breast cancer. It is found that the expression of ADCY2 is up-regulated in breast cancer tissues or breast cancer cells. The invention also discloses a kit for breast cancer detection or prognosis, which includes a primer sequence specifically amplifying ADCY2. The kit of the invention can be used for assistant diagnosis and prognosis evaluation of breast cancer, and has guiding significance for subsequent clinical treatment. In addition, ADCY2 inhibitors can also be used to prepare pharmaceutical compositions for the prevention or treatment of breast cancer for clinical applications such as gene therapy and drug therapy of breast cancer.

【技术实现步骤摘要】
ADCY2作为乳腺癌的分子标记物的应用
本专利技术涉及肿瘤分子生物学
，具体涉及ADCY2作为乳腺癌的分子标记物的应用。
技术介绍
乳腺癌已成为世界上女性中发病率最高的肿瘤，严重影响女性的生命健康。尽管筛查方案和辅助疗法的发展取得了成功，但相当大比例的乳腺癌患者死于癌症转移。与其他大多数国家一样，乳腺癌也成为了中国女性最常见的癌症；每年中国乳腺癌新发数量占全球的12.2％，死亡数量占全球的9.6％。90年代以来，中国的乳腺癌发病率增长速度是全球的两倍多，城市地区尤为显著。乳腺癌诊治的关键在于早发现、早诊断和早治疗。癌基因的激活，或者抑癌基因的失活在肿瘤发生发展过程中起着关键作用。随着大规模、高通量测序技术的推广应用，发现新的癌基因和抑癌基因不仅为肿瘤的诊断和预后提供了颇具价值的标准，同时也为寻找新的肿瘤生物治疗靶点奠定基础。腺苷酸环化酶(adenylatecyclase,简称ADCY)是膜整合蛋白，能够将ATP转变成cAMP，引起细胞的信号应答，是G蛋白偶联系统中的效应物，其广泛分布于哺乳动物的细胞膜中。人ADCY2基因位于染色体5的NC_000005.10位置，ADCY2的参考包括NCBI(GenBank)参考序列转录物(NM_020546.2)及其编码的蛋白(NP_065433.2)。目前，关于ADCY2基因或蛋白在乳腺癌中的作用机制尚不清楚，其功能和表达变化的临床意义尚未有报道。因此，分析ADCY2基因与乳腺癌发生发展的关系，探索针对ADCY2途径的肿瘤治疗策略有利于改善针对乳腺癌的检测和治疗。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术一个目的是提供乳腺癌的分子标记物ADCY2在制备乳腺癌检测、预后或治疗产品中的应用，其中所述分子标记物为ADCY2基因或蛋白，其具有NCBI数据库的基因ID:108所示人ADCY2的NM_020546.2或NP_065433.2所示序列。如本专利技术所用，术语ADCY2(腺苷酸环化酶2)是指人ADCY2基因或蛋白、或其同源物、或具有其生物活性的变体形式。本专利技术采用RT-PCR方法检测了ADCY2基因在人乳腺癌组织和癌旁组织中的表达，并验证了ADCY2基因在乳腺癌组织或乳腺癌细胞中表达上调。如本专利技术所用，术语“表达上调”是指所表达基因的序列量测量证明，相对于癌旁正常乳腺组织或健康人乳腺组织，所检测的患者乳腺癌组织中测量的该基因表达量具有至少1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或更多的表达增加，例如正常乳腺组织中该基因表达量为乳腺癌组织中该基因表达量的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％或更低。本专利技术一个方面提供了乳腺癌的分子标记物ADCY2在制备用于乳腺癌检测或预后的试剂盒中的应用。在本专利技术的一些实施方案中，所述检测或预后为根据所检测对象的生物样本中的ADCY2表达水平来判断对象中乳腺癌的疾病状况、进行疗效评估或转移复发监控，优选所述生物学样本为乳腺癌组织或乳腺癌细胞。本专利技术另一个方面提供了用于乳腺癌检测或预后的试剂盒，其包含特异性扩增人ADCY2基因的引物对，其中正向引物为如SEQIDNO.1所示的序列，反向引物为如SEQIDNO.2所示的序列；另外，用于扩增内参GAPDH的引物对为如SEQIDNO.3所示的正向引物和如SEQIDNO.4所示的反向引物。进一步地，所述试剂盒还包括RNA提取试剂、反转录试剂，以及PCR反应常用试剂如逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、DEPC水和Taq酶等，还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术又一个方面提供了ADCY2抑制剂在制备预防或治疗乳腺癌的药物组合物中的应用，其中所述ADCY2抑制剂为能降低ADCY2表达量的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反义核苷酸；或者能表达或形成所述siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、反义核苷酸的构建物。在本专利技术上述应用的一些实施方案中，所述ADCY2抑制剂为siRNA或shRNA。在本专利技术上述应用的一些实施方案中，所述药物组合物包括有效量的ADCY2抑制剂和药学上可接受的载体，进一步地所述药物组合物还包括预防或治疗乳腺癌的其他药剂。如本文所用，所述“有效量”是指可对哺乳动物(优选人)产生功能或活性的且可被哺乳动物(优选人)所接受的量。所述“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂；所述载体本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。所述合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。所述药物组合物中的药学上可接受的载体可含有液体如水、盐水、缓冲液，并且还可能存在辅助性物质如填充剂、润滑剂、助流剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等。所述载体中还可以含有细胞(如宿主细胞)转染试剂。本专利技术可以采用本领域熟知的多种方法来将ADCY2抑制剂、或其编码基因、或其药物组合物施用于患者如哺乳动物，优选人。包括但不限于：皮下注射、肌肉注射、经皮给予、局部给予、植入、缓释给予等；优选的，所述给药方式是非肠道给予的。也可选择采用基因治疗的手段进行乳腺癌的治疗，如直接将ADCY2抑制剂通过诸如注射等方法施用于患者；或者，可通过一定的途径将携带ADCY2抑制剂的表达单位如表达载体或病毒等递送到靶点上，并使之表达具有活性的ADCY2抑制剂，具体情况需视所述的药剂类型而定，这些均是本领域技术人员所熟知的。本专利技术的药物组合物可以进一步包含一种或多种抗癌剂。在具体的实施方案中，药物组合物包含至少一种促进ADCY2基因表达的化合物和至少一种化疗剂。用于本专利技术的药物组合物中的化疗剂，包括但不限于：DNA-烷化剂、抗肿瘤抗生素剂、抗代谢剂、微管蛋白稳定剂、微管蛋白去稳定剂、激素拮抗剂、拓扑异构酶抑制剂、蛋白激酶抑制剂、HMG-COA抑制剂、CDK抑制剂、细胞周期蛋白抑制剂、胱天蛋白酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、反义核酸、三链螺旋DNA、核酸适体和分子修饰的病毒、细菌和外毒素试剂。在本专利技术中，“预后”是指癌症患者在通过手术、化疗、药物治疗或其组合处理等抑制或缓解肿瘤生长后的过程或结果。预后可以是通过手术、化疗、药物治疗或其组合处理抑制或缓解乳腺癌生长后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20年或更久时的生机状态。预后可以通过检测标志物来评估，所述标志物为一个或多个基因。预后评估可以这样进行：根据标志物的有或无，或者升高或降低，确定患者的预后是否良好，或者确定良好预后或不良预后的概率。本专利技术的药物组合物还可与其他治疗乳腺癌的药物联用，其他治疗性化合物可以与主要活性成分同时给药，甚至在同一组合物中同时给药。本专利技术的药物组合物还可以以单独的组合物或与主要活性成分不同的剂量形式单独给予其它治疗性化合物。主要活性成分的部分剂量可以与其它治疗性化合物同时给药，而其它剂量可以单独给药。在治疗过程中，可以根据症状的严重程度、复发的频率和治疗方案的生理应答，调整本专利技术药物组合物的剂量。有益效果：本专利技术人发现分子标记物ADCY2在患者的乳腺癌组织中相对于在癌旁组织中表达明显上调，因此可以将ADCY2用作乳腺癌辅助诊断和预后的标志物，以及制备用于乳腺癌检测和/或治疗的产品。本专利技术提供的用于检测乳腺癌的试剂盒，可以用于乳腺癌的辅助诊断和预后评估；另本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.ADCY2作为乳腺癌的分子标记物在制备乳腺癌检测、预后或治疗产品中的应用，其特征在于，所述分子标记物为ADCY2基因或蛋白，其具有NCBI数据库的基因ID:108所示人ADCY2的NM_020546.2或NP_065433.2所示序列。

【技术特征摘要】
1.ADCY2作为乳腺癌的分子标记物在制备乳腺癌检测、预后或治疗产品中的应用，其特征在于，所述分子标记物为ADCY2基因或蛋白，其具有NCBI数据库的基因ID:108所示人ADCY2的NM_020546.2或NP_065433.2所示序列。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述分子标记物ADCY2在患者的乳腺癌组织或乳腺癌细胞中表达上调。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述产品为用于乳腺癌检测或预后的试剂盒。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测或预后为根据所检测对象的生物样本中的ADCY2表达水平来判断对象中乳腺癌的疾病状况、进行疗效评估或转移复发监控。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述生物学样本为乳腺癌组织或乳腺癌细胞。6.用于乳腺癌检测或预后的试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：何劲松，韦伟，崔军威，李锋，刘宝儿，阳莉萍，高睿，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院北京大学深圳临床医学院，
类型：发明
国别省市：广东,44