一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法，其为超临界流体色谱法，包括步骤：用有机溶剂溶解利福昔明原料或制剂；采用CO2、低级醇作为流动相梯度洗脱；采用检测器测定组分及其含量；其中，检测的组分包括利福昔明和杂质，杂质包括2‑氨基‑4‑甲基吡啶、利福霉素B、利福霉素SV、利福昔明Y、利福霉素S、利福霉素O、杂质A、杂质B、羟基利福昔明中的任一种或任几种。本发明专利技术提供的检测方法专属性良好，分析速度快，重复性良好，利福昔明及杂质件的分离度良好，可直接和质谱仪联用，便于杂质的结构推测，可为评价利福昔明及其制剂的质量和生产工艺提供高效的数据支持，并可在工艺评价及质量一致性评价研究中发挥重要作用。

【技术实现步骤摘要】
一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法
本专利技术属于分析化学领域，尤其涉及一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法。
技术介绍
利福昔明是一种半合成抗生素药，属于利福霉素类，缺乏系统活性，主要是具有极少的全身吸收的肠选择性抗生素。它针对革兰氏阳性病原体和革兰氏阴性病原体都具有广谱活性，并且由于其缺乏吸收，因而具有很好的耐受性。临床上主要用于治疗对利福昔明敏感的病原菌引起的肠道感染、作为手术前后的肠道预防用药及肝性脑病的辅助治疗。目前，已有文献报道的利福昔明有关物质及含量测定的方法主要为反相高效液相色谱法，采用辛基键合硅胶或十八烷基键合硅胶为填充剂，流动相均为甲醇-乙腈-磷酸盐/枸橼酸盐系统。利福昔明在现行中国药典及欧洲药典中均有收载，中国药典有关物质及含量测定的方法采用辛基键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇-乙腈-磷酸盐/枸橼酸盐系统，和文献基本一致；欧洲药典有关物质及含量测定的方法采用十八烷基键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇-乙腈-甲酸铵系统。在进行实验研究后，在满足现行中国药典系统适用性试验要求的前提下，1个样品的运行时间约为120分钟(见图1)。欧洲药典的运行时间约为35分钟(图2)。并且，现行方法均较难实现杂质A、利福昔明Y+羟基利福昔明的分离。如何缩短单次样品分析时间、提高色谱分离效能、提高质量控制效率是需要解决的一个问题。目前已有文献报道，采用超临界流体色谱法分析利福平中的有关物质，该方法4分钟内即可实现利福平和5个主要杂质的分离，和常规反相高效液相色谱相比，大大缩短了分析时间。超临界流体色谱法(SFC)是指以超临界流体为流动相的一种色谱类型。在分析化学领域，其可作为气相色谱和高效液相色谱的有力补充。对于少数药物的分离和定量，目前传统的气相色谱法或者高效液相色谱法还存在较多困难，如分离效能偏低、灵敏度不高、有机试剂消耗量大等，而采用SFC方法可有效提高分离效能和灵敏度，减小有机试剂消耗量且可大大缩短分离时间；同时SFC方法所用改性剂为CO2，更为绿色环保。在上述分析利福平中的有关物质方法中，采用甲醇(含0.1％甲酸铵和2％水)-二氧化碳为流动相，虽然可以快速实现利福平有关物质的分析，但其存在以下问题：多次进样后，存在系统压力逐渐升高直至超过仪器耐受的最高压力的情况，不适合大量样品的分析。这可能是甲酸铵在有机相中溶解度较低，在系统内逐渐析出所致。综合以上可知，现有利福昔明原料及其制剂方法分析方法具有如下缺点：1)分析时间长，特别是中国药典收录方法：运行1个样品的分析时间约为120分钟，不利于生产企业内控检测；2)杂质A、利福昔明Y+羟基利福昔明不能分离；3)流动相需要大量的甲醇、乙腈，分析成本较高且对环境不友好；4)流动相特别是中国药典采用的流动相含有高浓度缓冲盐，不能和质谱仪直接串联，不利于直接推测杂质的可能结构。因此，建立一种通用、快速、高效、分离效能好的分析方法对于考察、评价及筛选利福昔明原料质量进而提高其后续制剂的质量非常必要。
技术实现思路
为了克服现有技术的问题，本专利技术在分析现有分析方法的基础上，结合目前市场上利福昔明及其制剂的生产工艺，以二氧化碳和低级醇为流动相，开发了一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法，其采用超临界流体色谱法实现快速检测利福昔明制剂中有关物质及其含量。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法，该检测方法为超临界流体色谱法，其包括如下步骤：步骤1)采用有机溶剂溶解所述利福昔明原料或制剂制备样品；步骤2)采用CO2、低级醇作为流动相，在色谱柱中对所述样品进行梯度洗脱；步骤3)采用检测器对所述样品的组分及其含量进行测定；其中，所述样品的组分包括利福昔明和杂质，所示杂质包括2-氨基-4-甲基吡啶、利福霉素B、利福霉素SV、利福昔明Y、利福霉素S、利福霉素O、杂质A、杂质B、羟基利福昔明中的任一种或任几种。上述利福昔明和杂质的结构如下表所示：表1利福昔明及各已知杂质的结构和来源为了进一步优化上述利福昔明原料及其制剂组分的检测方法，本专利技术采取的技术措施还包括：进一步地，所述利福昔明制剂包括利福昔明的混悬剂、胶囊、注入剂、片剂，也可为本领域常用的任一合适的制剂形式。进一步地，所述有机溶剂包括乙醇、甲醇、异丙醇中的至少一种，也可为其他任一合适的有机溶剂；所述低级醇包括甲醇、乙醇、异丙醇中的至少一种；其中，原料或制剂采用有机溶剂溶解后所获得的样品中利福昔明的浓度为5～10mg·mL-1。进一步地，所述低级醇为乙醇或乙醇和异丙醇的混合物；其中，异丙醇的混合比例为0～50v％。优选地，所述低级醇为乙醇和异丙醇的混合物，其中异丙醇的混合比例为10v％，上述异丙醇的比例可根据实际样品中的利福霉素B的洗脱时间做适当调整。进一步地，所述低级醇的pH值为3.1～10.2，其采用的pH调节剂包括甲酸、冰醋酸、三氟乙酸、氨溶液。优选地，所述低级醇的pH值为5.0～7.5。进一步地，所述色谱柱的填料活性基团为二醇基，色谱柱柱温为35～60℃，背压为1500～2500psi。优选地，色谱柱柱温为35℃，背压为2000psi。本专利技术表1中各组分结构的主要差异为极性取代基差异如羟甲基、羧基、酚羟基等；同时快速实现分离难度较高。本专利技术在分析上述组分结构的基础上，选择二醇基作为固定相，基于不同极性取代基和二醇基基团之间作用力大小的差异实现分离，选择性更好。进一步地，所述色谱柱的进样体积为1～4μL，流速为0.8～1.5mL·min-1，检测波长为220～260nm。优选地，所述色谱柱的进样体积为2μL，流速为1.2mL·min-1，检测波长为240nm±2nm。进一步地，所述流动相为：流动相A为二氧化碳，流动相B为乙醇-异丙醇；其中，所述乙醇-异丙醇的比例为90：10(v/v)。进一步地，梯度洗脱条件为：0-1.8min，B10％-18％，1.8-4min，B18％-35％，4-6min，B35％-50％，6-7min，B50％，维持1min，7.1min后到B10％。进一步地，所述检测器为UPCC合相色谱仪，其配备有紫外检测器、二元梯度泵、自动进样器。进一步地，使用的色谱柱为TorusDIOL(3.0mm×100mm，1.7μm)。也可采用其他合适的色谱柱，流速可调整为与选择色谱柱尺寸相适应的流速。进样体积可调整为与色谱柱载样量或检测器响应相适应的进样量。进一步地，所述利福昔明的检测限为1μg·mL-1。与现有技术相比，本专利技术至少具有如下有益效果：本专利技术所述的快速检测利福昔明原料及其制剂中有关物质及其含量的方法不仅可以缩短分析时间，提高企业内控检测的速度；并且可实现中国药典杂质A、利福昔明Y+羟基利福昔明的分离及其他副产物和降解杂质之间及利福昔明和其相邻杂质之间的分离；而且该方法减小有机试剂如甲醇和乙腈的消耗量，更为绿色环保；更为重要的是该方法可以与质谱仪直接串联，利于未知杂质的结构推测。本专利技术提供的检测方法专属性良好，分析速度快(10分钟以内)，重复性良好，利福昔明合成工艺中可能引入的杂质、工艺副产物及降解杂质间及利福昔明和相邻杂质间的分离度均良好，流动相为CO2及少量醇，环境友好，可直接和质谱仪联用，便于杂质的结构推测，对于评价利福昔明原料的质量及其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法，其特征在于，该检测方法为超临界流体色谱法，其包括如下步骤：步骤1)采用有机溶剂溶解所述利福昔明原料或制剂制备样品；步骤2)采用CO2、低级醇作为流动相，在色谱柱中对所述样品进行梯度洗脱；步骤3)采用检测器对所述样品的组分及其含量进行测定；其中，所述样品的组分包括利福昔明和杂质，所示杂质包括2‑氨基‑4‑甲基吡啶、利福霉素B、利福霉素SV、利福昔明Y、利福霉素S、利福霉素O、杂质A、杂质B、羟基利福昔明中的任一种或任几种。

【技术特征摘要】
1.一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法，其特征在于，该检测方法为超临界流体色谱法，其包括如下步骤：步骤1)采用有机溶剂溶解所述利福昔明原料或制剂制备样品；步骤2)采用CO2、低级醇作为流动相，在色谱柱中对所述样品进行梯度洗脱；步骤3)采用检测器对所述样品的组分及其含量进行测定；其中，所述样品的组分包括利福昔明和杂质，所示杂质包括2-氨基-4-甲基吡啶、利福霉素B、利福霉素SV、利福昔明Y、利福霉素S、利福霉素O、杂质A、杂质B、羟基利福昔明中的任一种或任几种。2.根据权利要求1所述的一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法，其特征在于，所述有机溶剂包括乙醇、甲醇、异丙醇中的至少一种；所述低级醇包括甲醇、乙醇、异丙醇中的至少一种；其中，原料或制剂采用有机溶剂溶解后所获得的样品中的利福昔明的浓度为5～10mg·mL-1。3.根据权利要求1所述的一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法，其特征在于，所述低级醇为乙醇或乙醇和异丙醇的混合物；其中，异丙醇的混合比例为0～50v％。4.根据权利要求1～3中任一项所述的一种利福昔明原料及其制剂组分的检测方法，其特征在于，所述低级醇的pH值为3.1～10.2，其采用的pH调节剂包括甲酸、冰醋酸、三氟乙酸、氨溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵敬丹，刘浩，秦峰，钱琛，
申请(专利权)人：上海市食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：上海,31