本发明专利技术公开了一种鸡传染性支气管炎病毒(IBV)特异性多肽抗原，所述IBV特异性多肽抗原具有氨基酸序列如SEQ ID NO：1~9中的任意一条或几条所示，或者具有经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列。本发明专利技术还公开了一种IBV特异性多肽抗原组合物。本发明专利技术还公开了一种IBV抗体及其制备方法。本发明专利技术还公开了一种ELISA检测试剂盒及其检测方法和应用。该抗原表位具有很好的抗体反应性，可以用来特异性检测抗IBV的抗体，具有应用价值。
【技术实现步骤摘要】
一种IBV特异性多肽抗原、抗体、ELISA检测试剂盒及其应用技术方案本专利技术属于生物技术检测
，具体涉及一种IBV特异性多肽抗原、IBV抗体、ELISA检测试剂盒及其应用。
技术介绍
鸡传染性支气管炎病毒(IBV)为γ冠状病毒，可引起肉用鸡严重的呼吸道和肾脏病变以及蛋鸡的产蛋下降，同时传播迅速，给养禽生产带来巨大的经济损失。由于冠状病毒特殊的转录机制，导致新的变异株和血清型不断产生，使该病的防制变得十分困难。目前用于检测IBV抗体的方法有IFA、ELISA、HI等方法，后两者适于大规模检测。然而由于所用抗原的差异，常常出现不同的检测结果，常用的商品化ELISA试剂盒是应用提纯的病毒经适当处理，用于抗原包被，也有学者采用基因融合表达蛋白作为包被抗原，但这些方法常因为抗原的纯度问题引起批间差异较大或非特异性。最重要的是IBV由于毒株的血清型不同，交叉反应的能力也不相同，有时因为某几个氨基酸的改变而改变了整个检测的结果，因此常出现试剂盒不能检测不同血清型抗体。ELISA检测技术的原理：ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体上进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，加入酶标底物后，底物被酶催化成有颜色的产物，产物的量与待检物的量直接相关，故可以用分光光度计(酶标仪)加以测定进行定量或定性的分析，由于酶的催化效率很高，间接放大了免疫反应的结果，使测定方法敏感度大大提高，该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。
技术实现思路
专利技术目的：基于上述存在的问题，本专利技术选取决定传染性支气管炎病毒血清型的S基因的S2片段，选取抗原性、亲水性较好的保守序列进行多肽抗原合成，以合成的多肽为抗原，通过大量不同毒株血清的交叉反应测定，确定了特异性多肽，建立了简单快捷的ELISA方法特异性检测IBV抗体的方法，效果好，成本低。本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种IBV特异性多肽抗原。本专利技术还要解决的技术问题是提供了一种IBV特异性多肽抗原组合物。本专利技术还要要解决的技术问题是提供了一种IBV抗体及其制备方法和检测方法。本专利技术还要要解决的技术问题是提供了所述的IBV特异性多肽抗原或所述的IBV特异性多肽抗原组合物在制备IBV检测试剂盒方面的应用。本专利技术最后要解决的技术问题是提供了一种ELISA检测试剂盒。技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种IBV特异性多肽抗原，所述IBV特异性多肽抗原具有氨基酸序列如SEQIDNO：1～9中的任意一条或几条所示，或者具有经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列。作为优选，所述IBV特异性多肽抗原具有氨基酸序列如SEQIDNO：6或SEQIDNO：7所示。本
技术实现思路
还包括一种IBV特异性多肽抗原组合物，所述IBV特异性多肽抗原组合物为具有氨基酸序列SEQIDNO：7的IBV特异性多肽抗原分别和任意一条具有氨基酸序列SEQIDNO：1～6的IBV特异性多肽抗原的组合，和/或具有氨基酸序列SEQIDNO：6的IBV特异性多肽抗原分别和任意一条具有氨基酸序列SEQIDNO：1～5的IBV特异性多肽抗原的组合。作为优选，所述IBV特异性多肽抗原组合物SEQIDNO：6+SEQIDNO：1组合所示为最佳组合。同时，本专利技术也可以用该多肽制备高效价的IBV特异性抗体。本
技术实现思路
还包括一种IBV抗体，所述抗体特异性的与所述的IBV特异性多肽抗原结合，和/或与所述的IBV特异性多肽抗原组合物结合。本
技术实现思路
还包括一种IBV抗体的制备方法，包括以下步骤：1)将上述优选多肽或多肽组合物与载体蛋白如牛血清白蛋白或血蓝蛋白偶联，再与佐剂混合；2)免疫小鼠、鸡或其他实验动物；3)经2-3次免疫后即可产生抗IBV特异性抗体。本专利技术的该IBV抗体可以与IBV发生特异性结合。本
技术实现思路
还包括一种IBV抗体的检测方法，包括以下步骤：1)将所述的多肽抗原或所述的IBV特异性多肽抗原组合物包被酶标板，包被后用兔血清封闭；2)待检血清稀释后与包被的多肽抗原相互作用；3)洗涤多次后，加入HRP标记的兔抗鸡二抗共同孵育；4)再次洗涤多次，加TMB显色液反应；5)最后用硫酸或0.1％SDS终止反应，以450nm或650nm波长下读取OD值，检测出个体中IBV抗体水平。本
技术实现思路
还包括所述的IBV特异性多肽抗原或所述的IBV特异性多肽抗原组合物在制备IBV检测试剂盒方面的应用。本专利技术上述的IBV抗体的检测方法即为一种IBV特异抗体的ELISA检测方法，并可应用于特异性检测IBV抗体的间接ELISA检测试剂盒制备。该试剂盒可以检测出目前商品试剂盒检测不出的IBV抗体。本专利技术所述的ELISA检测法是指酶联免疫分析，即利用了多肽抗原可以特异性结合待检血清中的IBV抗体，然后加入HRP标记的二抗检测，最后读取波长450nm或650nm的OD值，按照此方法便可检测出个体中IBV抗体水平，在临床上也可以用于免疫鸡群抗体水平的评估。本
技术实现思路
还包括一种ELISA检测试剂盒，所述试剂盒包括所述的IBV特异性多肽抗原或所述的IBV特异性多肽抗原组合物。其中，所述试剂盒包括以下组分：包被所述的IBV特异性多肽抗原或所述的IBV特异性多肽抗原组合物的酶标板、酶标抗体、底物溶液、终止液、洗涤液、阴性对照和阳性对照。其中，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记兔抗鸡IgG。其中，所述底物溶液为柠檬酸溶液和Na2HPO4·12H2O混匀，加入四甲基联苯胺得到的溶液。具体的，所述底物液配制：100mmol/L的柠檬酸溶液((21g柠檬酸溶于去离子水，定容至1L)24.3mL，200mmol/LNa2HPO4·12H2O(71.6gNa2HPO4·12H2O溶于去离子水，定容至1L)25.7mL混匀，加入50mg的四甲基联苯胺(TMB)，临用前加入50μL的30％H2O2。终止液1％SDS：分别取蒸馏水100.0mL和1.0gSDS粉混合即可。洗涤液：1000mL10mmo1/LpH7.4的PBS中加入0.5mLTween-20；阴性对照：SPF鸡血清；阳性对照：SPF鸡抗IBV特异性血清。有益效果：本专利技术所使用的多肽抗原为抗原性比较好的IBVS基因S2段多肽特异性的序列合成，经过氨基酸的替换、缺失、增加等方式获得。应用该氨基酸序列设计合成的多肽抗原可以应用于IBV的抗体检测，与其他方法比较，此方法具有快速安全可靠，可操作性高的优点。利用多肽抗原作为抗原检测样本中的特异性抗体，使得试剂盒的制备和样品的检测更加快速简便，在免疫鸡传染性支气管炎病毒疫苗的免疫鸡群中可以用作为评价疫苗水平的指标。应用本专利技术合成的多肽抗原免疫动物，可以产生相应的特异性单一抗体。本专利技术选取抗原性、亲水性较好的保守序列进行多肽抗原合成，以合成的多肽为抗原，通过大量不同毒株血清的交叉反应测定，确定了特异性多肽，建立了简单快捷的ELISA方法特异性检测IBV抗体的方法，效果好，成本低。具体实施方式下面结合具体的实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解在阅本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种IBV特异性多肽抗原，其特征在于，所述IBV特异性多肽抗原具有氨基酸序列如SEQ ID NO：1~9中的任意一条或几条所示，或者具有经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种IBV特异性多肽抗原，其特征在于，所述IBV特异性多肽抗原具有氨基酸序列如SEQIDNO：1~9中的任意一条或几条所示，或者具有经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的IBV特异性多肽抗原，其特征在于，所述IBV特异性多肽抗原具有氨基酸序列如SEQIDNO：6或SEQIDNO：7所示。3.一种IBV特异性多肽抗原组合物，其特征在于，所述IBV特异性多肽抗原组合物为具有氨基酸序列SEQIDNO：7的IBV特异性多肽抗原分别和任意一条具有氨基酸序列SEQIDNO：1~6的IBV特异性多肽抗原的组合，和/或具有氨基酸序列SEQIDNO：6的IBV特异性多肽抗原分别和任意一条具有氨基酸序列SEQIDNO：1~5的IBV特异性多肽抗原的组合。4.一种IBV抗体，其特征在于，所述IBV抗体特异性的与权利要求1或2所述的IBV特异性多肽抗原结合，和/或与权利要求3所述的IBV特异性多肽抗原组合物结合。5.一种IBV抗体的制备方法，其特征在于，将权利要求1或2所述的IBV特异性多肽抗原，和/或与权利要求3所述的IBV特异性多肽抗原组合物与佐剂混合，免疫小鼠、鸡或其他实验动物，经2-3次免疫后即可产生抗IBV特异性抗体。6.一种IBV抗体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将权利要求1或...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦爱建，武奇，钱琨，邵红霞，叶建强，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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