基因递送的改进方法技术

本发明专利技术提供了用于对靶细胞进行基因递送或遗传修饰的改进方法，其中对靶细胞的基因递送或其它遗传修饰在内皮细胞的存在下进行，或在靶细胞与内皮细胞共培养后进行，或者，其中在基因递送后立即将靶细胞与内皮细胞共培养以便对在基因递送过程中可能被破坏的细胞进行拯救。在一些实施方式中，基因递送通过转染来进行。在一些实施方式中，基因递送通过转导来进行。在一些实施方式中，内皮细胞是器官特异性的内皮细胞。在一些实施方式中，内皮细胞为表达E4ORF1的内皮细胞(E4ORF1+EC)。在一些实施方式中，靶细胞是干细胞，例如造血干细胞。

An improved method of gene delivery

The present invention provides an improved method for gene delivery or genetic modification of target cells, in which gene delivery or other genetic modification of target cells is carried out in the presence of endothelial cells, or after co-culture of target cells and endothelial cells, or in which target cells and endothelial cells are co-cultured immediately after gene delivery in order to break down during gene delivery. Bad cells are saved. In some embodiments, gene delivery is performed by transfection. In some embodiments, gene delivery is performed by transduction. In some embodiments, endothelial cells are organ-specific endothelial cells. In some embodiments, endothelial cells are endothelial cells expressing E4ORF1 (E4ORF1+EC). In some embodiments, the target cells are stem cells, such as hematopoietic stem cells.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基因递送的改进方法相关申请的交叉引用本申请要求2016年4月15日提交的美国临时专利申请No.62/323,476，以及2016年10月1日提交的美国临时专利申请No.62/403,110的优先权，其内容在此以引用的方式整体并入本文。通过引用的方式并入仅用于那些允许通过引入的方式并入的行政辖区，本申请中引用的所有参考文献(包括但不限于出版物，专利申请，专利和其他参考文献)，其全文以引用的方式整体并入本文。此外，本文引用或提及的任何产品的任何制造商说明书或目录都通过引用并入本文。在美国专利No.8,465,732中提供的许多教导可以与本专利技术结合使用，或可适用于本专利技术。因此，美国专利No.8,465,732的全部内容通过引用明确并入本申请。通过引用并入本文中的文件，或其中的任何教导，可用于本专利技术的实践中。
技术介绍
腺病毒早期4(E4)区包含至少6个开放阅读框(ORF)。已报道整个E4区可以调节血管生成和促进内皮细胞存活(Zhangetal.(2004)，J.Biol.Chem.279(12)：11760-66)。在整个E4区内，E4ORF1序列负责内皮细胞中的这些生物学效应(美国本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将基因递送至靶细胞的方法，所述方法包括：(a)将靶细胞与内皮细胞共培养，以及(b)将靶细胞与一种或多种外源核酸分子接触，其中，所述将靶细胞与内皮细胞共培养的步骤为：i.在将靶细胞与一种或多种外源核酸分子接触之前开始，或ii.在将靶细胞与一种或多种外源核酸分子接触的同时开始，或iii.在将靶细胞与一种或多种外源核酸分子或分子接触之后开始，iv.或其任意组合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.15 US 62/323,476;2016.10.01 US 62/403,1101.一种将基因递送至靶细胞的方法，所述方法包括：(a)将靶细胞与内皮细胞共培养，以及(b)将靶细胞与一种或多种外源核酸分子接触，其中，所述将靶细胞与内皮细胞共培养的步骤为：i.在将靶细胞与一种或多种外源核酸分子接触之前开始，或ii.在将靶细胞与一种或多种外源核酸分子接触的同时开始，或iii.在将靶细胞与一种或多种外源核酸分子或分子接触之后开始，iv.或其任意组合。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞也与在基因编辑中有用的一种或多种分子接触。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞为E4ORF1+内皮细胞。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述共培养步骤在常氧条件下进行。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述共培养步骤在低氧条件下进行。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述共培养步骤在严重低氧条件下进行。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述共培养步骤在氧含量为0.1％至18％条件下进行。8.根据权利要求1所述的方法，还进一步包括将所述靶细胞与一种或多种外源核酸酶接触。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述核酸酶选自归巢核酸内切酶，锌指核酸酶，转录激活样效应因子核酸酶(TALEN)和CRISPR-Cas系统核酸酶。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞为分化的细胞。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞为干细胞或祖细胞。12.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞为造血干细胞(HSC)。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞为造血干/祖细胞(HSPC)。14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述HSC或HSPC为CD34+。15.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述HSC或HSPC来源于骨髓，外周血或脐带血。16.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶细胞为骨髓来源的CD34+HSC或HSPC。17.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞为血管内皮细胞。18.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞为初级血管内皮细胞。19.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞为哺乳动物内皮细胞。20.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞为人内皮细胞。21.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞为完全分化的内皮细胞。22.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞为器官特异性内皮细胞。23.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞是有丝分裂失活的。24.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞为脐静脉内皮细胞。25.根据权利要求1所述的方法，其中所述内皮细胞为人脐静脉内皮细胞。26.根据权利要求1所述的方法，其中，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗·威廉·芬尼根，克劳德·杰弗里·戴维斯，迈克尔·丹尼尔·金斯伯格，丹尼尔·约瑟夫·诺兰，
申请(专利权)人：安吉克莱茵生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US