山奈酚类化合物及其提取方法技术

本发明专利技术提供了一种山奈酚类化合物及其提取方法。所述山奈酚类化合物的提取方法:将南山茶茶饼浸提、浓缩、萃取、稀释得到样品液；将样品液湿法上样，进行梯度洗脱收集洗脱液，除去乙醇然后用C18ME色谱柱、以甲醇作为流动相进行DAC富集，接收流出液减压浓缩至无液体旋出，用甲醇和丙酮溶解，得粗组分液；将粗组分液湿法上样至聚酰胺树脂层析柱进行梯度洗脱，收集洗脱液浓缩冻干得粗提取物；将粗提取物用溶剂溶解后进样进行DAC制备，得到粗分离物；将粗分离物用溶剂溶解后进样进行DAC制备，得到预分离物；将预分离物用溶剂溶解后进样进行等度洗脱，得到目标化合物。本申请提供的方法，首次从自然界中分离出目标化合物，提取纯度高。

【技术实现步骤摘要】
山奈酚类化合物及其提取方法
本专利技术涉及化合物提取领域，具体而言，涉及一种山奈酚类化合物及其提取方法。
技术介绍
南山茶又名广宁红花油茶(CamelliasemiserrataChi.)，属于山茶科(Theaceae)山茶属(CamelliaL.)植物，多年生乔木或灌木。南山茶主要分布在我国的广西东南部以及广东西部。它是油茶的一种重要栽培物种。经研究比较发现，在各类油茶中，广宁红花油茶中的化学成分相对比较丰富。南山茶及其饼粕尤其富含具有多种生物活性的黄酮类和皂苷等化合物。目前，对油茶饼粕的研究主要集中在以总黄酮或皂苷为指标进行的各种提取工艺的优化，还有一些着重于对得到的粗提物或初步纯化物进行抗氧化以及抑菌等活性方面的研究。但是，对提取物中具体成分的研究不够。山奈酚及其衍生物是油茶中一类重要的化合物，具有抗癌、治疗糖尿病和骨质疏松以及保护损伤细胞等功能。分析南山茶中的有效活性物质，将其活性成分从复杂多样的成分中分离提取出来，得到纯度较高的产品，对于南山茶的深度开发具有重要的作用。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种山奈酚类化合物，所述山奈酚类化合物首次从自然界中被发现。本专利技术的第二目的在于提供一种所述山奈酚类化合物的提取方法，所述方法首次从南山茶中提取出目标化合物，而且快速有效、纯度很高。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种山奈酚类化合物，所述山奈酚类化合物的结构式为：该化合物首次被公开，首次在自然界中被发现，并被提取出来。一种所述山奈酚类化合物的提取方法，所述方法包括以下步骤:A.将南山茶茶饼用乙醇水溶液浸提，得到提取液；然后将所述提取液浓缩、用正丁醇萃取得到萃取液，再用水稀释得到样品液；B.将所述样品液湿法上样至大孔树脂层析柱，依次用体积分数为5％乙醇、15％乙醇、50％乙醇、95％乙醇水溶液进行梯度洗脱，经色谱检测，收集用所述15％乙醇进行洗脱的洗脱液，减压蒸馏除去乙醇，然后用第一C18ME色谱柱、以甲醇作为流动相进行DAC富集，接收流出液减压浓缩直至无液体旋出，用甲醇和丙酮溶解，得粗组分液；C.将所述粗组分液湿法上样至聚酰胺树脂层析柱，依次用蒸馏水、体积分数为20％乙醇、40％乙醇、90％乙醇水溶液进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有目标化合物的洗脱液，浓缩冻干得到粗提取物；D.使用第二C18ME色谱柱、用甲醇-甲酸水溶液作为流动相进行第一次DAC制备，将所述粗提取物用第一溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有所述目标化合物的流份段，浓缩冻干得到粗分离物；使用所述第二C18ME色谱柱、用体积分数为85％的乙腈水溶液作为流动相进行第二次DAC制备，将所述粗分离物用第二溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有所述目标化合物的流份段，浓缩冻干得到预分离物；E.使用第三C18ME色谱柱、用体积分数为85％的乙腈水溶液作为流动相，将所述预分离物用第三溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有所述目标化合物的流份段，浓缩冻干得到所述目标化合物。采用浸提-萃取-大孔树脂柱层析-第一C18ME色谱柱洗脱-聚酰胺树脂柱层析-第一次DAC(动态轴向压缩)制备-第二次DAC制备-第三C18ME色谱柱高效液相色谱制备的方法，有效将目标化合物从南山茶的复杂成分中分离出来。优选地，所述步骤A中，所述乙醇水溶液的体积分数为50-60％；所述浸提的方法为：料液比为1kg所述南山茶茶饼对应2-4L所述乙醇水溶液，在60-70℃加热回流浸提2-4次，过滤、合并得到所述提取液；所述萃取液加水稀释18-22倍得到所述样品液。乙醇水溶液可以很好的把南山茶中的成分浸提出来，但由于成分的性质不同，需要采用合适的温度和浸提时间；萃取剂的选择取决于目标化合物的性质；高浓度的提取液直接用大孔树脂进行柱层析时，分离效果比较差，因此需要稀释后使用。优选地，所述步骤B中，所述大孔树脂层析柱的制备方法为：先用乙醇浸泡D101大孔树脂，然后装柱，依次用乙醇、水冲洗至无乙醇味；所述第一C18ME色谱柱规格为：100A，50mm×250mm，10μm。对大孔树脂进行前处理，可以有效保证大孔树脂柱层析的效果。对进行DAC富集的色谱柱的选择，有利于富集的顺利进行。更加优选地，所述大孔树脂层析柱的柱体积BV1为10L，所述5％乙醇水溶液的用量为6倍BV1、所述15％乙醇水溶液的用量为8倍BV1、所述50％乙醇水溶液的用量为8倍BV1、所述95％乙醇水溶液的用量为4倍BV1。用合适的柱体积，配合恰当的洗脱梯度，可以获得最佳的分离效果。洗脱量的确定需要考虑的因素包括层析柱承载量、目标化合物极性、分离速度、是否分离彻底等。进一步优选地，所述甲醇和丙酮的体积比为1:1。用色谱柱进行洗脱分离的主要目的是为了除去大孔树脂层析柱洗脱液中的水，提高分离物的浓度；使用甲醇和丙酮进行溶解的目的是为了与下一步的聚酰胺树脂柱层析配合，保证步骤C的分离效果。优选地，所述步骤C中，所述聚酰胺树脂层析柱的柱体积BV2为1L；所述蒸馏水、所述体积分数为20％乙醇水溶液、所述40％乙醇水溶液的用量均为5倍BV2、所述90％乙醇水溶液的用量为2倍BV2。更为优选地，所述梯度洗脱过程中，每500mL为一个收集单位，并顺次编号，收集第2-3号洗脱液。在特定的柱体积基础上，选择合适的洗脱剂配比及使用量，可以保证成分的再次有效分离。限定收集单位和收集编号，是为了精准的获得含有目标化合物的洗脱液。优选地，所述步骤D中，所述第二C18ME色谱柱规格为：100A，50mm×250mm，10μm；所述第一溶剂为甲醇和二甲基亚砜；所述甲醇-甲酸水溶液中甲醇与甲酸水溶液的体积比为25:75，所述甲酸水溶液的体积分数为0.1％；所述第二溶剂为体积分数15％的乙腈水溶液。可选地，所述步骤E中，所述第三C18ME色谱柱规格为：100A，20×250mm，10μm；所述第三溶剂为体积分数15％的乙腈水溶液。选择合适的色谱柱、溶剂和洗脱剂配比，可以保证最佳的分离效果。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：(1)首次发现该化合物，并从南山茶中分离出了目标化合物；(2)本申请提供的提取方法简单、有效，适合于推广应用。(3)目标化合物提取纯度高。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为实施例1对第2-3号洗脱液进行第一次DAC制备的谱图；图2为实施例1进行第二次DAC制备的谱图；图3为实施例1制备得到的目标化合物的HPLC图；图4为实施例1制备得到的目标化合物的纯度测定图；图5为本申请制备得到的目标化合物的质谱图；图6为本申请制备得到的目标化合物的H谱图；图7为本申请制备得到的目标化合物的C谱图；图8为本申请制备得到的目标化合物的H-HCOSY谱图；图9为本申请制备得到的目标化合物的HSQC谱图；图10为本申请制备得到的目标化合物的HMBC谱图；图11为本申请制备得到的目标化合物的TOCSY谱图；图12为本申请制备得到的目标化合物的谱图HSQC-TOCSY。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山奈酚类化合物，其特征在于，所述山奈酚类化合物的结构式为：

【技术特征摘要】
1.一种山奈酚类化合物，其特征在于，所述山奈酚类化合物的结构式为：2.一种权利要求1所述的山奈酚类化合物的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤:A.将南山茶茶饼用乙醇水溶液浸提，得到提取液；然后将所述提取液浓缩、用正丁醇萃取得到萃取液，再用水稀释得到样品液；B.将所述样品液湿法上样至大孔树脂层析柱，依次用体积分数为5％、15％、50％、95％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，经色谱检测，收集用所述15％乙醇进行洗脱的洗脱液，减压蒸馏除去乙醇，然后用第一C18ME色谱柱、以甲醇作为流动相进行DAC富集，接收流出液减压浓缩直至无液体旋出，用甲醇和丙酮溶解，得粗组分液；C.将所述粗组分液湿法上样至聚酰胺树脂层析柱，依次用蒸馏水、体积分数为20％、40％、90％的乙醇水溶液进行梯度洗脱，经色谱检测，收集含有目标化合物的洗脱液，浓缩冻干得到粗提取物；D.使用第二C18ME色谱柱、用甲醇-甲酸水溶液作为流动相进行第一次DAC制备，将所述粗提取物用第一溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有所述目标化合物的流份段，浓缩冻干得到粗分离物；使用所述第二C18ME色谱柱、用体积分数为85％的乙腈水溶液作为流动相进行第二次DAC制备，将所述粗分离物用第二溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有所述目标化合物的流份段，浓缩冻干得到预分离物；E.使用第三C18ME色谱柱、用体积分数为85％的乙腈水溶液作为流动相，将所述预分离物用第三溶剂溶解后进样，进行等度洗脱，收集含有所述目标化合物的流份段，浓缩冻干得到所述目标化合物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤A中，所述乙醇水溶液的体积分数为50-60％；所述浸提的方法为：料液比为1kg所述南山茶茶饼对应2-4L所述乙醇水溶液，在...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹清明，胡丹丹，任超，劳晓岚，何拉丽，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43