一种中药组合物中十八种成分的分离方法技术

本发明专利技术提供一种中药组合物的化学成分的分离方法，在其总浸膏大孔吸附树脂柱的30%乙醇部位分离并鉴定了18个化合物，分别为连翘酯苷A(1)、连翘酯苷I(2)、连翘酯苷H(3)、Lugrandoside(4)、Isolugrandoside(5)、Ferruginoside A(6)、Lianqiaoxingan C(7)、Calceolarioside C(8)、连翘酯苷E(9)、Ferruginoside B(10)、D‑苦杏仁苷(11)、L‑苦杏仁苷(12)、Sambunigrin(13)、Cornoside(14)、4‑Hydroxy‑4‑methylenecarbomethoxy‑cyclohexa‑2,5‑dienone(15)、Liriodendrin(16)、甘草素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷(17)、3,4‑二羟基苯甲醛(18)。其中，化合物2‑8,10,13‑18为首次从本发明专利技术总浸膏中分离得到，化合物4‑6,10,15,16未见从复方单味药中分离的报道，并首次对化合物8在DMSO‑d6溶剂中的核磁数据进行归属。

Separation method of eighteen components in a traditional Chinese medicine composition

The invention provides a method for separating the chemical components of Chinese medicine compositions. Eighteen compounds are separated and identified at the 30% ethanol part of the macroporous resin column of the total extract, namely forsythiaside A (1), forsythiaside I (2), forsythiaside H (3), Lugrandoside (4), Isolugrandoside (5), Ferruginoside A (6), Lianqiaoxingan C (7), Calceolarioside C (8) and forsythiaside E (9). Ferruginoside B (10), Ferruginoside B (10), D amygdalin (11), L amygdalin (12), Sambunigrin (13), Cornoside (14), 4 Hydroxyxy 4 methylenecarbomethoxy cyclohexa 2,5 dienone (15), Lirioriodrin (16), glycyrrhizin 7 O O_beta D amygdalin (12), Sambunigrin (13), Cornoside (14), 4 Hydroxyxy HydroDihydroxybenzaldehyde (18). Among them, compound 2 8, 10, 13 18 was isolated from the total extract of the invention for the first time. Compounds 4 6, 10, 15, 16 were not reported to be separated from the compound mono-flavor drug, and the NMR data of compound 8 in DMSO D6 solvent were assigned for the first time.

【技术实现步骤摘要】
一种中药组合物中十八种成分的分离方法
本专利技术属于中药的质量分析控制领域，具体的涉及到一种中药组合物中多种成分的分离方法。
技术介绍
中药复方是中医用药的主要形式，在经过几千年的临床使用中，复方可以获得比单味药更强的治疗效果，这已经充分证明了复方构成的科学性。本专利技术药物组合物由连翘、金银花和麻黄等13味中药组成，具有清瘟解毒、宣肺泄热之功效，用于治疗流行性感冒。临床研究证实本专利技术药物组合物治疗流感、急性上呼吸道感染疗效确切、效果显著。为阐明复方的药理作用机制以及复方药物配伍规律的科学内含，对其物质基础进行系统的研究十分必要。基于此，对于本专利技术药物组合物的化学成分进行了深入研究，在其总浸膏大孔吸附树脂柱的30%乙醇部位分离并鉴定了18个化合物，分别为连翘酯苷A(1)、连翘酯苷I(2)、连翘酯苷H(3)、Lugrandoside(4)、Isolugrandoside(5)、FerruginosideA(6)、LianqiaoxinganC(7)、CalceolariosideC(8)、连翘酯苷E(9)、FerruginosideB(10)、D-苦杏仁苷(11)、L-苦杏仁苷(12)、Sambunigrin(13)、Cornoside(14)、4-Hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone(15)、Liriodendrin(16)、甘草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(17)、3,4-二羟基苯甲醛(18)。其中，化合物2-8,10,13-18为首次从本专利技术总浸膏中分离得到，化合物4-6,10,15,16未见从复方单味药中分离的报道，并首次对化合物8在DMSO-d6溶剂中的核磁数据进行归属。
技术实现思路
本专利技术提供一种中药组合物的18中化合物的分离方法。该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200-300、麻黄60-100、大黄40-60、鱼腥草200-300、金银花200-300、板蓝根200-300、广藿香60-100、绵马贯众200-300、红景天60-100、薄荷脑5-9、苦杏仁60-100、甘草60-100、石膏200-300本专利技术所述分离方法包括以下步骤：（1）该中药组合物总浸膏经AB-8型号大孔树脂分离，依次用水、10%乙醇、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收溶剂，得30%乙醇浸膏；（2）将步骤（1）得到的30%乙醇浸膏，加入反相硅胶ODS-AQ-HG（S-50μm）拌样，待拌样ODS自然晾干后，将拌样ODS加入到上样柱内，上中压制备液相进行分离（分离柱填料为ODS-AQ-HG（S-50μm）），依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，分别编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，分别编号为20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6，分别收集洗脱液，回收溶剂，得编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5洗脱干膏和20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6洗脱干膏；（3）将步骤（2）得到的编号为10%-1洗脱干膏，用30%甲醇溶解，溶解液过0.45μm微孔滤膜，采用高效液相色谱法进行初步分离，流动相为甲醇-水22:78，流速为1ml/min，检测波长210nm，分别收集保留时间为3-9min、9-11min、19-22min、22-26min、26-30min、37-41min、和44-48min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：3-9min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,5:95，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间25-27min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物14：Cornoside；9-11min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,12:88，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间32-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物10：FerruginosideB；19-22min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间31-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物9：连翘酯苷E；22-26min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间32-37min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物18：3,4-二羟基苯甲醛；26-30min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间38-42min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物11：D-苦杏仁苷和化合物12：L-苦杏仁苷的混合物；37-41min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间52-56min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物13：Sambunigrin；44-48min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间41-44min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物15：4-Hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone；（4）将步骤（2）得到的编号为20%-2洗脱干膏，用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：甲醇-水,22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，分别收集保留时间为14-17min、17-19min、22-24min、29-34min和35-40min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：14-17min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水,15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间38-40min和45-47min的色谱峰，收集的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种中药组合物中十八种成分的分离方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200‑300 、麻黄60‑100 、大黄40‑60 、鱼腥草200‑300、金银花200‑300 、板蓝根200‑300、广藿香60‑100、绵马贯众200‑300、红景天60‑100、薄荷脑5‑9、苦杏仁60‑100 、甘草60‑100 、石膏200‑300，其特征在于，所述分离方法包括以下步骤：（1）该中药组合物总浸膏经AB‑8型号大孔树脂分离，依次用水、10%乙醇、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收溶剂，得30%乙醇浸膏；（2）将步骤（1）得到的30%乙醇浸膏，加入反相硅胶ODS‑AQ‑HG，S‑50μm，拌样，待拌样ODS自然晾干后，将拌样ODS加入到上样柱内，上中压制备液相进行分离，分离柱填料为ODS‑AQ‑HG，S‑50μm，，依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，分别编号为10%‑1、10%‑2、10%‑3、10%‑4、10%‑5；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，分别编号为20%‑1、20%‑2、20%‑3、20%‑4、20%‑5和20%‑6，分别收集洗脱液，回收溶剂，得编号为10%‑1、10%‑2、10%‑3、10%‑4、10%‑5洗脱干膏和20%‑1、20%‑2、20%‑3、20%‑4、20%‑5和20%‑6洗脱干膏；（3）将步骤（2）得到的编号为10%‑1洗脱干膏，用30%甲醇溶解，溶解液过0.45μm微孔滤膜，采用高效液相色谱法进行初步分离，流动相为甲醇‑水 22:78，流速为1ml/min，检测波长210nm，分别收集保留时间为3‑9min、9‑11min、19‑22min、22‑26min、26‑30min、37‑41min、和44‑48min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：3‑9min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 5:95，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间25‑27min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物14：Cornoside；9‑11min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 12:88，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间32‑35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物10：Ferruginoside B；19‑22min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间31‑35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物9：连翘酯苷E；22‑26min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间32‑37min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物18：3,4‑二羟基苯甲醛；26‑30min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间38‑42min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物11：D‑苦杏仁苷 和化合物12：L‑苦杏仁苷的混合物；37‑41min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间52‑56min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物13：Sambunigrin；44‑48min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇‑水, 22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间41‑44min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物15：4‑Hydroxy‑4‑methylenecarbomethoxy‑cyclohexa‑2,5‑dienone；（4）将步骤（2）得到的编号为20%‑2洗脱干膏，用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：甲醇‑水, 22:78，流...

【技术特征摘要】
1.一种中药组合物中十八种成分的分离方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200-300、麻黄60-100、大黄40-60、鱼腥草200-300、金银花200-300、板蓝根200-300、广藿香60-100、绵马贯众200-300、红景天60-100、薄荷脑5-9、苦杏仁60-100、甘草60-100、石膏200-300，其特征在于，所述分离方法包括以下步骤：（1）该中药组合物总浸膏经AB-8型号大孔树脂分离，依次用水、10%乙醇、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收溶剂，得30%乙醇浸膏；（2）将步骤（1）得到的30%乙醇浸膏，加入反相硅胶ODS-AQ-HG，S-50μm，拌样，待拌样ODS自然晾干后，将拌样ODS加入到上样柱内，上中压制备液相进行分离，分离柱填料为ODS-AQ-HG，S-50μm，，依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，分别编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，分别编号为20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6，分别收集洗脱液，回收溶剂，得编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5洗脱干膏和20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6洗脱干膏；（3）将步骤（2）得到的编号为10%-1洗脱干膏，用30%甲醇溶解，溶解液过0.45μm微孔滤膜，采用高效液相色谱法进行初步分离，流动相为甲醇-水22:78，流速为1ml/min，检测波长210nm，分别收集保留时间为3-9min、9-11min、19-22min、22-26min、26-30min、37-41min、和44-48min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：3-9min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,5:95，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间25-27min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物14：Cornoside；9-11min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,12:88，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间32-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物10：FerruginosideB；19-22min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间31-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物9：连翘酯苷E；22-26min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间32-37min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物18：3,4-二羟基苯甲醛；26-30min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间38-42min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物11：D-苦杏仁苷和化合物12：L-苦杏仁苷的混合物；37-41min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间52-56min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物13：Sambunigrin；44-48min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间41-44min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物15：4-Hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone；（4）将步骤（2）得到的编号为20%-2洗脱干膏，用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：甲醇-水,22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，分别收集保留时间为14-17min、17-19min、22-24min、29-34min和35-40min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：14-17min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水,15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，在此条件下收集保留时间38-40min和45-47min的色谱峰，其中45-47min色谱峰减压回收溶剂后，得到化合物化合物7：LianqiaoxinganC；保留时间为38-40min色谱峰，减压回收溶剂后再经高效液相色谱法纯化，流动相：乙腈-水,13:87，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：YMC-PackR&DODS-A，250×20mm，S-10μm，收集此条件下52-56min色谱峰，减...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈硕，张创峰，毕丹，魏峰，孙云波，
申请(专利权)人：北京以岭药业有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11