The invention provides a method for treating HPV-positive cervical intraepithelial neoplasia by using CRISPR/Cas9. The invention adopts transvaginal plasmid transfection, uses CRISPR/Cas9 gene editing technology to destroy target gene E7, reduce viral load and restore the function of tumor suppressor RB, thereby reversing the malignant phenotype of host cells, greatly reducing the treatment cost and the psychological burden of patients. The role of CRISPR/Cas9 gene editing technology in K14 HPV16 cervical intraepithelial neoplasia mouse model makes it a promising treatment for cervical intraepithelial neoplasia. The gRNA can effectively treat HPV-positive cervical intraepithelial neoplasia, which has significant advantages over the existing gRNA technology and is suitable for clinical and patient use.
【技术实现步骤摘要】
一种使用CRISPR/Cas9治疗HPV阳性的宫颈上皮内瘤变的方法
本专利技术属于基因治疗领域，本专利技术公开了包括针对高危型人乳头瘤病毒E6E7癌基因序列构建靶向CRISPR/Cas9质粒的方法，并用CRISPR/Cas9靶向敲除高危型人乳头瘤病毒E7癌基因的方法。
技术介绍
宫颈癌是世界范围内女性发病率仅次于乳腺癌的恶性肿瘤(E.P.Armstrong等，ManagedCarePharmacy杂志，2010，16：217-230)。高危型人乳头瘤病毒(HR-HPVs)，尤其是HPV16和HPV18，被认为是宫颈癌发病的主要因素。癌蛋白E6和E7在HPV感染的早期表达，其中E6蛋白结合并讲解肿瘤抑制因子p53和促凋亡蛋白BAK从而增加宿主细胞对细胞凋亡的抵抗力并允许病毒DNA复制，E7蛋白则抑制肿瘤抑制性视网膜母细胞瘤1(RB1)释放E2F1转录因子，刺激细胞周期依赖性激酶2(CDK2)/细胞周期蛋白A以及CDK2细胞周期蛋白E复合物的形成，从而消除细胞周期停滞和刺激细胞增殖(WernessBA等，Science杂志，1990，248：76-79)。E6和E7在...
【技术保护点】
1.在CRISPR/Cas9系统中特异性敲除HPV16 E7基因的gRNA，所述gRNA在HPV16 E7基因基因上的靶序列符合5'‑N(20)‑NGG‑3'或者5'‑CCN‑N(20)‑3'的序列排列规则，在HPV16 E7基因上的靶序列是唯一的，其特征在于:所述gRNA依照5’‑3’的顺序序列如ACGCCTTACATACCGCTGTT所示。
【技术特征摘要】
1.在CRISPR/Cas9系统中特异性敲除HPV16E7基因的gRNA，所述gRNA在HPV16E7基因基因上的靶序列符合5'-N(20)-NGG-3'或者5'-CCN-N(20)-3'的序列排列规则，在HPV16E7基因上的靶序列是唯一的，其特征在于:所述gRNA依照5’-3’的顺序序列如ACGCCTTACATACCGCTGTT所示。2.根据权利要求1所述的gRNA在制备特异性敲除HPV16E7基因的试剂盒中的应用。3.含有权利要求1所述的gRNA的药物。4.权利要求1所述的gRNA或权利要求3所述的药物在制备特异性治疗宫颈癌的药物中的应用。5.根据权利要求3所述的药物或者权利要求4的所述的应用，其中...
【专利技术属性】
技术研发人员：马丁，黄晓园，胡争，于兰，高纯，吴屏，
申请(专利权)人：武汉凯德维斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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