用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条及包含其的免疫分析检测装置制造方法及图纸

本发明专利技术是关于一种用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条，包括：样品垫；检测膜，其连接于所述样品垫，所述检测膜上依次设有检测线及质控线；吸水垫，其连接于所述检测膜；还包括设置于所述检测膜上或与所述检测膜连接的标记载体。本发明专利技术还提供了上述用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条的免疫分析检测装置。本发明专利技术只需要微量的全血样品，即可在3‑15分钟内实现定量检测糖化血红蛋白的含量，大大提高了筛查的速度，具有灵敏度高、特异性好和结构简单的优点。仅使用一种糖化血红蛋白抗体和一种血红蛋白抗体减少成本，简化生产。

Immunochromatographic strips for detecting the content of glycosylated hemoglobin and the immunoassay device containing them

The invention relates to an immunochromatographic test strip for detecting the content of glycosylated hemoglobin, which comprises a sample pad, a detection membrane connected to the sample pad, a detection line and a quality control line in turn on the detection membrane, a water absorbent pad connected to the detection membrane, and a marker carrier arranged on the detection membrane or connected with the detection membrane. The invention also provides the immunoassay detection device for detecting the content of glycosylated hemoglobin on the immunochromatographic test strip. The method only needs a small amount of whole blood sample to realize quantitative detection of glycosylated hemoglobin in 3 to 15 minutes, greatly improves the speed of screening, and has the advantages of high sensitivity, good specificity and simple structure. Only one glycosylated hemoglobin antibody and one hemoglobin antibody are used to reduce costs and simplify production.

【技术实现步骤摘要】
用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条及包含其的免疫分析检测装置
本专利技术涉及一种用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条及包含其的免疫分析检测装置，属于免疫检测

技术介绍
糖尿病的发病率呈不断上升趋势，是严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。传统的糖尿病诊断和治疗监测采用空腹血糖、餐后血糖和口服葡萄糖耐量试验等，但是血糖参数仅代表抽血时的瞬间血糖水平，而糖化血红蛋白(glycosylatedhemoglubin,GHb)作为反映长期血糖水平的金标准，也是监测糖尿病治疗的重要指标。GHb是指结合了任何形式碳水化合物的血红蛋白(haemoglobin,Hb)。人类Hb主要是HbA(95％-97％)、HbA2(<3％)、HbF(<1％)。HbA中未结合糖的为HbAO(90％)、结合糖的为HbA1(5％-7％)即GHb。其中HbA1包括结合果糖-1，6-二磷酸葡萄糖的HbA1aU结合葡萄糖-6-磷酸的HbA1a2、结合未知碳水化合物的HbA1b和结合葡萄糖的HbA1c，HbA1c占GHb的70％-90％。HbAlc在组织中由葡萄糖的游离醛基与HbA的P链N末端缬氨酸的氨基进行不可逆的非酶促的反应，此过程称为糖基化，GHb的形成主要取决于血糖浓度及血糖与Hb的接触时间。GHb可以反映最近2-3个月的平均血糖水平。2002年美国糖尿病协会已明确规定应定期检测HbAlc，并将其作为监测糖尿病血糖控制的金标准。GHb的测定方法有几十种之多，目前常用的基本上可分为两大类：一类是基于GHb和Hb的电荷不同，如离子交换层析法、电泳法；另一类是基于Hb上糖化基团的结构特点，如：亲和层析法、免疫法和酶法等。多个研究表明不同的原理测定的结果存在差别，而糖尿病患者治疗目标要求测定值不受测定方法的影响，因此在实验室里应用不同GHb测定方法所产生的结果可比性非常重要。离子交换层析法主要有高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)和手工微柱法。此方法是基于血红蛋白0链N末端缬氨酸糖化后所带电荷不同而建立。但由于此方法所使用的仪器昂贵，难以在比较基层的医院和实验室普及；微柱法的手工操作步骤繁琐，层析时间和微柱的质量不易控制，易产生操作技术误差，重复性欠佳；而且干扰因素很多，尤其对pH值和温度的变化敏感，HbF及变异血红蛋白(HbS、HbC、HbE等)对结果干扰，干扰程度根据柱的分离能力而定，所以一定要仔细观察图谱。电泳法(以琼脂凝胶电泳为例)的Hb于酸性缓冲液条件下(pH6.0)在琼脂糖凝胶上的电泳迁移取决于Hb在凝胶上的吸附情况及其所带的电荷。该方法标本用量少，分辨率高，重复性好，有研究发现血糖值与HbAlc值有显著相关性，且结果不受温度及胎儿血红蛋白的影响。另外，因为它可测定的Hb线性范围较宽(13.0-39.0g/L)，可发现异常Hb。该方法的缺点是每次测定均需成批进行样品分析，速度比较慢，无法进行实时个体检测，自动化程度较差，所测结果与技术人员扫描和对电泳的波峰判断有关，受主观因素影响，并且费用昂贵，因此并不适合临床实验室常规使用。酶法全血经溶血处理后，用特异蛋白内切酶将Hb酶解消化成果糖氨基酸，再经果糖氨基酸氧化酶作用下产生过氧化氢(hydrogenperoxide,H2O2),H2O2的浓度与血液中GHb的含量成正比，H2O2在过氧化物酶的作用下与相应的色原耦联，从而根据颜色变化程度可得H2O2浓度，进而得知样品中GHb的含量；同时测定同一管消化液的总Hb浓度，计算GHb和Hb的浓度比值，即为GHb结果。此法提供了一个像临床生化反应一样快速均一的反应系统(如葡萄糖、谷氨酸氨基转移酶)，有很好的精密度，可同时检测GHb和Hb，且与常规HPLC法和免疫测定法有很好的相关性。离子捕获法应用抗原抗体反应原理，并联以荧光标志物，通过连接带负电的多阴离子复合物，吸附到带正电的的纤维表面，经过一系列彻底清洗等步骤后，测定荧光强度变化率，计算GHb浓度。其检测系统易于规范和重复，可减少操作技术误差，检测的敏感度和特异度高，批内、批间变异系数小。有文献报道此法影响因素少，准确度高，回收率达98.85％，交叉污染率<0.01％。该方法是近几年发展起来的新方法，采用自动分析仪，适用于批量标本的检测。亲和层析法的硼酸具有与整合在Hb分子上葡萄糖的顺位二醇基作可逆结合反应的性质。通常使用的是间-氨基苯硼酸琼脂糖，将血样品加到层析柱后，所有的GHb与硼酸结合留在柱中，非GHb直接流出层析柱；再加入高浓度也包含顺位二醇基的多羟基复合物(如山梨醇)，GHb与硼酸的结合被替换而被洗脱下来，分别测量两组分，并计算比值。亲和层析法对变异血红蛋白和病理血红蛋白的影响相对其他方法不敏感，但测定的是HbAl即GHb总量。另外，金标法和硼酸亲和层析法密切相关，操作均简便易行、快速准确、试剂稳定。免疫层析试条方面，目前免疫层析试条方面都是采用，标记物中既有荧光标记的HbA1c抗体、荧光标记的Hb抗体，硝酸纤维素膜上有两条检测线：HbA1c抗体和Hb抗体。检测原理：样品中的HbA1c、Hb分别于荧光标记HbA1c抗体、荧光标记Hb抗体结合，在层析作用下，反应复合物沿着硝酸纤维膜向前扩散，被固定在硝酸纤维膜检测线上包被的HbA1c抗体、Hb抗体结合；样品中的HbA1c抗原Hb抗原浓度与信号强度成正比，通过信号强弱计算得出HbA1c占Hb比值。上述的免疫层析试条技术一般都用两对抗体，糖化血红蛋白抗体和血红蛋白抗体各一对，分别标记包被，具有如下缺点：1.组分众多，有相互干扰的可能，影响结果；2.用两对抗体大大增加了成本；3.两对抗体先分别算出浓度，再确定比值，使得计算复杂。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的主要目的在于提供一种用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条，只用一个糖化血红蛋白抗体包被，一个血红蛋白抗体标记，直接计算两种物质比值，方法简便，成本低廉。为了达成上述的目的，本专利技术提供了一种免疫层析试纸条，包括：样品垫；检测膜，其连接于所述样品垫，所述检测膜上依次设有检测线及质控线；吸水垫，其连接于所述检测膜；还包括设置于所述检测膜上或与所述检测膜连接的标记载体。作为上述用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条的优选方案，其中作为上述用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条的优选方案，其中所述标记载体为标记物垫，所述标记物垫固设于样品垫和检测膜之间；所述标记物垫包被有标记抗体。作为上述用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条的优选方案，其中所述检测膜为硝酸纤维素膜，所述检测膜上依次包被有分别作为检测线及质控线的检测抗体和质控抗体，两者之间的划膜浓度比为(0.5-3)：(0.5-3)。作为上述用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条的优选方案，其中所述的免疫层析试纸条还包括底板，所述检测膜、样品垫、标记物垫和吸水垫均固定于所述底板上。作为上述用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条的优选方案，其中所述标记载体为标记线，所述检测膜上依次设有标记线、检测线及质控线。作为上述用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条的优选方案，其中所述检测膜为硝酸纤维素膜，所述检测膜上依次包被有分别作为标记线本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条，其特征在于，包括：样品垫；检测膜，其连接于所述样品垫，所述检测膜上依次设有检测线及质控线；吸水垫，其连接于所述检测膜；还包括设置于所述检测膜上或与所述检测膜连接的标记载体。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条，其特征在于，包括：样品垫；检测膜，其连接于所述样品垫，所述检测膜上依次设有检测线及质控线；吸水垫，其连接于所述检测膜；还包括设置于所述检测膜上或与所述检测膜连接的标记载体。2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述标记载体为标记物垫，所述标记物垫固设于样品垫和检测膜之间；所述标记物垫包被有标记抗体。3.根据权利要求2所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测膜为硝酸纤维素膜，所述检测膜上依次包被有分别作为检测线及质控线的检测抗体和质控抗体，两者之间的划膜浓度比为(0.5-3)：(0.5-3)。4.根据权利要求3所述的免疫层析试纸条，其特征在于，还包括底板，所述检测膜、样品垫、标记物垫和吸水垫均固定于所述底板上。5.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述标记载体为标记线，所述检测膜上依次设有标记线、检测线及质控线。6.根据权利要求5所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述检测膜为硝酸纤维素膜，所述检测膜上依次包被有分别作为标记线、检测线及质控线的标记物抗体、检测抗体和质控抗体，其中所述检测抗体和质控抗体之间的划膜浓度比为(0.5-3)：(0.5-3)；所述标记线的每人份标记物用量为1-10μg。7.根据权利要求6所述的免疫层析试纸条，其特征在于，还包括底板，所述检测膜、样品垫和吸水垫均固定于所述底板上。8.根据权利要求4或7所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述标记载体较所述检测线更靠近所述样品垫；所述质控线较所述检测线更靠近所述吸水垫。9.根据权利要求8所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述标记载体与检测线之间的距离为3-10mm，所述质控线与检测线之间的距离为3-6mm。10.根据权利要求4或7所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述标记抗体为Hb单克隆抗体；所述检测抗体为HbA1c抗体。11.根据权利要求10所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述质控抗体为羊抗鼠IgG、羊抗鸡IgY或亲和素或链霉亲合素。12.根据权利要求4或7所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述样品垫为玻璃纤维素膜或聚酯膜；所述吸水垫为吸水纸。13.一种根据权利要求1-12任一项所述的用于检测糖化血红蛋白含量的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)在检测膜上包被标记载体、检测线及质控线，将检测膜的两侧分别与样品垫和吸水垫粘接后并固定于底板，得到试纸条毛坯；2)将步骤1)得到的试纸条毛坯裁切成所需尺寸即得所述的免疫层析试纸条；或包括以下步骤：1)在检测膜上包被检...

【专利技术属性】
技术研发人员：张军，
申请(专利权)人：北京康思润业生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11