The present invention discloses a method for isolation and primary culture of mature egg cells of crayfish, which includes the following steps: (1) dissecting and digesting female crayfish during sexual maturation; (2) cleaning the digested mixture with cell digestion solution three times, sieving and filtering to obtain egg cell suspension, and then dyeing it; (3) absorbing egg cell suspension and digesting it into it. 2 * L The method of oocyte isolation and primary culture established by the invention provides theoretical basis for the study of reproductive behavior and reproductive characteristics of crayfish in vitro, and also provides cell tools and support for the study of artificial insemination, Cytotoxicology and other related fields.
【技术实现步骤摘要】
一种克氏原螯虾成熟卵细胞的分离及其原代培养方法
本专利技术涉及细胞培养
，尤其是涉及一种克氏原螯虾成熟卵细胞的分离及其原代培养方法。
技术介绍
克氏原螯虾又称红色沼泽螯虾，俗称小龙虾，在动物分类学上隶属甲壳纲、十足目、螯虾科、原螯虾属，原产于美国北部、墨西哥南部地区，是一种世界性食用虾类，20世纪初传入日本，30年代由日本传入中国南京附近，虽然只有短短的几十年历史，但蔓延、发展的速度十分迅猛，现已遍布全国，归化为我国一个新型淡水经济虾类品种。克氏原螯虾在自然状态下，5-9月份为交配季节，其中6-8月份为高峰期。由于小龙虾独特的生理生化特点，不是交配后马上就产卵，而是在交配后7-30天的时间才产卵。交配时，雄虾用螯足钳住雌虾的螯足，用步足抱住雌虾，将雌虾翻转。雄虾的钙质交接器与雌虾储精囊连接，雄虾的精夹顺着交接器进入雌虾的储精囊。雌虾从第三对步足基部的生殖孔排卵并随卵排出较多蛋清状胶质，将卵包裹，卵经过储精囊时，胶质状物质促使储精囊内的精夹释放出精子，使卵受精。最后胶质状物质包裹着受精卵到达雌虾的腹部，受精卵黏附在雌虾的腹足上，腹足不停地摆动以保证受精卵孵化时...
【技术保护点】
1.一种克氏原螯虾成熟卵细胞的分离及其原代培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)对性成熟阶段克氏原螯虾雌虾进行解剖，初分离胶质包裹的卵细胞，转移到离心管中，用预先充氧的PBS溶液冲洗，加入复合酶静置消化，重复1～3次，每次0.5～1h，制得卵细胞混合液；(2)在无菌工作台中，取消化后的克氏原螯虾卵细胞混合液，用预先充氧的细胞消化液清洗3次，用超微显微镜观察卵细胞密度和活性，无菌吸管反复吹打，经过细胞筛过滤，滤液转移至离心管中800～1200r/min离心5～10min，获得卵细胞悬液；卵细胞悬液用台盼蓝进行染色，用血球计数板计数；(3)吸取卵细胞悬液，加入含10...
【技术特征摘要】
1.一种克氏原螯虾成熟卵细胞的分离及其原代培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)对性成熟阶段克氏原螯虾雌虾进行解剖，初分离胶质包裹的卵细胞，转移到离心管中，用预先充氧的PBS溶液冲洗，加入复合酶静置消化，重复1～3次，每次0.5～1h，制得卵细胞混合液；(2)在无菌工作台中，取消化后的克氏原螯虾卵细胞混合液，用预先充氧的细胞消化液清洗3次，用超微显微镜观察卵细胞密度和活性，无菌吸管反复吹打，经过细胞筛过滤，滤液转移至离心管中800～1200r/min离心5～10min，获得卵细胞悬液；卵细胞悬液用台盼蓝进行染色，用血球计数板计数；(3)吸取卵细胞悬液，加入含100UI/m...
【专利技术属性】
技术研发人员：水燕，刘国锋，徐增洪，许志强，李佳佳，唐建清，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，江苏省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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