MT1-MMP特异性双环肽-毒素缀合物制造技术

本发明专利技术涉及药物缀合物，其包含MT1‑MMP特异性双环肽，所述双环肽与一种或多种已经用于靶向癌症疗法的效应物和/或官能团缀合。

MT1-MMP Specific Bicyclic Peptide-Toxin Conjugate

The present invention relates to drug conjugates comprising MT1 MMP-specific bicyclic peptides that bind to one or more effectors and/or functional groups already used in targeted cancer therapy.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】MT1-MMP特异性双环肽-毒素缀合物
本专利技术涉及药物缀合物，其包含MT1-MMP特异性双环肽，所述双环肽与一种或多种已经用于靶向癌症疗法的效应物和/或官能团缀合。
技术介绍
环肽能够以高亲和力和靶特异性结合蛋白质靶标，因此是用于开发治疗剂的有吸引力的分子类别。事实上，几种环肽已经成功用于临床，例如抗菌肽万古霉素、免疫抑制剂药物环孢菌素或抗癌药物奥曲肽(Driggers等人(2008)，NatRevDrugDiscov7(7)，608-24)。良好的结合特性来自肽和靶标之间形成的相对大的相互作用表面以及降低的环结构的构象柔性。通常，大环化合物与数百平方埃的表面结合，例如环肽CXCR4拮抗剂CVX15(2；Wu等人(2007)，Science330，1066-71)，具有Arg-Gly-Asp基序与整合素αVb3结合的环肽(Xiong等人(2002)，Science296(5565)，151-5)或与尿激酶型纤溶酶原激活物结合的环肽抑制剂upain-1(Zhao等人(2007)，JStructBiol160(1)，1-10)。由于它们的环构型，肽大环化合物比线性肽柔性差，导致与靶标结合时较小的熵损失并导致更高的结合亲和力。与线性肽相比，降低的柔性还导致锁定靶标特异性构象、增加结合特异性。这种效应已经被基质金属蛋白酶8(MMP-8)的有效选择性抑制剂所证明，当其环被打开时，其失去了对其它MMP的选择性(Cherney等人(1998)，JMedChem41(11)，1749-51)。通过大环化实现的有利结合特性在具有多于一个肽环的多环肽中甚至更明显，例如在万古霉素、乳链菌肽和放线菌素中。不同研究小组先前已将具有半胱氨酸残基的多肽与合成的分子结构连接(Kemp和McNamara(1985)，J.Org.Chem；Timmerman等人(2005)，ChemBioChem)。Meloen及其同事使用三(溴甲基)苯和相关分子将多个肽环快速和定量环化到用于结构模拟蛋白质表面的合成支架上(Timmerman等人(2005)，ChemBioChem)。用于产生候选药物化合物的方法公开于WO2004/077062和WO2006/078161中，其中所述化合物通过将含有半胱氨酸的多肽与分子支架(例如三(溴甲基)苯)连接而产生。已经开发了基于噬菌体展示的组合方法来产生和筛选针对感兴趣靶标的双环肽的大文库(Heinis等人(2009)，NatChemBiol5(7)，502-7和WO2009/098450)。简而言之，在噬菌体上展示含有三个半胱氨酸残基和两个区域的六个随机氨基酸(Cys-(Xaa)6-Cys-(Xaa)6-Cys)的线性肽的组合文库，并通过将半胱氨酸侧链与小分子(三-(溴甲基)苯)共价连接进行环化。
技术实现思路
根据本专利技术的第一方面，提供了式(I)的药物缀合物：或其药学上可接受的盐，其中R1和R2均表示氢；R3和R4均表示C1-6烷基；n表示选自1至10的整数；m表示选自0至10的整数；毒素是指细胞毒性剂；双环表示MT1-MMP特异性肽配体，其包含多肽和分子支架，所述多肽包含由至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，所述分子支架与多肽的半胱氨酸残基形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环，其中所述肽配体包含式(II)的氨基酸序列：-Ci-X1-U/O2-X3-X4-G5-Cii-E6-D7-F8-Y9-X10-X11-Ciii-(SEQIDNO:1)(II)其中：Ci、Cii和Ciii分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基；X表示任何氨基酸残基；U表示选自N、C、Q、M、S和T的极性不带电荷的氨基酸残基；和O表示选自G、A、I、L、P和V的非极性脂族氨基酸残基。根据本专利技术的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含如本文所定义的药物缀合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合。根据本专利技术的另一方面，提供了如本文所定义的药物缀合物，其用于预防、抑制或治疗癌症，特别是实体瘤，如非小细胞肺癌的用途。附图说明图1：EBC-1异种移植小鼠中针对BT17BDC-27的平均肿瘤体积对时间的图。在第0天、第2天、第4天、第7天、第9天、第11天和第14天施用剂量。图2：用BT17BDC-27处理EBC-1异种移植小鼠期间的体重，其表明药物相关的毒理学和整体动物健康。图3：EBC-1异种移植小鼠中针对BT17BDC-28的平均肿瘤体积对时间的图。在第0天、第2天、第4天、第7天、第9天、第11天和第14天施用剂量。图4：用BT17BDC-28处理EBC-1异种移植小鼠期间的体重，其表明药物相关的毒理学和整体动物健康。具体实施方式除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义，如在肽化学、细胞培养和噬菌体展示、核酸化学和生物化学领域。对于分子生物学、遗传学和生物化学方法使用标准技术(参见Sambrook等人,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版,2001,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY；Ausubel等人,ShortProtocolsinMolecularBiology(1999)第4版,JohnWiley&Sons,Inc.)，其通过引用并入本文。药物缀合物根据本专利技术的第一方面，提供了式(I)的药物缀合物：或其药学上可接受的盐，其中R1和R2均表示氢；R3和R4均表示C1-6烷基；n表示选自1至10的整数；m表示选自0至10的整数；毒素是指细胞毒性剂；双环表示MT1-MMP特异性肽配体，其包含多肽和分子支架，所述多肽包含由至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，所述分子支架与多肽的半胱氨酸残基形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环，其中所述肽配体包含式(II)的氨基酸序列：-Ci-X1-U/O2-X3-X4-G5-Cii-E6-D7-F8-Y9-X10-X11-Ciii-(SEQIDNO:1)(II)其中：Ci、Cii和Ciii分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基；X表示任何氨基酸残基；U表示选自N、C、Q、M、S和T的极性不带电荷的氨基酸残基；和O表示选自G、A、I、L、P和V的非极性脂族氨基酸残基。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述细胞毒性剂选自：烷化剂，如顺铂和卡铂、以及奥沙利铂、氮芥、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺；抗代谢剂，包括嘌呤类似物硫唑嘌呤和巯基嘌呤或嘧啶类似物；植物生物碱和萜类化合物，包括长春花生物碱，如长春新碱、长春碱、长春瑞滨和长春地辛；鬼臼毒素及其衍生物依托泊苷和替尼泊苷；紫杉烷，包括紫杉醇，最初称为泰素(Taxol)；拓扑异构酶抑制剂，包括喜树碱：伊立替康和托泊替康，以及II型抑制剂，包括安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷和替尼泊苷。其它试剂可包括抗肿瘤抗生素，其包括免疫抑制剂放线菌素D(用于肾移植)、多柔比星、表柔比星、博来霉素、加利霉素等。在本专利技术的另一个具体实施方案中，所述细胞毒性剂选自美登木素生物碱(如DM1)或单甲基奥瑞他汀(如MMAE)。DM1是细胞毒性剂，其是美登素的含巯基衍生物并具有以下结构：单甲基奥瑞他本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种式(I)的药物缀合物：

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.05.04 GB 1607827.11.一种式(I)的药物缀合物：或其药学上可接受的盐，其中R1和R2均表示氢；R3和R4均表示C1-6烷基；n表示选自1至10的整数；m表示选自0至10的整数；毒素是指细胞毒性剂；双环表示MT1-MMP特异性肽配体，其包含多肽和分子支架，所述多肽包含由至少两个环序列隔开的至少三个半胱氨酸残基，所述分子支架与多肽的半胱氨酸残基形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环，其中所述肽配体包含式(II)的氨基酸序列：-Ci-X1-U/O2-X3-X4-G5-Cii-E6-D7-F8-Y9-X10-X11-Ciii-(SEQIDNO：1)(II)其中：Ci、Cii和Ciii分别表示第一、第二和第三半胱氨酸残基；X表示任何氨基酸残基；U表示选自N、C、Q、M、S和T的极性不带电荷的氨基酸残基；和O表示选自G、A、I、L、P和V的非极性脂族氨基酸残基。2.如权利要求1所定义的药物缀合物，其中R3和R4均为甲基。3.如权利要求1或权利要求2所定义的药物缀合物，其中n表示1。4.如权利要求1至3中任一项所定义的药物缀合物，其中m表示1。5.如权利要求1至4中任一项所定义的药物缀合物，其中X1选自以下氨基酸中的任一个：Y、M、F或V，如Y、M或F，特别是Y或M，更特别是Y。6.如权利要求1至5中任一项所定义的药物缀合物，其中U/O2选自U，如N，或O，如G。7.如权利要求1至6中任一项所定义的药物缀合物，其中X3选自U或Z，其中U表示选自N、C、Q、M、S和T的极性不带电荷的氨基酸残基，Z表示选自D或E的极性带负电荷的氨基酸残基，特别是3位的U选自Q或3位的Z选自E。8.如权利要求1至7中任一项所定义的药物缀合物，其中X4选自J，其中J表示选自F、W和Y的非极性芳香族氨基酸残基。9.如权利要求1至8中任一项所定义的药物缀合物，其中X10选自Z，其中Z表示选自D或E的极性、带负电荷的氨基酸残基，如D。10.如权利要求1至9中任一项所定义的药物缀合物，其中X11选自O，其中O表示选自G、A、I、L、P和V的非极性脂族氨基酸残基，如I。11.如权利要求1至10中任一项所定义的药物缀合物，其中式(II)的双环是式(IIa)的化合物：-Ci-Y/M/F/V-U/O-U/Z-J-G-Cii-E-D-F-Y-Z-O-Ciii-(SEQIDNO：6)(IIa)其中U、O、J和Z如上所定义；或者是式(IIb)的化合物：-Ci-Y/M/F/V-N/G-E/Q-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(SEQIDNO：7)(IIb)；或式(IIc)的化合物：-Ci-Y/M/F-N/G-E/Q-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(SEQIDNO：8)(IIc)；或式(IId)的化合物：-Ci-Y/M-N-E/Q-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(SEQIDNO：9)(IId)；或式(IIe)的化合物：-Ci-Y-N-E-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-07)(SEQIDNO：2)(IIe)。12.如权利要求1-11中任一项所定义的药物缀合物，其中式(II)的双环包含选自以下的序列：-Ci-Y-N-E-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-07)(SEQIDNO：2)；-Ci-M-N-Q-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-12)(SEQIDNO：10)；-Ci-F-G-E-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-02)(SEQIDNO：11)；-Ci-V-N-E-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-03)(SEQIDNO：12)；-Ci-F-N-E-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-04)(SEQIDNO：13)；-Ci-Y-N-E-Y-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-07-N057)(SEQIDNO：14)；和-Ci-Y-N-E-W-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-44-N002)(SEQIDNO：15)，如：-Ci-Y-N-E-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-07)(SEQIDNO：2)；和-Ci-M-N-Q-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-12)(SEQIDNO：10)，特别是：-Ci-Y-N-E-F-G-Cii-E-D-F-Y-D-I-Ciii-(17-69-07)(SEQIDNO：2)，最特别是：bAla-Sar10-A-(17-69-07)D-Ala11Nal4D-Ala5tBuGly11(17-...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·托伊费尔，S·帕万，L·巴尔达萨雷，
申请(专利权)人：拜斯科阿迪有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB