本发明专利技术涉及一种用于APTT检测试剂的稳定剂及APTT检测试剂，属于生物检测技术领域。本发明专利技术的稳定剂包括以下质量百分比的组分：55.3％～58.9％壳寡糖、17.2％～20.8％氨基葡萄糖、余量为辅助试剂，该稳定剂在包括鞣花酸和兔脑磷脂的检测试剂中的用量为5.0％～5.5％。本发明专利技术的稳定剂绿色无毒，生产过程更为安全、对APTT检测试剂的稳定效果好。
A Stabilizer for APTT Detection Reagent and APTT Detection Reagent
The invention relates to a stabilizer for an APTT detection reagent and an APTT detection reagent, belonging to the technical field of biological detection. The stabilizer of the invention comprises the following components of mass percentage: 55.3%-58.9% chitosan oligosaccharide, 17.2%-20.8% glucosamine and residual amount as auxiliary reagents. The amount of the stabilizer used in the test reagent including ellagic acid and rabbit brain phospholipid is 5.0%-5.5%. The stabilizer of the invention is green and non-toxic, the production process is safer, and the stability effect of the APTT detection reagent is good.
【技术实现步骤摘要】
一种用于APTT检测试剂的稳定剂及APTT检测试剂
本专利技术属于生物检测
，涉及一种用于APTT检测试剂的稳定剂及APTT检测试剂。
技术介绍
人体凝血途径分为内源性凝血途径和外源性凝血途径，活化部分凝血活酶时间(APTT)是内源性凝血系统的一个重要指标。APTT延长的原因常见于凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ减低、纤维蛋白原缺乏症、纤溶活力增强、抗凝物质存在(如血内肝素含量增加及口服抗凝剂)。APTT缩短的原因常见于高凝状态、血栓性疾病(如心肌梗塞、不稳定性心绞痛、脑血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合症和肾病综合症)。因此通过对APTT的检测可以了解血液中内源、外源性凝血系统中凝血因子的大致变化，如果部分内源性凝血因子缺乏，就会导致APTT延长；也可广泛用于疾病术前、出血性疾病的诊疗效果观察，用于抗凝血药物肝素用量的监测，是监控肝素治疗的重要指标。APTT试剂一般由激活剂、磷脂、二价金属离子盐、稳定剂、缓冲剂组成。常用的激活剂有硅藻土(商品名Celite)、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸(Ellagicacid)等。不同的部分凝血活酶、不同的激活剂和不同的激活时间对各种凝血因子缺陷、对肝素和对狼疮抗凝物质的敏感性相差很大，如白陶土对凝血因子最敏感、鞣花酸对狼疮抗凝物质敏感性最高。磷脂是含有磷酸的脂类，属于复合脂，作为血小板替代物，磷脂参与内源性凝血途径。然而磷脂易与鞣花酸反应产生沉淀，目前市场上很多试剂都存在沉淀，且磷脂富含不饱和脂肪酸，易被氧化从而产生一系列过氧化脂质，从而影响了其生理活性。目前的检测试剂常使用叠氮钠作为防腐抑菌剂，然而叠氮钠具有剧毒，且难溶解，配置时间长，导致操作人会长时间的接触而危害身体健康。APTT检测的原理是在待测血浆中加入到APTT检测试剂，在钙离子参与下，激活内源性凝血系统，使纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定待测血浆凝固所需的时间，即为待测血浆的活化部分凝血活酶时间。APTT测定过程受多种因素的影响，其中试剂的质量是最关键因素。目前国内APTT检测试剂普遍存在产品质量不稳定、试剂容易沉淀等问题，致使检测结果不稳定，不同的临床检验实验室之间测得的结果难以比较。因此目前临床实验室所使用的试剂绝大部分为进口产品，但进口产品价格昂贵。壳寡糖(又称低聚葡萄糖胺、低聚氨基葡萄糖等)，即聚合度为2～10的氨基葡萄糖聚合物，分子量≤3200Da，由壳聚糖经过特殊的生物酶技术降解产生。其分子中的氨基和羟基可进行氧化、酯化、醚化、酰化、烷基化、羧基化、接枝共聚以及交联等反应。壳寡糖具有优良的理化特性：(1)较好的水溶性、易于被人体吸收；(2)安全无毒；(3)抗氧化、抗肿瘤；(4)防腐抗茵；(5)调节血脂和血糖；(6)增强免疫；(7)调节人体pH值和活化肠道菌群。氨基葡萄糖为甲壳素的最终水解产物，分子式为C6H13NO5,是一种天然的氨基单糖，也是自然界含量最丰富的单糖之一，分子结构式如下所示。氨基葡萄糖是蛋白质或脂类糖基化反应中的重要前体，具有活泼的理化性质及较强的生物活性，如抗氧化性、提高关节软骨及滑液分子的表达、增强免疫力、抗肿瘤、消炎抑菌等。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术存在的上述问题，提出了一种用于APTT检测试剂的稳定剂，该稳定剂对APTT检测试剂的稳定效果好，且不包含毒性大的试剂如叠氮钠，生产过程更为安全。本专利技术的目的可通过下列技术方案来实现：一种用于APTT检测试剂的稳定剂，所述稳定剂包括以下质量百分比的组分：壳寡糖55.3％～58.9％、氨基葡萄糖17.2％～20.8％、余量为辅助试剂。本专利技术使用壳寡糖、氨基葡萄糖作为APTT检测试剂的稳定剂，能够有效提高APTT检测试剂的稳定性和生产安全性。壳寡糖分子中含有羟基、氨基，易进行化学反应，如O-酰化和N-酰化反应、酯化反应、醚化反应、烷基化反应、氧化反应、接枝共聚以及交联反应等，能够在APTT检测试剂中的有效组分之间起到桥梁作用，从而提高试剂的稳定性。壳寡糖的残糖基在C2上有氨基，在C3上有羟基，从构象上看，二者均为平伏键。这种结构特征，使得壳寡糖对凝血试剂中具有一定离子半径的金属离子具有螯合作用，从而可避免因APTT检测试剂制备原料中含有的少量重金属离子导致试剂不稳定的问题。APTT检测试剂中的主要成分中常含有鞣花酸和兔脑磷脂，二者易发生反应，产生沉淀，壳寡糖能够增加试剂的粘度及密度，改善该沉淀现象。氨基葡萄糖也具有良好的金属螯合能力，能起到类似EDTA钠盐或钾盐对金属离子的螯合作用。氨基葡萄糖与壳寡糖协同作用，可有效提高APTT检测试剂的稳定性。氨基葡萄糖还具有较好的还原能力和清楚自由基的能力，具有良好的抗氧化剂作用，能够有效保护APTT检测试剂。另外，壳寡糖、氨基葡萄糖都有一定的抑菌作用。壳寡糖、氨基葡萄糖以及辅助试剂的协同作用可使常规稳定剂中起到防腐抑菌作用的叠氮钠得以避免使用，叠氮钠具有剧毒，且难溶解，需要较长的配置处理时间，会导致操作人员与其长时间接触而损害身体，因此使得APTT测定试剂的生产和使用过程更安全。作为优选，所述辅助试剂包括占稳定剂质量百分比3.0％～4.5％的抗坏血酸。作为优选，所述辅助试剂包括占稳定剂质量百分比0.7％～1.2％的丁基化羟基甲苯。作为优选，所述辅助试剂包括占稳定剂质量百分比18.7％～19.7％的甘露醇。本专利技术中的抗坏血酸主要作用是稳定壳寡糖和氨基葡萄糖，防止其发生副反应。丁基化羟基甲苯的主要作用是提高溶液的密度和粘度，防止沉降。另外，本专利技术中的抗坏血酸、丁基化羟基甲苯本身有一定的抑菌抗氧化作用，甘露醇也具有防腐抑菌的作用，三者与壳寡糖、氨基葡萄糖配合使用，可使稳定剂具有优异的防腐抑菌作用，从而可以完全避免常规抑菌防腐剂叠氮钠的使用。作为优选，所述稳定剂包括以下质量百分比的组分：壳寡糖57.14％、氨基葡萄糖19.05％、抗坏血酸3.81％、丁基化羟基甲苯0.95％、甘露醇19.05％。本专利技术的另一目的在于提供一种使用如前所述稳定剂的APTT检测试剂，所述APTT检测试剂由试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，其中试剂Ⅰ包括以下质量百分比和质量浓度的组分：鞣花酸0.002％～0.005％、兔脑磷脂0.03％～0.07％、稳定剂5.0％～5.5％、三羟甲基氨基甲烷缓冲液1.1g/L～1.3g/L、氯化钠0.8％～1.0％、余量为水。作为优选，所述APTT检测试剂由试剂Ⅰ和试剂Ⅱ组成，其中试剂Ⅰ包括以下质量百分比和质量浓度的组分：鞣花酸0.003％、兔脑磷脂0.05％、稳定剂5.25％、三羟甲基氨基甲烷缓冲液1.21g/L、氯化钠0.90％、余量为水。作为优选，所述试剂Ⅱ包括以下质量浓度和质量百分比的组分：氯化钙4.3g/L～4.6g/L、叠氮钠0.03％～0.05％、余量为水。作为优选，所述试剂Ⅱ包括以下质量浓度和质量百分比的组分：氯化钙4.44g/L、叠氮钠0.05％、余量为水。作为优选，所述APTT检测试剂的使用方法为：在待测血浆中加入试剂Ⅰ，37℃孵育后加入试剂Ⅱ，记录凝固时间，即为活化部分凝血活酶时间。作为优选，所述待测血浆为枸橼酸钠抗凝血浆。作为优选，所述APTT检测试剂的使用方法为：取待测血浆50μL，加入50μL37℃预温的试剂Ⅰ，于37℃孵育5mi本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于APTT检测试剂的稳定剂，其特征在于，所述稳定剂包括以下质量百分比的组分：壳寡糖 55.3％～58.9％、氨基葡萄糖 17.2％～20.8％、余量为辅助试剂。
【技术特征摘要】
1.一种用于APTT检测试剂的稳定剂，其特征在于，所述稳定剂包括以下质量百分比的组分：壳寡糖55.3％～58.9％、氨基葡萄糖17.2％～20.8％、余量为辅助试剂。2.根据权利要求1所述的稳定剂，其特征在于，所述辅助试剂包括占稳定剂质量百分比3.0％～4.5％的抗坏血酸。3.根据权利要求1所述的稳定剂，其特征在于，所述辅助试剂包括占稳定剂质量百分比0.7％～1.2％的丁基化羟基甲苯。4.根据权利要求1所述的稳定剂，其特征在于，所述辅助试剂包括占稳定剂质量百分比18.7％～19.7％的甘露醇。5.一种使用如权利要求1～4任一权利要求所述稳定剂的APTT检测试剂，其特征在于，所述APTT检测试...
【专利技术属性】
技术研发人员：章思思，张闻，陈媛，周海滨，
申请(专利权)人：宁波瑞源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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