The invention discloses a method for improving the parthenogenetic development potential of vitrified frozen mature oocyte. The oocyte is frozen in a freezing solution containing melatonin, then thawed in a sucrose solution containing melatonin, and then activated by parthenogenetic oocyte. Finally, the Parthenogenetic Activated embryo is cultured in vitro. The method has the advantages of simple process, short time consumption, and can effectively improve the parthenogenetic activation and development potential of mature oocyte after vitrification and freezing.
【技术实现步骤摘要】
一种提高玻璃化冷冻成熟卵母细胞孤雌发育潜力的方法
本专利技术涉及动物繁殖
，具体涉及一种提高玻璃化冷冻成熟卵母细胞孤雌发育潜力的方法。
技术介绍
卵母细胞超低温冷冻保存是一项非常重要的辅助生殖技术，在生物科学，农业和医学领域都非常有应用价值。小鼠、牛、人、兔卵母细胞，经玻璃化冷冻保存，体外受精后能继续发育，胚胎移植后均产生健康后代。然而，冻融卵母细胞体外受精后的囊胚发育率或后代出生率还不理想。小鼠生发泡(GerminalVesicle,GV)期卵母细胞进行玻璃化冷冻，解冻后体外受精(invitrofertilization,IVF)囊胚率为20-42.9％；而小鼠成熟卵母细胞玻璃化冷冻后其IVF囊胚率为33％，牛成熟卵母细胞冻融后体外受精的囊胚率13-25.5％，兔卵母细胞玻璃化冷冻保存后，体外受精的胚胎移植后获得了5.5％的后代出生率。由此可见，卵母细胞冻融后较低的发育潜力还难以满足商业化生产的需求。玻璃化冷冻引起的活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)含量上升以及发育过程中基因表达的变化仍然是其发育潜力低下的重要原因。褪黑素，主要在...
【技术保护点】
1.一种提高玻璃化冷冻成熟卵母细胞孤雌发育潜力的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)卵母细胞收集：采集7‑8周龄雌性小鼠输卵管，脱去颗粒细胞，洗涤后待用；2)卵母细胞玻璃化冷冻：卵母细胞在预处理液中处理30秒，然后转移至冷冻液中处理25秒，迅速将装载有卵母细胞的开放式拉长塑料细管(Open Pulled Straw,OPS)投入到液氮；3)卵母细胞解冻：OPS管从液氮中取出，立即浸入37.5℃恒温的蔗糖溶液中，然后将卵母细胞吹出至蔗糖溶液大液滴中，洗涤后转移至蔗糖溶液小液滴中，此过程共计5分钟。然后转移至预先在培养箱中孵育约8小时的M2中，置于培养箱中培养1小时；4)卵母细...
【技术特征摘要】
1.一种提高玻璃化冷冻成熟卵母细胞孤雌发育潜力的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)卵母细胞收集：采集7-8周龄雌性小鼠输卵管，脱去颗粒细胞，洗涤后待用；2)卵母细胞玻璃化冷冻：卵母细胞在预处理液中处理30秒，然后转移至冷冻液中处理25秒，迅速将装载有卵母细胞的开放式拉长塑料细管(OpenPulledStraw,OPS)投入到液氮；3)卵母细胞解冻：OPS管从液氮中取出，立即浸入37.5℃恒温的蔗糖溶液中，然后将卵母细胞吹出至蔗糖溶液大液滴中，洗涤后转移至蔗糖溶液小液滴中，此过程共计5分钟。然后转移至预先在培养箱中孵育约8小时的M2中，置于培养箱中培养1小时；4)卵母细胞孤雌激活：体外培养1小时后，成熟卵母细胞在孤雌激活A液中洗涤3次，后转入另一A液中，并在培养箱中培养2.5小时，然后将细胞转至孤雌激活B液中，洗涤3次后置入另一B液中，于培养箱中培养3.5小时；5)孤雌激活胚胎体外培养：将孤雌激活后的卵母细胞转入胚胎培养液中培养。2.根据权利要求1所述的一种提高玻璃化冷冻成熟卵母细胞孤雌发育潜力的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的预处理液为10％EG(ethyleneglycol)+10％DMSO(Dimethylsulfoxide)，其中含有褪黑素，其浓度为10-9mol/L；所述的冷...
【专利技术属性】
技术研发人员：周光斌，潘波，张月，李伟，杨昊轩，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51
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