一种空白生物样品的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种空白生物样品的制备方法，具体地，本发明专利技术的工艺包含：(1)用酸性/碱性条件，使与蛋白质结合的维生素发生分离，使其释放出内源性的维生素；(2)用吸附材料将解离出的维生素吸附；(3)通过高速离心，将吸附材料与生物样品分离，得到不含有维生素的空白生物样品。本发明专利技术的制备工艺，能够有效地去除生物样品中内源性的维生素类化合物，且可以最大程度保留生物样品的特性，可以为临床定量检测维生素类化合物提供与待测生物样品类似的基质环境。

A Method for Preparing Blank Biological Samples

The invention relates to a preparation method of blank biological samples, in particular, the process of the invention includes: (1) separating vitamins bound to proteins under acidic/alkaline conditions to release endogenous vitamins; (2) adsorbing dissociated vitamins by adsorbing materials; (3) separating adsorbing materials from biological samples by high-speed centrifugation to obtain vitamin-free ones. Blank biological samples. The preparation process of the invention can effectively remove endogenous vitamin compounds in biological samples, and can maximize the retention of the characteristics of biological samples, and can provide a matrix environment similar to the biological samples to be measured for clinical quantitative detection of vitamin compounds.

【技术实现步骤摘要】
一种空白生物样品的制备方法
本专利技术涉及生物样品制备工艺领域，具体地涉及一种从生物样品中去除内源性维生素并保有原生物特性的空白生物样品的制备方法。本专利技术可以快速、高效地去除对待测物检测造成干扰的内源性待测物，且保有生物样品本身的基质环境，为定量分析过程中建立标准曲线提供一种不含待测物且生物特性与待测样本接近的空白生物样品。
技术介绍
维生素类化合物，包含脂溶性维生素如维生素A、D、E、K，以及水溶性如维生素B族何维生素C。尽管不同的维生素的化学结构和生物活性各不相同，但是它们均在人体的新陈代谢过程中发挥着至关重要的作用。如维生素A，又名视黄醇，是具有人体维持正常视觉功能不可缺少的营养素，维生素D，是人体骨骼发育生长以及钙磷代谢中的重要组成，维生素E则是人体有利的抗氧化剂，能够清除自由基，防止细胞膜发生脂质过氧化，改善血液循环。因此，在临床检测及科研领域，对各种维生素含量的监测以及其含量与疾病发生发展的关联一直备受关注。尤其是脂溶性维生素，由于其在人体内比水溶性维生素储存时间长、变异小，所以检测这类物质的水平更能反映一段时间内人体的营养状况以及对疾病的筛查。对于人体内源性维生素的检测，目前主要应用质谱法或色谱法时，必然面临建立标准曲线的问题。当待测样本为血清，检验要求建立标准曲线也应该使用血清或类似基质，而内源性含量很高的维生素本身对此类检测方法就会造成很大的干扰，不能在需要覆盖的检测浓度范围内得到准确的测定结果。因此，生物样品基质不能直接作为建立标准曲线的对象，必须对其进行预处理去除内源性物质维生素，而同时也要尽量减少处理过程对于生物样品基质的破坏，以保证处理得到的空白生物样品仍与待测生物样品有类似的生物特性。因此，对于应用色谱法、质谱法检测生物样品中的维生素类化合物，亟需开发一种能够快速有效地去除内源性维生素的制备方法，同时保有生物样品本身的生物理化特性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够快速有效地从生物样品中去除内源性维生素并保有原生物特性的空白生物样品制备方法，及其制备的空白生物样品和用制备的空白生物样品进行分析的仪器分析方法。本专利技术的第一方面，提供一种空白生物样品的制备方法，包括步骤：(1)提供一种水解试剂；(2)用所述的水解试剂对生物样品进行水解，从而使生物样品中的内源性维生素由结合态维生素转化为游离态，从而得到预处理生物样品；(3)在所述的预处理生物样品中加入维生素吸附剂对样品中的维生素进行结合，从而得到含有吸附剂-维生素复合物的固液混合物；(4)对固液混合物中的吸附剂-维生素复合物进行分离，得到所述的空白生物样品，其中，所述的空白生物样品中不含有内源性维生素。在另一优选例中，所述的空白生物样品可作为与待测样本生物样品类似的基质，用于临床定量检测维生素类待测物。在另一优选例中，所述的不含有内源性维生素指样品作为仪器检测的空白样品时，样品中维生素含量低于该仪器的检测限。在另一优选例中，所述的生物样品为血清或血浆。在另一优选例中，所述的生物样品为人血清或人血浆。在另一优选例中，所述的水解试剂选自下组：酸性物质、碱性物质。在另一优选例中，所述的酸性物质选自下组：甲酸、盐酸、乙酸，或其组合。在另一优选例中，所述的碱性物质选自下组：氨水、氢氧化钠，或其组合。在另一优选例中，所述的水解试剂占生物样品体积的0.1～5％；在另一优选例中，所述的水解试剂占生物样品体积的为0.5％～1％。在另一优选例中，所述的维生素吸附剂为具有纳米孔径物质；优选地，所述的维生素吸附剂选自下组：活性炭、硅胶、碳分子筛、沸石、树脂，或其组合。在另一优选例中，所述的吸附材料为活性炭。在另一优选例中，所述的维生素吸附剂占预处理生物样品的重量比例为1％～10％；优选地，所述的维生素吸附剂占预处理生物样品的重量比例为4％～8％。本专利技术的第二方面，提供一种空白生物样品，所述的空白生物样品通过第一方面所述的制备方法制备。在另一优选例中，所述的空白生物样品为血清或血浆。在另一优选例中，所述的空白生物样品为人血清或血浆。在另一优选例中，所述对空白生物样品中不含有维生素。本专利技术的第三方面，提供一种仪器分析方法，所述的方法包括步骤：用第一方面所述的方法制备得到空白生物样品；和用所述制备得到的空白生物样品进行分析。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1生物样品(以血清为例)中去除内源性维生素的制备工艺示意图。图2不经处理和传统吸附处理的血清中维生素信号峰面积。图3氨水水解、甲酸水解和盐酸水解的血清中维生素信号峰面积。具体实施方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，得到了一种高效快速地处理生物样品，得到不含维生素的空白生物样品的制备工艺。本专利技术的制备工艺采用酸性或碱性条件先将生物样品中的结合态维生素转化为游离态维生素，再进行常规的维生素去除步骤，得到不含维生素(特别是内源性维生素)的空白生物样品。基于上述发现，专利技术人完成了本专利技术。空白生物样品的制备现有的质谱或色谱分析方法中，标准曲线的建立常常受到空白样品中内源性维生素的干扰。由于生物样品中的维生素不仅以游离形式存在，还有部分以内源性形式存在，因此，现有的处理方法不能完全去除内源性维生素。对此，本专利技术提供了一种从生物样品中去除内源性待测物而保留原生物样品生物特性的工艺，可以用于生物样品中维生素类化合物的去除。此方法基本流程如下：a)生物样品中维生素类化合物的水解释放；b)利用吸附材料吸附游离出的维生素类化合物；c)将吸附材料与吸附后生物样品离心分离，获得空白生物样品。具体地，所述的方法包括步骤：(1)提供一种水解试剂；(2)用所述的水解试剂对生物样品进行水解，从而使生物样本中的内源性维生素由结合态维生素转化为游离态，从而得到预处理生物样品；(3)在所述的预处理生物样品中加入维生素吸附剂对样品中的维生素进行结合，从而得到含有吸附剂-维生素复合物的固液混合物；(4)对固液混合物中的吸附剂-维生素复合物进行分离，得到所述的空白生物样品，其中，所述的空白生物样品中不含有内源性维生素。本专利技术的方法可以用于常规仪器检测方法中常用的空白生物样品的制备，在优选的实施例中，所述的生物样品为血清或血浆，如人血清或人血浆。在本专利技术的方法中，所述的水解试剂应当选择能够使内源性维生素充分释放，同时不会破坏生物样品本身的生化特性的试剂，例如提供适宜的酸性或碱性条件的试剂。在本专利技术的优选实施方式中，所述的水解试剂可以是选自下组的酸性物质：甲酸、乙酸、盐酸，或其组合。或者选自下组的碱性物质：氨水、氢氧化钠，或其组合。所述的水解试剂用量应当控制在能够使内源性维生素充分释放，同时不会破坏生物样品本身的生化特性的范围内。在本专利技术的优选实施方式中，所述的水解试剂占生物样品体积的0.1～5％；更优选地为0.5％～1％。所述的维生素吸附剂没有特别的限制，可以是本领域常用的具有纳米孔径物质；优选地，所述的维生素吸附剂选自下组：活性炭、硅胶、碳分子筛、沸石、树脂，或其组合，更优选地为活性炭。所述的维生素吸附剂的用量应当控制在适于分离同时能够完全去除样品中维生素的范围内。该用量可以根据样品本身的性质进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种空白生物样品的制备方法，其特征在于，包括步骤：(1)提供一种水解试剂；(2)用所述的水解试剂对生物样品进行水解，从而使生物样品中的内源性维生素由结合态维生素转化为游离态，从而得到预处理生物样品；(3)在所述的预处理生物样品中加入维生素吸附剂对样品中的维生素进行结合，从而得到含有吸附剂‑维生素复合物的固液混合物；(4)对固液混合物中的吸附剂‑维生素复合物进行分离，得到所述的空白生物样品，其中，所述的空白生物样品中不含有内源性维生素。

【技术特征摘要】
1.一种空白生物样品的制备方法，其特征在于，包括步骤：(1)提供一种水解试剂；(2)用所述的水解试剂对生物样品进行水解，从而使生物样品中的内源性维生素由结合态维生素转化为游离态，从而得到预处理生物样品；(3)在所述的预处理生物样品中加入维生素吸附剂对样品中的维生素进行结合，从而得到含有吸附剂-维生素复合物的固液混合物；(4)对固液混合物中的吸附剂-维生素复合物进行分离，得到所述的空白生物样品，其中，所述的空白生物样品中不含有内源性维生素。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的生物样品为血清或血浆。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的水解试剂选自下组：酸性物质、碱性物质。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的酸性物质选自下组：甲酸、盐酸、乙酸，或其组合。5.如权利要求3所述的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡婷婷，官培龙，李仁杰，
申请(专利权)人：上海可力梅塔生物医药科技有限公司，上海爱可赛默医疗器械有限公司，广州可力质谱医疗器械有限公司，江苏可力色质医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31