本发明专利技术公开了miR‑495在制备胰腺神经内分泌肿瘤诊断工具中的应用。本发明专利技术还提供了用于检测胰腺神经内分泌肿瘤的诊断试剂盒。进一步，本发明专利技术还提供了用于胰腺神经内分泌肿瘤预防或治疗的药物组合物，所述药物组合物包含miR‑495的模拟物作为活性成分。本发明专利技术发现miR‑495特异性强，灵敏度高，能够有效地用于早期检测胰腺神经内分泌肿瘤，并且可用于基因治疗、药物治疗等临床应用。
Application of microRNA-495 in the preparation of diagnostic tools for pancreatic neuroendocrine tumors
The invention discloses the application of microRNA 495 in the preparation of diagnostic tools for pancreatic neuroendocrine tumors. The invention also provides a diagnostic kit for detecting pancreatic neuroendocrine tumors. Further, the present invention also provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of pancreatic neuroendocrine tumors, which includes mimics of microRNA 495 as active ingredients. The invention has strong specificity and high sensitivity, and can be effectively used for early detection of pancreatic neuroendocrine tumors, and can be used in clinical applications such as gene therapy, drug therapy, etc.
【技术实现步骤摘要】
miR-495在制备胰腺神经内分泌肿瘤诊断工具中的应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及miR-495在制备胰腺神经内分泌肿瘤诊断工具中的应用。
技术介绍
神经内分泌肿瘤(neuroendocrineneoplasms，NENs)起源于多潜能神经内分泌干细胞且具有神经内分泌标记物、能够产生生物活性胺和/或多肽激素，且具有显著异质性。根据其胚胎起源，NENs一般分为前肠、中肠、后肠肿瘤。前肠肿瘤发生于呼吸道、胸腺、胃、十二指肠和胰腺。中肠肿瘤发生于小肠、阑尾和升结肠。后肠肿瘤发生于横结肠、降结肠和直肠。过去30年间，NENs患病率从1.09/10万上升至5.25/10万。相比其他肿瘤，NENs的增加更为迅速，这可能与诊断技术进步、肿瘤筛查更加频繁及环境因素等有关。胰腺神经内分泌肿瘤(pancreaticneuroendocrinetumors，PNETs)约占所有神经内分泌肿瘤的1/3，在胰腺肿瘤中所占百分率约为2％～5％。PNETs尽管少见，但往往因具有激素分泌而作用于全身多系统,严重影响病人健康和生活质量,且较易发生肝转移，常因肝功能衰竭而死亡。随着影像学技术的进步，检出率亦呈现升高趋势。由于临床表现、病理特征、恶性程度及预后差异较大，目前临床上对pNENs的认识尚不充分，易误诊和漏诊。对于各种PNETs，2017版内分泌肿瘤WHO分类分为：①分化型PNETs(神经内分泌肿瘤)，又分为G1,G2和G3三个级别；②未分化型PNEC(神经内分泌癌)，又分为小细胞型和大细胞型,高度恶性；③混合型神经内分泌-非神经内分泌肿瘤。从临床表现方面看，PNETs可分为功能性和无功能性两类，功能性可产生典型的临床症状，最常见的有胰岛素瘤和胃泌素瘤。无功能性近年明显升高，它们仅分泌多肽片段，较少或不分泌激素，不产生临床内分泌异常征象。功能性PNETs因早期即可产生症状而获得及时治疗；无功能性者则常延误诊断，肿瘤常生长很大，产生局部侵袭或远处转移。目前PNETs的治疗以外科手术为主，适用于肿瘤比较局限的患者，但预后差异较大。药物治疗可应用生长抑素类似物如奥曲肽和善的定，能部分缓解症状。分子靶向药物舒尼替尼已被批准用于PNETs的治疗，但临床观察显示，舒尼替尼治疗PNETs，在短暂获益后，肿瘤侵袭能力显著增强，更易发生转移。抗血管生成及抗生长因子的靶向药物治疗是新近尝试的治疗方法，疗效有待确定。miRNA(microRNA)是一类长度为20～25个核苷酸的非编码小分子RNA，由高等真核生物基因组编码，miRNA通过自身的种子序列(seedsequence)和靶基因mRNA碱基配对引导沉默复合体降解mRNA或阻碍其翻译。研究表明miRNA通过调控靶基因的表达，影响肿瘤的发生和发展，参与肿瘤调控的信号网络。因此，提示寻找潜在的miRNA靶点，可能为PNETs早期发现、治疗提供新的思路。
技术实现思路
为了解决以上提到的技术问题，本专利技术的目的在于提供一种miRNA在胰腺神经内分泌肿瘤诊治中的用途。基于此，专利技术人在对胰腺神经内分泌肿瘤的相关研究中发现，miR-495在胰腺神经内分泌肿瘤细胞中的表达显著低于正常细胞。这表明miR-495表达异常与胰腺神经内分泌肿瘤发生发展相关，miR-495在胰腺神经内分泌肿瘤的发病及进程中发挥重要作用，并可作为胰腺神经内分泌肿瘤辨别的标志物。因此，胰腺神经内分泌肿瘤患者血液中miR-495的含量高低可作为诊断胰腺神经内分泌肿瘤的依据，即miR-495可作为诊断胰腺神经内分泌肿瘤的一个分子标记物。首先，本专利技术提供了miRNA在制备胰腺神经内分泌肿瘤诊断工具中的应用，所述miRNA选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述miRNA是miR-495。所述miR-495的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示。在本专利技术的一些具体的实施方式中，所述miRNA是成熟miR-495-5p；所述miR-495-5p的核苷酸序列如SEQIDNO:11所示。虽然在某些具体实施方式中所使用的是成熟miRNA，但是本领域技术人员可以预期，初始miRNA、前体miRNA将可以获得与成熟miRNA同样的技术效果，因为细胞有能力进一步将初始miRNA、前体miRNA加工为成熟miRNA。优选的，相对于正常胰腺上皮细胞H6C7相比，miR-495在胰腺神经内分泌肿瘤细胞中表达下调。优选的，所述工具包括但不限于，试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台。所述诊断工具包括用于检测miR-495表达水平的试剂。优选的，所述试剂盒包括针对miR-495的引物和/或探针；所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于miR-495的部分或全部序列；所述试纸包括针对miR-495的引物和/或探针；所述高通量测序平台包括针对miR-495的引物和/或探针。进一步地，本专利技术提供了用于检测胰腺神经内分泌肿瘤的诊断试剂盒，所述试剂盒包括特异性扩增胰腺神经内分泌肿瘤相关的miR-495的引物和说明书。优选的，所述引物包括序列分别为SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的cDNA扩增引物对。优选的，可以将上述miR-495和多种miRNA的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种miRNA指标联合诊断胰腺神经内分泌肿瘤的情况也包含在本专利技术的保护范围之内。更进一步地，本专利技术提供了所述的miR-495在制备预防或治疗胰腺神经内分泌肿瘤的药物组合物中的应用。优选的，所述药物组合物包括有效剂量的miR-495促进剂。本专利技术使用的“有效剂量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。本专利技术所述的miR-495的有效剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于：所述miRNA促进剂的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。优选的，所述miR-495促进剂能够促进miR-495的表达或者能够激活miR-495的功能。进一步，miR-495促进剂包括寡核苷酸(模拟物)、小分子化合物、寡核苷酸表达载体。优选的，所述用于寡核苷酸表达的载体包括病毒载体、真核载体。所述病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒载体、甲病毒载体等。所述真核表达载体可以是任何适当的表达载体，包括但不限于pCMV-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA3.1表达载体、pEGFP表达载体、pEFBos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体等。优选的，所述miR-495促进剂是miR-495模拟物或者miR-495序列的表达载体。优选的，所述miR-495模拟物的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示。本专利技术的治疗胰腺神经内分泌肿瘤的药物组合物还包含药物学上可以接受的载体，所述载体包括但不限于：稀释剂、缓冲剂、混悬剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.miRNA在制备胰腺神经内分泌肿瘤诊断工具中的应用，其特征在于，所述miRNA选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述miRNA是miR‑495。
【技术特征摘要】
1.miRNA在制备胰腺神经内分泌肿瘤诊断工具中的应用，其特征在于，所述miRNA选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述miRNA是miR-495。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述miRNA是成熟miR-495-5p。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，相对于正常胰腺上皮细胞H6C7相比，miR-495在胰腺神经内分泌肿瘤细胞中表达下调。4.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述工具包括试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台。5.用于检测胰腺神经内分泌肿瘤的早期诊断试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：王文泽，石秀玉，肖雨，李晓欧，鲁涛，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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