一种胎盘间充质干细胞条件培养基的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种胎盘间充质干细胞条件培养基的制备方法，其包括如下工艺步骤：1)培养P1代细胞；2)条件培养基制备：将细胞传代培养至P3代时，加入含有10％无菌过滤胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基继续培养48h后收集细胞培养培上清液，继续收集P4～6代的细胞培养上清液，将收集的上清液用0.22μm滤器过滤后获得成品，控制总蛋白浓度为4μg/mL，4℃保存备用。本发明专利技术所制备的条件培养基含有许多生物活性物质，可促进细胞增殖和抑制凋亡，具有抗氧化和免疫调节作用，能显著提高衰老的人皮肤成纤维细胞的活力，具有延缓皮肤衰老、保持皮肤稳态的作用，在美容护肤产品的开发中具有强大的应用前景。

Preparation of conditioned medium for placental mesenchymal stem cells

The invention discloses a preparation method of conditioned culture medium for placental mesenchymal stem cells, which comprises the following technological steps: 1) culturing P1 cells; 2) preparing conditioned culture medium: culturing cells to P3 generations, adding DMEM medium containing 10% sterile filtered fetal bovine serum and 1% bi-antibody for 48 hours, collecting cell culture supernatant, and continuing collecting P4-6 generations of cell culture. The supernatant was filtered with a 0.22 um filter to obtain the final product. The total protein concentration was controlled to 4 ug/mL and stored at 4 C for reserve. The conditioned medium prepared by the invention contains many bioactive substances, can promote cell proliferation and inhibit apoptosis, has antioxidant and immunomodulatory effects, can significantly improve the vitality of aging human skin fibroblasts, has the functions of delaying skin aging and maintaining skin homeostasis, and has a strong application prospect in the development of beauty and skin care products.

【技术实现步骤摘要】
一种胎盘间充质干细胞条件培养基的制备方法
本专利技术涉及生物工程
，特别涉及一种间充质干细胞条件培养基。
技术介绍
衰老是机体生命活动发展的必经阶段，而皮肤衰老是机体衰老最外在的特征。研究表明，皮肤衰老是一个复杂的生理过程，是由多种机制综合作用的结果，可将其分为内源性老化和外源性老化。当机体随时间流逝逐渐步入衰老，细胞生长变得缓慢，活性下降，表现为皮肤弹性降低、松弛，出现细小皱纹；而生活环境中各种因素如空气污染、辐射、强紫外线照射等也会引起人体的皮肤损伤和老化。随着生活水平的提高，人们越来越注重面部的保养，如何让自己抵御岁月的侵蚀，让肌肤继续充满光泽和弹性，延缓皮肤衰老的速度，是社会一直热切关注的问题。对此，许多爱美人士选择了各种针对皮肤衰老的手段，如单纯填充胶原蛋白、手术拉皮等，这些方法虽然能暂时改善外表上的不足，但对于真正恢复皮肤活力，从根本上延缓衰老不能起到很好的作用。据研究报道，皮肤真皮中最重要的细胞成分是成纤维细胞，其功能活性与皮肤状态密切相关。因此，延缓或抑制成纤维细胞衰老是治疗皮肤老化的重点。间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是体内本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胎盘间充质干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤：1)分离培养：采用剪切分离与胶原酶消化法从人胎盘组织中分离胎盘间充质干细胞，在胎儿间充质培养基中进行培养，当发现细胞集落生长，贴壁细胞融合至70～80％时用胰蛋白酶消化，将所得细胞悬液进行传代，得P1代细胞；2)条件培养基制备：继续用胎儿间充质培养基培养步骤1)所得P1代细胞并进行传代，将细胞传代培养至P3代时，待细胞生长至70～80％，弃去胎儿间充质培养基，用PBS溶液清洗一次，加入含有10％无菌过滤胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基继续培养48h后收集细胞培养培上清液，继续收集P4～6代的细胞培养上清液，将收集的上清...

【技术特征摘要】
1.一种胎盘间充质干细胞条件培养基的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤：1)分离培养：采用剪切分离与胶原酶消化法从人胎盘组织中分离胎盘间充质干细胞，在胎儿间充质培养基中进行培养，当发现细胞集落生长，贴壁细胞融合至70～80％时用胰蛋白酶消化，将所得细胞悬液进行传代，得P1代细胞；2)条件培养基制备：继续用胎儿间充质培养基培养步骤1)所得P1代细胞并进行传代，将细胞传代培养至P3代时，待细胞生长至70～80％，弃去胎儿间充质培养基，用PBS溶液清洗一次，加入含有10％无菌过滤胎牛血清和1％双抗的DMEM培养基继续培养48h后收集细...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄丽贞，陈志胜，郑桂纯，赵姝灿，张晓芳，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44