一种γ突触核蛋白的胶体金检测装置，所述装置包括条状基材，在所述条状基材上依次设置样本垫、胶体金结合物垫、反应膜和滤纸；其中，所述胶体金结合物垫上包被胶体金标记的鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG2，所述反应膜上的检测区(T)喷点鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG1、质控区(C)喷点羊抗鼠免疫球蛋白IgG；并且所述胶体金检测装置包含酪蛋白钠作为稳定剂。本发明专利技术提供了所述装置的制备方法和用途。本发明专利技术提供的装置在检测过程无需任何其他实验设备，检测成本低，对膀胱癌、肾癌、前列腺癌、子宫内膜癌和乳腺癌的诊断具有重要的临床价值。
【技术实现步骤摘要】
γ突触核蛋白的胶体金检测装置及其制备方法和用途
本专利技术属于医学检测领域，具体地，本专利技术涉及用于检测γ突触核蛋白(SNCG)的胶体金检测装置，本专利技术还涉及所述装置的制备方法和及其在制备疾病检测装置中的用途。
技术介绍
近年来，恶性肿瘤已成为全球范围内严重危害人类健康及生命的重大疾病之一。人们谈癌色变，并普遍认为癌症为不治之症，这主要源于其治愈率、死亡率高并具有广泛的分布性。数据显示，2015年，我国新发癌症病例429.2万例，死亡281.4万例。我国癌症发病率接近世界水平，但死亡率高于世界水平。癌症死亡率居高不下，一个重要原因在于我国癌症发现较多处于中晚期。美国近些年来癌症的发病率有所下降，其5年生存率大约在60％至70％，而我国肿瘤患者5年生存率大约在30％左右。现有数据表明，2015年全国新发病例最多的是肺癌，其次是胃癌、食管癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌和膀胱癌等(WanqingChen等，CancerStatisticsinChina，2015.CACANCERJCLIN2016；66:115–132.)。癌症高发增加的不仅仅是患者的伤痛，还给家庭、社会带来沉重的经济负担。相关资料估计，每年全国因肿瘤造成的门诊和住院花费数百亿元，远高于其他慢性病的医疗费用，是卫生总费用上涨的重要因素之一。癌症的高致死率主要由于癌细胞具有转移和侵袭能力，约90％的癌症病人死于癌细胞的转移，然而早期的治疗干预则会提高治疗效果。在肿瘤确诊之前若病灶已经发生多处微小转移，即便有些癌症仍可能治愈，但希望大大降低。因此，早期诊断和治疗对于提高癌症病人的生存率具有至关重要的意义。发展中国家癌症患者的死亡率高于发达国家的一个很重要原因即是诊断不及时，未在早期及时发现癌症。当前一些较为常见的检测手段，如X线、超声、PET-CT、核磁共振成像等影像学方法在癌症诊断方面的作用是值得肯定的，但由于准确度等问题，它们在临床应用上仍存在着局限性，有时甚至会与病理诊断结果存在出入，对于一般家庭而言，多次使用核磁共振检测所需花费太大，这就导致了在癌症检测时间上的延误；一些有一定放射性的检测方法，如X线、CT、PET或其组合，也不适于频繁检测；而通过穿刺获取病人组织样本进行组织化学分析这一方法，耗时长、操作复杂且对病人损害较大。相比而言，肿瘤早期检测期望实现对正常人群及疑似患病人群初步诊断并允许频繁检测的目标，从这些角度来看，以上方法不适合用于广泛人群的癌症早期检测。发展成本低、易操作、便携式、低损伤、高准确性和快速的癌症早期检测方法为当前所急需的。随着科技日新月异，飞速发展，基因类分子诊断的研究也正蓬勃发展，但由于检测指标的成熟度及项目准入审批等原因，目前临床应用仍较少。肿瘤蛋白标记物是肿瘤细胞产生和释放的某种物质，常以抗原、酶、蛋白或肽类激素等代谢产物的形式存在于病人肿瘤细胞组织内或宿主体液、排除物中，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。肿瘤蛋白标记物在临床上主要用于对原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断肿瘤治疗效果的观察和评价以及肿瘤复发和预后的预测等。近年来，新的肿瘤标记物不断发现、检查手段不断完善和改进，使得其灵敏性和准确性不断提高，为肿瘤患者的早期诊断和早期治疗提供更确切充足的依据。在免疫试剂产品的实际检测应用中，抗原抗体反应是关键。γ突触核蛋白(γ-synuclein，γ-SYN)是通过比较cDNA文库的方法筛选出的一个在浸润性乳腺癌文库中高表达而在正常乳腺组织中无表达的基因，序列比对发现其与已知的生长因子和癌基因没有同源性，但与一类神经相关蛋白SYN有着很好的同源性，从而作为SYN家族第3个成员而被命名为γ-SYN。γ-SYN作为SYN家族的一员，与该家族的另两个成员α-SYN、β-SYN的基因定位于不同染色体区域，分别位于4q21.3-q22(α-SYN)、5q35(β-SYN)和10q23(γ-SYN)。γ-SYN与α-SYN、β-SYN有着55.9％和54.3％的氨基酸序列同源性，SYN家族蛋白是14000大小的细胞浆蛋白，在生理状态下主要特异性地表达在神经系统。γ-SYN被证实在肿瘤尤其是雌激素相关肿瘤中发挥着与肿瘤增生、浸润和转移相关的重要作用。γ-SYN作为一种与乳腺癌发生、转移相关的癌基因，其过表达并不是由于γ-SYN基因扩增引起的。通过序列分析也并未发现γ-SYN点突变的存在，预示γ-SYN的过表达是在mRNA转录调控水平上发生了改变，通过对γ-SYN启动子调控区进行分析，发现在γ-SYN的第1个外显子区存在一个CpG岛，而高表达的乳腺癌细胞系和组织中该CpG岛均有去甲基化现象，不同肿瘤中存在不同的去甲基化谱，这与γ-SYN表达的组织特异性有关。RNA印迹分析(Northernblot)发现γ-SYN在大脑黑质、丘脑中呈高度表达，而在正常的乳腺、肝、前列腺、肺和小肠等组织中均无表达，但在乳腺癌组织中，通过反转录聚合酶链反应和原位杂交的方法均检测到了γ-SYN的异常表达，随后在蛋白水平上利用印迹分析(Westernblot)和组织化学的方法均检测到了γ-SYN的表达，并发现其表达与乳腺癌分期相关。Liu等(LiuH等，Lossofepigeneticcontrolofsynuclein-gammageneasamolecularindicatorofmetastasisinawiderangeofhumancancers.CancerRes.2005Sep1；65(17):7635-7643)利用免疫组化的方法，发现γ-SYN(即SNCG，以下简称SNCG)在肝癌、胃癌、食管癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌和子宫内膜癌等肿瘤中均存在较高的表达，而与之对应的正常组织几乎没有表达，同时在I期肿瘤中SNCG的表达低于II、III期肿瘤，表明SNCG的表达与多种肿瘤的分期均有相关性。目前，在临床检测领域尚无SNCG的检测方法，在专利和科研文献领域，有使用ELISA技术平台检测SNCG的报道，但ELISA检测过程要繁琐和耗时，且无法实现床边检测(POCT)。因此，当前对更方便、快捷、经济、高效的SNCG检测方法存在需求。
技术实现思路
基于现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种SNCG胶体金检测装置，本专利技术还提供了该装置的制备方法及其在制备检测疾病的装置中的用途。本专利技术使用胶体金方法制备的SNCG胶体金检测装置，除了可以在医院完成常规检测外，还可以带至家中自行完成检测，相比ELISA具有方便、快捷、经济、高效的特点，更加适用于疾病，例如肿瘤的普筛。一方面，本专利技术提供了一种γ突触核蛋白的胶体金检测装置，所述装置包括条状基材，在所述条状基材上依次设置样本垫、胶体金结合物垫、反应膜和滤纸；其中，所述胶体金结合物垫上包被胶体金标记的鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG2，所述反应膜上的检测区(T)喷点鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG1、质控区(C)喷点羊抗鼠免疫球蛋白IgG；并且所述胶体金检测装置包括酪蛋白钠作为稳定剂。其中，所述αSNCG1由保藏号为CGMCCNO.2468的杂交瘤细胞株αSNCG1分泌；所述αSNCG2由保藏号为CGMCCNO.2469的杂交瘤细胞株αSNCG本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种γ突触核蛋白的胶体金检测装置，所述装置包括条状基材，在所述条状基材上依次设置样本垫、胶体金结合物垫、反应膜和滤纸；其中，所述胶体金结合物垫上包被胶体金标记的鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG2，所述反应膜上的检测区(T)喷点鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG1、质控区(C)喷点羊抗鼠免疫球蛋白IgG；并且所述胶体金检测装置包含酪蛋白钠作为稳定剂。
【技术特征摘要】
1.一种γ突触核蛋白的胶体金检测装置，所述装置包括条状基材，在所述条状基材上依次设置样本垫、胶体金结合物垫、反应膜和滤纸；其中，所述胶体金结合物垫上包被胶体金标记的鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG2，所述反应膜上的检测区(T)喷点鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG1、质控区(C)喷点羊抗鼠免疫球蛋白IgG；并且所述胶体金检测装置包含酪蛋白钠作为稳定剂。2.根据权利要求1所述的装置的制备方法，所述方法包括以下步骤：1)胶体金颗粒的制备：利用氯金酸与柠檬酸三钠在沸水中发生氧化还原反应制备胶体金颗粒；2)胶体金结合物的制备：采用物理吸附法，在pH7.5～8.5下，使胶体金颗粒与待标记的鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG2结合，并加入酪蛋白钠溶液作为稳定剂，从而形成胶体金标记的鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG2结合物，并离心纯化；优选地，所述胶体金颗粒与鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG2的质量比为13～26：1，优选比例为20:1；优选地，所述酪蛋白钠溶液中酪蛋白钠的质量分数为5％～15％，优选地为10％；3)胶体金结合物垫的制备：将步骤2)得到的胶体金结合物用胶体金结合物重悬液复溶至原体积，并按0.015～0.018ml/cm2的喷金量喷点在金标垫上，干燥；优选地，所述喷金量为0.0166ml/cm2；优选地，所述金标垫的规格为1cm*30cm/条；4)反应膜制备：分别将0.6～1.2mg/ml鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG1、0.8～1.2mg/ml羊抗鼠IgG多克隆抗体包被到硝酸纤维素膜的检测区(T)和质控区(C)，干燥即得；优选地，所述鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG1的浓度为1.0mg/ml；优选地，所述羊抗鼠IgG多克隆抗体的浓度为1.0mg/ml；5)将滤纸、步骤3)制备的金结合物垫、步骤4)制备的反应膜、吸水纸依次粘贴在基材上。3.根据权利要求2所述的方法，其中，在步骤1)中，所述氯金酸浓度为10％(g/ml)，柠檬酸三钠浓度为10％(g/ml)，煮沸时间为5分钟；优选地，在步骤1)中，氯金酸与柠檬酸三钠的体积之比为1：2。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，在步骤2)包括以下步骤：a.取100.0mL0.02g～0.04g的胶体金于三角瓶中；优选地，所述胶体金的重量为0.03g；b.加入3.5mL0.1M的碳酸钾溶液，混匀，静置10分钟；c.取鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG2，其中，所述胶体金与鼠抗γ突触核蛋白单克隆抗体αSNCG2的质量比为(13～26)：1，优选为20:1；在搅...
【专利技术属性】
技术研发人员：荆志强，周光朋，韩晓亮，王建铭，
申请(专利权)人：博尔诚北京科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。