The invention discloses a_transaminase mutant I215F with improved catalytic efficiency, which belongs to the field of genetic engineering and enzyme engineering technology. By site-directed mutagenesis of amino acids with higher factor B in the crystal structure of_aminotransferase, the mutant of_aminotransferase is obtained by mutating I at the position of_aminotransferase 215 into F. The catalytic efficiency of the mutant I215F of the present invention is 1.92 times higher than that of Kcat/Km. When the mutant (R) phenethylamine is catalyzed to produce acetophenone, the maximum conversion rate of the mutant acetophenone is 3.79 times higher than that of the natural enzyme. The mutant obtained by the invention is more suitable for industrial application than the natural_ transaminase.
【技术实现步骤摘要】
一种催化效率提高的ω-转氨酶突变体I215F
本专利技术涉及一种催化效率提高的ω-转氨酶突变体I215F，属于基因工程和酶工程
技术介绍
转氨酶(aminotransferase，transaminase)属于转移酶类，通常用于催化氨基由氨基供体化合物转移至氨基受体化合物。根据不同可变区的差异，将文献报道的不同来源的转氨酶的蛋白质序列进行比较和聚类分析，再根据亲水位点的叠加和迭代对比，我们可以将转氨酶分为4类。其中ω-转氨酶属于第二亚族，常用于制备手性胺及非天然氨基酸，如β-氨基酸。因为ω-转氨酶的大口袋结合区域比天冬氨酸转氨酶(AspATs)和芳香族转氨酶(AroATs)稍大，所以它可能能够结合比天然氨基酸体积较大的底物。转氨酶催化的反应主要有不对称合成和动力学拆分，利用酶催化合成手性胺类化合物，不仅可以大大的提高产率，还可以避免原料的浪费，以制得大量的光学纯度较高的手性胺类化合物。ω-转氨酶不仅可以应用于对外消旋体的拆分，还可以催化前体酮底物不对称合成手性胺类化合物。ω-转氨酶在制备手性胺类化合物范围较广，因此更具有应用价值。在蛋白质分子改造中，目前...
【技术保护点】
1.一种催化效率提高的ω‑转氨酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列包括：在SEQ ID NO:1的氨基酸序列的基础上将第215位置的异亮氨酸突变成苯丙氨酸而得到的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种催化效率提高的ω-转氨酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列包括：在SEQIDNO:1的氨基酸序列的基础上将第215位置的异亮氨酸突变成苯丙氨酸而得到的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的ω-转氨酶突变体，其特征在于，所述ω-转氨酶突变体的氨基酸序列为SEQIDNO:5所示的序列。3.根据权利要求1所述的ω-转氨酶突变体，其特征在于，所述ω-转氨酶突变体的核苷酸序列，包括SEQIDNO:2所示的序列。4.一种含有权利要求1所述突变体的氨基酸序列的重组质粒载体。5.根据权利要求4所述的重组质粒载体，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：廖祥儒，翟李欣，赖英杰，杨邵岚，蔡宇杰，管政兵，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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