The invention relates to a Rhodococcus equi and its identification method and application in the field of microbial technology. The gene sequence of 16S rDNA of Rhodococcus equi is shown as SEQ ID NO.1. The strain SINOPEC05 is stored in CCTCC NO:M2016109, a typical culture preservation center in China. The abundance of the strain in the soil above the reservoir is positively correlated with the concentration of floating gaseous hydrocarbons in the reservoir. It can be used as an oil and gas microorganism to indicate the high value area of hydrocarbon leakage above the reservoir. At the same time, the strain is abundant in the soil above the oil and gas reservoir. Without amplification and culture, the 16S rDNA conservative sequence of Rhodococcus equi SINOPEC05 in the soil can be amplified by improved primers, which can accurately and efficiently judge the concentration of floating gaseous hydrocarbons in the oil and gas reservoir, and solve the shortcomings of the traditional physiological and biochemical detection cycle being long and the high requirement for the purity of sample culture.
【技术实现步骤摘要】
一种马红球菌及其鉴定方法和应用
本专利技术属于微生物
,具体涉及一种马红球菌及其鉴定方法和应用。
技术介绍
微生物勘探技术的核心是油气指示微生物的鉴定。通常情况下勘探过程中所研究的目标微生物在环境中的相对丰度很低,因此需在传统的特异培养条件下刺激油气藏环境与非油气藏环境中烃类氧化细菌的快速繁殖。上述方法虽然可以获得微生物的数量信息,但是该数量信息事实上成几何倍数地高于原位环境中的微生物数量,不可避免地掩盖了油气藏与非油气藏环境中微生物数量上的差异,同时也无法获得不可培养微生物的信息。另外,油气微生物的生长除受烃类影响,还会受到周围环境的影响,如土壤的湿度、pH值、盐度或其中的关键离子、营养物质和扰动等。若微生物发育的相对强弱是由环境因素所引起,则会造成油气富集或贫乏的假象。马红球菌(Rhodococcusequi)原称为马棒状杆菌,曾归于棒状杆菌属,但近年来国外学者对其细胞壁进行分析后,发现有些棒状杆菌不符合棒状杆菌属的特性,随后被列入红球菌属。红球菌属在自然条件下可以在污染的环境中存活,因此可作为生物去污的接种介体,并且利用红球菌降解油污物已获得了很好的效果。在春光油田油气藏上方土壤中发现马红球菌占较大的丰度,为了进一步确定该菌与油气微生物勘探之间的关系,对其典型菌株的获取及检测技术进行开发研究。目前,马红球菌的常见检测鉴定方法有两种:1.生理生化鉴定,通过分离出的纯菌,对微生物生理生化进行定性研究,该方法周期长且对培养物纯度提出较高的要求;2.基因提取后进行16SrDNA的测序,该方法仍需获取纯培养物进行全基因提取,再通过通用16SrDNA引物获 ...
【技术保护点】
1.一种马红球菌,其16S rDNA的基因序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种马红球菌,其16SrDNA的基因序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的马红球菌,其特征在于,所述马红球菌的菌株为SINOPEC05,在中国典型培养物保藏中心的保藏号为CCTCCNO:M2016109。3.根据权利要求1或2所述的马红球菌,其特征在于,所述马红球菌的生物学特征为:在固体培养基上的菌落形态为呈圆形、白色、扁平、光滑湿润、边缘模糊,在显微镜下的细胞呈多种形态、圆滑,革兰氏染色反应呈阳性。4.根据权利要求3所述的马红球菌,其特征在于,所述的固体培养基为甲醇固体培养基或丁醇固体培养基;所述固体培养基的pH值为7-8。5.根据权利要求1-4中任一项所述的马红球菌,其特征在于,所述马红球菌在油气藏上方土壤中的丰度与油气藏上浮气态烃浓度呈正相关。6.一种鉴定如权利要求1-5中任一项所述马红球菌的方法,其包括对待测菌株进行16SrDNA序列或16SrDNA的部分序列测序,并且所述待测菌株的16SrDNA序列或16SrDNA的部分序列与如SEQIDNO.1的序列的一致性在95%以上,优选所述待测菌株的16SrDNA序列或16SrDNA的部分序列与如SEQIDNO.1的序列的一致性在97%以上,更优选所述待测菌株的16SrDNA序列或16SrDNA的部分序列与如SEQIDNO.1的序列的一致性在99%以上,最优选所述待测菌株的16SrDNA序列或16SrDNA的部分序列与如SEQIDNO.1的序列的一致性在99.5%以上,则鉴定所述待测菌株为所述马红球菌。7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述方法还包括结合将待测菌株的生物学特性与权利要求1-5中任...
【专利技术属性】
技术研发人员:许科伟,顾磊,杨帆,汤玉平,荣发准,
申请(专利权)人:中国石油化工股份有限公司,中国石油化工股份有限公司石油勘探开发研究院,
类型:发明
国别省市:北京,11
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