决明子对照提取物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种决明子对照提取物及其制备方法和用途。决明子对照提取物的制备方法包括：(1)将将决明子醇提物上大孔吸附树脂柱，得到半制备组分Ⅰ；(2)将所述半制备组分Ⅰ与拌样用空白硅胶混合均匀，得到拌样硅胶；(3)将层析用空白硅胶干法装柱，再装入所述拌样硅胶，上样，从而得到硅胶色谱柱；然后以洗脱剂对所述硅胶色谱柱洗脱；(4)将洗脱后的硅胶色谱柱自柱头向底部平均分成18～24份，分别加甲醇洗脱得到甲醇洗脱液，检测，将含有指标成分的甲醇洗脱液合并，干燥，得到所述决明子对照提取物。本发明专利技术的制备方法工艺简单且适合大规模制备。

【技术实现步骤摘要】
决明子对照提取物及其制备方法和用途
本专利技术涉及一种决明子对照提取物及其制备方法和用途，尤其是一种决明子萘并吡喃酮类对照提取物及其制备方法和用途。
技术介绍
中药质量控制与评价是中药研究领域的重要科学问题。现行的重要质量控制方法主要以单一化学成分为对照品，从定性和定量角度对中药材及复方进行质量控制。这种以单一化学成分表征重要整体质量的模式无法真正控制和评价中药质量，与中医药整体观亦不相符。中药成分的复杂性决定了单一成分或指标成分为对照难以客观评价中药的质量，然而，多指标成分的质量评价模式又受到中药化学对照品分离难度大、单体稳定性差以及实验成本过高等因素的制约。中药对照提取物是指主要化学成分及含量明确、稳定性好、纯度较高的中药提取物，其各化学成分比例相对固定，指标性成分含量已标定，可以实现同时对多个组分进行定性和定量分析，其价格通常低于多个组分单体对照品的总和。因此，中药对照提取物的物质成本较低，检测程序简化，可大大节约检测成本。萘并吡喃酮类化合物是决明子药材中的一类含量较高，具有保肝、降血脂等作用的特征性成分；但决明子中萘并吡喃酮类化合物单体对照品十分稀缺，价格昂贵甚至没有供应。周德勇等公开了一种决明子萘并吡喃酮类对照提取物的制备方法(周德勇等，《决明子萘并吡喃酮类对照提取物研究及其在决明子药材质量控制中的应用》，中国中药杂志，第42卷第17期，第3385～3390页，2017年9月)，是将决明子药材醇提物上大孔吸附树脂柱，依次用水、20％乙醇溶液、50％乙醇溶液洗脱，收集50％洗脱液蒸干后得到半制备组分Ⅰ；将半制备组分Ⅰ与硅胶以3:5的比例均匀拌样，真空干燥，得到拌样硅胶；将该拌样硅胶与空白硅胶以1:13的比例干法上样，用氯仿-甲醇-水(6.5:3.5:0.6)洗脱，洗脱完成后将干柱分成20部位，合并第2-7、11-17的硅胶，加甲醇洗脱，蒸干，得到半制备组分Ⅱ；将半制备组分Ⅱ通过ODS柱纯化，以甲醇-乙腈(2:1)混合溶液为A相，以水为B相进行梯度洗脱，洗脱程序为30％A(2倍柱体积)、33％A(1倍柱体积)、36％A(1倍柱体积)、39％A(1倍柱体积)、42％A(1倍柱体积)、45％A(1倍柱体积)，然后通过薄层色谱法检识，合并含有指标成分的洗脱液，干燥，得到决明子萘并吡喃酮类对照提取物。该工艺十分复杂，成本高，单次制样量少，耗时费力，可操作性不强，更不适合大规模生产。另外，该制备工艺主要富集三种萘并吡喃酮类化合物。因此，需要建立一种工艺简单且适合于大生产的决明子萘并吡喃酮类对照提取物制备方法。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种决明子对照提取物的制备方法，该方法工艺简单且适合大规模制备。进一步地，本专利技术提供一种制备方法，其能够制得的决明子对照提取物含有四种萘并吡喃酮类指标成分。本专利技术的另一目的在于提供一种决明子对照提取物，其萘并吡喃酮类化合物含量高，且含有四种萘并吡喃酮类指标成分。本专利技术的再一目的在于提供所述决明子对照提取物用于控制决明子药材质量的用途。本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的。一方面，本专利技术提供一种决明子对照提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)将决明子醇提物上大孔吸附树脂柱，依次用第一洗脱剂和第二洗脱剂进行梯度洗脱，分别得到第一洗脱液和第二洗脱液，收集所述第二洗脱液，干燥，得到半制备组分Ⅰ；其中，所述第一洗脱剂为15～30vol％乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的2～4倍量；所述第二洗脱剂为40～60vol％乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的4～6倍量；(2)将所述半制备组分Ⅰ与拌样用空白硅胶按照重量比为1:1.8～2.4的比例混合均匀，得到拌样硅胶；(3)将层析用空白硅胶干法装柱并压实，使径高比为1:14.5～18，再装入所述拌样硅胶，压实，从而得到硅胶色谱柱；然后以第三洗脱剂对所述硅胶色谱柱洗脱；其中，所述硅胶色谱柱中，半制备组分Ⅰ与所述层析用空白硅胶的用量比为1g:24～28ml；所述第三洗脱剂为体积比为6.5:3.5:0.6的氯仿、甲醇和水的溶剂体系；且所述第三洗脱剂的体积为所述硅胶色谱柱体积的1.2～1.4倍量；(4)将洗脱后的硅胶色谱柱自柱头向底部平均分成18～24份，分别加甲醇洗脱得到甲醇洗脱液，分别检测所述甲醇洗脱液，将含有指标成分的甲醇洗脱液合并，干燥，得到所述决明子对照提取物；其中，所述指标成分为决明子苷B2、决明子苷C2、红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷及决明子苷C的至少一种。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤(1)中，所述决明子醇提物是指决明子药材采用25～40vol％的乙醇水溶液作为溶剂提取得到的提取物；所述大孔吸附树脂柱为AB-8大孔吸附树脂柱，且所述决明子醇提物与所述大孔吸附树脂柱中的大孔吸附树脂的用量比为1g:30～70ml。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤(2)中，所述半制备组分Ⅰ溶解在乙醇水溶液中与所述拌样用空白硅胶混合，且所述乙醇水溶液的浓度为40～60vol％。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤(3)中，所述半制备组分Ⅰ与层析用空白硅胶的用量比为1g:25～26ml。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤(3)中，将层析用空白硅胶干法装柱并压实，使径高比为1:15～15.5。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤(3)中，所述第三洗脱剂的体积为所述硅胶色谱柱体积的1.25～1.35倍量。根据本专利技术的制备方法，优选地，步骤(4)中，所述甲醇洗脱液的检测通过薄层色谱检识，薄层板为硅胶G板，展开剂为体积比为6.5:3.5:0.6的氯仿、甲醇和水的溶剂体系。另一方面，本专利技术提供一种决明子对照提取物，其包括决明子苷B2、决明子苷C2、红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷及决明子苷C，且所述决明子苷B2、决明子苷C2、红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷及决明子苷C的总含量高于60wt％。根据本专利技术的决明子对照提取物，优选地，其包括6～13wt％的决明子苷B2、6～13wt％的决明子苷C2、11～35wt％的红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷及18～35wt％的决明子苷C。再一方面，本专利技术还提供所述决明子对照提取物用于控制决明子药材质量的用途。本专利技术的决明子对照提取物的制备方法工艺相对简单，成本更低，稳定可靠，重现性好，适合大规模生产。本专利技术的决明子对照提取物包含决明子苷B2、决明子苷C2、红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷及决明子苷C这四种结构明确且含量确切的萘并吡喃酮类成分，纯度较高，含量稳定，可以实现同时对上述四个组分进行定性和定量分析，且成本远低于上述四个组分单体对照品的总和。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术的保护范围并不限于此。＜制备方法＞本专利技术的决明子对照提取物的制备方法包括如下步骤：(1)将决明子醇提物上大孔吸附树脂柱，依次用第一洗脱剂和第二洗脱剂进行梯度洗脱，分别得到第一洗脱液和第二洗脱液，收集所述第二洗脱液，干燥，得到半制备组分Ⅰ；其中，所述第一洗脱剂为15～30vol％乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的2～4倍量；所述第二洗脱剂为40～60vol％乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的4～6倍量；(2)将所述半制备组分Ⅰ与拌样用空白硅胶按照重量比为1:1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种决明子对照提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：(1)将决明子醇提物上大孔吸附树脂柱，依次用第一洗脱剂和第二洗脱剂进行梯度洗脱，分别得到第一洗脱液和第二洗脱液，收集所述第二洗脱液，干燥，得到半制备组分Ⅰ；其中，所述第一洗脱剂为15～30vol％乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的2～4倍量；所述第二洗脱剂为40～60vol％乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的4～6倍量；(2)将所述半制备组分Ⅰ与拌样用空白硅胶按照重量比为1:1.8～2.4的比例混合均匀，得到拌样硅胶；(3)将层析用空白硅胶干法装柱并压实，使径高比为1:14.5～18，再装入所述拌样硅胶，压实，从而得到硅胶色谱柱；然后以第三洗脱剂对所述硅胶色谱柱洗脱；其中，所述硅胶色谱柱中，半制备组分Ⅰ与所述层析用空白硅胶的用量比为1g:24～28ml；所述第三洗脱剂为体积比为6.5:3.5:0.6的氯仿、甲醇和水的溶剂体系；且所述第三洗脱剂的体积为所述硅胶色谱柱体积的1.2～1.4倍量；(4)将洗脱后的硅胶色谱柱自柱头向底部平均分成18～24份，分别加甲醇洗脱得到甲醇洗脱液，分别检测所述甲醇洗脱液，将含有指标成分的甲醇洗脱液合并，干燥，得到所述决明子对照提取物；其中，所述指标成分为决明子苷B2、决明子苷C2、红镰霉素‑6‑O‑β‑D‑龙胆二糖苷及决明子苷C的至少一种。...

【技术特征摘要】
1.一种决明子对照提取物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：(1)将决明子醇提物上大孔吸附树脂柱，依次用第一洗脱剂和第二洗脱剂进行梯度洗脱，分别得到第一洗脱液和第二洗脱液，收集所述第二洗脱液，干燥，得到半制备组分Ⅰ；其中，所述第一洗脱剂为15～30vol％乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的2～4倍量；所述第二洗脱剂为40～60vol％乙醇水溶液，用量为所述大孔吸附树脂柱体积的4～6倍量；(2)将所述半制备组分Ⅰ与拌样用空白硅胶按照重量比为1:1.8～2.4的比例混合均匀，得到拌样硅胶；(3)将层析用空白硅胶干法装柱并压实，使径高比为1:14.5～18，再装入所述拌样硅胶，压实，从而得到硅胶色谱柱；然后以第三洗脱剂对所述硅胶色谱柱洗脱；其中，所述硅胶色谱柱中，半制备组分Ⅰ与所述层析用空白硅胶的用量比为1g:24～28ml；所述第三洗脱剂为体积比为6.5:3.5:0.6的氯仿、甲醇和水的溶剂体系；且所述第三洗脱剂的体积为所述硅胶色谱柱体积的1.2～1.4倍量；(4)将洗脱后的硅胶色谱柱自柱头向底部平均分成18～24份，分别加甲醇洗脱得到甲醇洗脱液，分别检测所述甲醇洗脱液，将含有指标成分的甲醇洗脱液合并，干燥，得到所述决明子对照提取物；其中，所述指标成分为决明子苷B2、决明子苷C2、红镰霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷及决明子苷C的至少一种。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述决明子醇提物是指决明子药材采用25～40vol％的乙醇水溶液作为溶剂提取得到的提取物；所述大孔吸附树脂柱为AB-8大孔吸附树脂柱，且所述决明子...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘斌，姜艳艳，周德勇，王路，骆宜，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：北京,11