一种PEDV S-RBD线性B细胞表位及两株特异性识别单克隆抗体和应用制造技术

技术编号:20469115 阅读:222 留言:0更新日期:2019-03-02 13:39
本发明专利技术公开了一种PEDV S‑RBD线性B细胞表位及两株特异性识别单克隆抗体和应用,所述B细胞表位的氨基酸序列为:TIDLFGYP。本发明专利技术利用纯化后PEDV S‑RBD重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得单克隆抗体;利用IPMA鉴定其中两株单克隆抗体4D8F10和6F3E3可特异性识别PEDV;利用真核细胞HEK‑293T重组表达PEDV S‑RBD重组蛋白不同片段,通过Dot‑blot鉴定获得的两株单克隆抗体特异性识别PEDV S‑RBD C端区域,序列为TSLLASACTIDLFGYP;利用ELISA进一步鉴定PEDV S‑RBD C端区域合成多肽,鉴定获得的两株单克隆抗体特异性识别序列为TIDLFGYP的线性B细胞表位。本发明专利技术鉴定的PEDV S‑RBD线性B细胞表位丰富了PEDV S‑RBD免疫学功能,为后续研究S蛋白抗原漂移提供参考,可应用于抗病毒药物研发。

A PEDV S-RBD Linear B Cell Epitope and Two Specially Recognized Monoclonal Antibodies and Their Applications

The invention discloses a PEDV S RBD linear B cell epitope, two specific recognition monoclonal antibodies and their applications. The amino acid sequence of the B cell epitope is TIDLFGYP. The invention immunizes BALB/c mice with purified PEDV S RBD recombinant protein to obtain monoclonal antibodies; identifies two monoclonal antibodies 4D8F10 and 6F3E3 by IPMA; expresses different fragments of PEDV S RBD recombinant protein by HEK 293T recombinant eukaryotic cells, and specifically recognizes the C-terminal region of PEDV S RBD by two monoclonal antibodies identified by Dot blot. The sequence was TSLLASACTIDLFGYP, and the synthetic polypeptide in the C-terminal region of PEDV S RBD was further identified by ELISA. Two monoclonal antibody specific recognition sequences were identified as linear B-cell epitopes of TIDLFGYP. The PEDV S RBD linear B cell epitope identified by the invention enriches the immunological function of PEDV S RBD, provides a reference for the follow-up study of S protein antigen drift, and can be applied to the development of antiviral drugs.

【技术实现步骤摘要】
一种PEDVS-RBD线性B细胞表位及两株特异性识别单克隆抗体和应用
本专利技术涉及病毒学、分子生物学和免疫学领域,特别是涉及猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)纤突糖蛋白(spikeglycoprotein,S)受体结合区(receptor-bindingdomain,RBD)线性B细胞表位及两株特异性识别单克隆抗体和应用。
技术介绍
猪流行性腹泻(porcineepidemicdiarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDvirus,PEDV)引起的一种高度接触性猪肠道传染病,以发病猪呕吐、水样腹泻、脱水为主要特征。PED对各年龄阶段的猪都会造成影响,尤其对7日龄以内的哺乳仔猪具有高致死性,病死率高达100%。PED造成了我国养猪业巨大的经济损失,已成为制约我国养猪业健康发展的传染病之一。PEDV是一种具有囊膜的单股正链RNA病毒,属于套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)α-型冠状病毒属(Alphacoronavirus),具有冠状病毒特征性的囊膜“纤突”(spike)结构。其中,P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种PEDV S‑RBD线性B细胞表位,其特征在于,其氨基酸序列为:TIDLFGYP。

【技术特征摘要】
1.一种PEDVS-RBD线性B细胞表位,其特征在于,其氨基酸序列为:TIDLFGYP。2.特异性识别PEDVS-RBD线性B细胞表位的两株单克隆抗体4D8F10和6F3E3,其特征在于,特异性识别含有权利要求1所述PEDVS-RBD线性B细胞表位序列的多肽、蛋白及PEDV。3.一种权利要求1所述的PEDVS-RBD线性B细胞表位在制备PED及PEDV诊...

【专利技术属性】
技术研发人员:李睿张改平孙彦刚乔松林陈鑫鑫郭振华赵东李学伍
申请(专利权)人:河南省农业科学院
类型:发明
国别省市:河南,41

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