一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒，试剂盒包括Rad51蛋白、KU70蛋白免疫组化检测试剂及说明书，试剂盒使用方法是：先采取患者的正常组织与肿瘤组织分别进行Rad51蛋白及KU70蛋白免疫组化染色；后进行病理切片读片，测量染色强度及染色面积；按照染色强度x染色面积的计算方法进行免疫组化评分，若结果为：(肿瘤组织Rad51得分/正常组织Rad51得分)>1，且(肿瘤组织KU70得分/正常组织KU70得分)

【技术实现步骤摘要】
一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用
本专利技术涉及医药
，具体地说，是一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用。
技术介绍
胃肠道间质瘤(GastrointestinalStromalTumors，GIST)是一类起源于胃肠道间叶组织的肿瘤，占消化道间叶肿瘤的大部分，由于肿瘤对常规放疗不敏感，手术切除曾是治疗GIST唯一有效的方法，对于肿瘤进展转移或术后复发而失去手术机会的患者，其中位生存期仅6-18个月，5年生存率小于10％。10余年来，随着现代分子生物学技术在GIST临床诊断治疗中的广泛应用，尤其以伊马替尼为代表的分子靶向药物的出现和普及，使GIST患者的预后得到显著改善。靶向治疗成为肿瘤治疗的热门，目前，伊马替尼用于治疗晚期GIST及GIST术后辅助治疗的显著疗效以得到广泛共识，但同时伊马替尼的原发性和继发性问题也日益受到研究者关注，成为近期GIST研究的热点。目前，伊马替尼和舒尼替尼是用于治疗GIST的主要靶向药物，伊马替尼，酪氨酸激酶抑制剂，是一种小分子蛋白激酶抑制剂，它具有阻断一种或多种蛋白激酶的作用。临床用于治疗慢性髓性白血病和恶性胃肠道间质肿瘤。舒尼替尼可用于治疗失败或不能耐受的胃肠间质瘤(GIST)、不能手术的晚期肾细胞癌(RCC)、不可切除的，转移性高分化进展期胰腺神经内分泌瘤(pNET)成年患者。伊马替尼和舒尼替尼都能作为假底物与ATP竞争性结合KIT/PDGFRA受体的酪氨酸激酶位点，发挥阻滞激酶激活和信号传导的作用，此外，舒尼替尼还具有抗肿瘤血管形成的作用，虽然靶向药物的治疗明显改善了GIST的预后，约80％的患者在最初接受伊马替尼治疗后获益，但靶向药物耐药是不可避免的，耐药问题成为靶向治疗中的棘手问题。研究发现，有40％-50％的患者在接受伊马替尼治疗后2年内出现耐药，发生伊马替尼耐药的患者如接受舒尼替尼治疗，其无进展生存期。耐药可分为原发性耐药和继发性耐药，前者是指用药后疾病仍然进展或疾病稳定小于6个月者，后者是指经治疗病情稳定6个月之后再次发生的疾病进展。耐药性可能与以下因素有关：(1)基因突变因素；(2)KIT/PDGFRA基因的过表达等。因此，对于肿瘤耐药性的预测，可有助于靶向药物的选择。对于患者的恢复有很大的帮助。中国专利申请：CN105074009B公开了及一种EGFR抑制剂的敏感性的预测方法，其包括：(a)确定工序，该工序用以确定从受试者中采集的血液样品中是否存在KRAS基因来源的核酸或其蛋白质，以及确定该血液样品中的上述KRAS基因来源的核酸或其蛋白质是野生型还是变异型；以及，(b)判断工序，在上述工序(a)中，若在上述血液样品中检测到野生型KRAS基因来源的核酸或其蛋白质而没有检测到变异型KRAS基因来源的核酸或其蛋白质，则判断上述受试者的肿瘤对EGFR抑制剂敏感的可能性高，若在上述血液样品中检测到变异型KRAS基因来源的核酸或其蛋白质，则判断上述受试者的肿瘤对EGFR抑制剂不敏感的可能性高。但是关于本专利技术一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒及其应用目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是针对限现有技术的不足，提供一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒。本专利技术的第二个目的是针对现有技术的不足，提供一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒的应用。为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒，所述试剂盒包括操作说明书，所述操作说明书记载有：所述得分计算方法为：染色强度*染色面积；所述试剂盒内还包括正常组织标本、Rad51蛋白免疫组化检测试剂和KU70蛋白免疫组化检测试剂，所述Rad51蛋白免疫组化检测试剂包括兔抗人Rad51多克隆抗体、Rad51蛋白提取试剂、染料、FITC或Dylight549标记的山羊抗兔荧光二抗；所述KU70蛋白免疫组化检测试剂包括鼠抗人KU70单克隆抗体、KU70蛋白提取试剂、染料、FITC或Dylight549标记的山羊抗鼠荧光二抗。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述试剂盒的操作说明书中还记载有：。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述试剂盒的使用步骤如下：(1)提取胃肠间质瘤患者术后肿瘤组织切片白片，备用；(2)使用Rad51与KU70蛋白免疫组化检测试剂分别对步骤(1)中制备得到的切片白片进行Rad51蛋白与KU70蛋白免疫组化染色，并对病理切片读片，按照免疫组化计算方法计算结果；(3)使用Rad51与KU70蛋白免疫组化检测试剂分别对正常组织切片白片进行Rad51蛋白与KU70蛋白免疫组化染色，并对病理切片读片，按照免疫组化计算方法计算结果；(4)分别计算肿瘤组织与正常组织Rad51蛋白与KU70蛋白得分比值；(5)将上述计算计算结果按照操作说明书记载内容确定待检测组织的耐药性。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述免疫组化方法包括如下步骤：(1)脱蜡和水化；(2)使用PBS洗涤；(3)抗原修复；(4)3％H2O2洗涤与PBS洗涤；(5)加入一抗孵育过夜；(6)PBS洗涤；(7)加入二抗；(8)PBS洗涤；(9)滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素孵育；(10)PBS洗涤；(11)显色剂显色；(12)冲洗，封片。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述药是指胃肠间质瘤的靶向药物，包括伊马替尼和舒尼替尼。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：如上所述试剂盒在预测胃肠间质瘤耐药性中的应用。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述药是指胃肠间质瘤的靶向药物，包括伊马替尼和舒尼替尼。所述舒尼替尼的化学名称是：(Z)-N-[2-(二乙胺基)乙基-5-[(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-3H-吲哚-3-亚基)甲基]-2，4-二甲基-3-氨甲酰-1H-吡咯苹果酸盐，分子式是：C22H27FN4O2·C4H6O5，其适应症如下：(1)甲磺酸伊马替尼治疗失败或不能耐受的胃肠间质瘤(GIST)；(2)不能手术的晚期肾细胞癌(RCC)；(3)不可切除的，转移性高分化进展期胰腺神经内分泌瘤(pNET)成年患者。其治疗胃肠间质瘤和晚期肾细胞癌的推荐剂量是50mg，每日一次，口服；服药4周，停药2周。对于胰腺神经内分泌瘤，其推荐剂量为37.5mg，口服，每日一次，连续服药，无停药期。其对于胃肠间质瘤和转移性肾细胞癌，根据患者个体的安全性和耐受性，以12.5mg为梯度单位逐步调整剂量。每日最高剂量不超过75mg，最低剂量为25mg。对于胰腺神经内分泌瘤，根据患者个体的安全性和耐受性，以12.5mg为梯度单位逐步调整剂量。在3期临床试验中使用的最大剂量为每日50mg。作为本专利技术的一个优选实施方案，所述伊马替尼的结构式如下：作为本专利技术的一个优选实施方案，所述伊马替尼的化学名称是：4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-N-[4-甲基-3-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]苯甲酰胺；其分子式是：C29H31N7O。本专利技术优点在于：1、本专利技术的试剂盒可用于预测胃肠道间质瘤耐药性，从而针对性地选择靶向药物，为胃肠道间质瘤患者大大节省了治疗时间，对胃肠道间质瘤患者的治疗提供了很大的帮助。2、本专利技术的试剂盒预测效率高，可很好的应用于肿瘤治疗中，具有很好的应用前景。具体实施方式下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。应理解，这些本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括操作说明书，所述操作说明书记载有：

【技术特征摘要】
1.一种预测胃肠间质瘤耐药性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括操作说明书，所述操作说明书记载有：所述得分计算方法为：染色强度*染色面积；所述试剂盒内还包括正常组织标本、Rad51蛋白免疫组化检测试剂和KU70蛋白免疫组化检测试剂，所述Rad51蛋白免疫组化检测试剂包括兔抗人Rad51多克隆抗体、Rad51蛋白提取试剂、染料、FITC或Dylight549标记的山羊抗兔荧光二抗；所述KU70蛋白免疫组化检测试剂包括鼠抗人KU70单克隆抗体、KU70蛋白提取试剂、染料、FITC或Dylight549标记的山羊抗鼠荧光二抗。2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的操作说明书中还记载有：。3.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用步骤如下：(1)提取胃肠间质瘤患者术后肿瘤组织切片白片，备用；(2)使...

【专利技术属性】
技术研发人员：王力，
申请(专利权)人：复旦大学附属金山医院，
类型：发明
国别省市：上海,31