一组打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一组打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记及其应用。所述的打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记编号为TMn324、TMn330、TMn332、TMn349、TMn359、TMn360和TMn383，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8、SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示。本发明专利技术所述的一组分子标记具有简捷、高效和高通量的特点，可用于精准打破烟草N基因下游（3’端）不同位置上的连锁累赘，培育出既含有N基因又能完全或部分打破不利连锁累赘影响的烟草抗TMV新品种。

A Group of Molecular Markers Breaking Downstream (3'End) Linkage of TMV Resistance Gene in Tobacco and Its Application

The invention discloses a set of molecular markers that break down the downstream (3'end) chain redundancy of TMV resistance gene N in tobacco and its application. The molecular marker number for breaking down the downstream (3'end) chain redundancy of TMV resistance gene N downstream (3'end) of tobacco was TMn324, TMn330, TMn330, TMn332, TMn332, TMn349, TMn359, TMn360 and TMn383. The PCR amplified product nucleotide sequences were SEQ ID No.1, SEQ IDNo.2, SEQ ID No.2, SEQ ID No.3, SEQ ID No.4, SEQ ID No.4, SEQ ID No.5 and SEQ ID No.5 and SEQ ID No.No.6, SEQ ID.7 and SEQ No.8, SEQ No. No. EQ, No. EQ No. EQ, No. EQ No. 8, No. No Q-ID N O.10 shows. The set of molecular markers described in the present invention has the characteristics of simplicity, high efficiency and high throughput, and can be used to precisely break down the chain redundancy at different locations downstream (3'end) of the N gene of tobacco, and to cultivate a new tobacco variety with both N gene and completely or partially breaking the adverse chain redundancy.

【技术实现步骤摘要】
一组打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一组打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记及其应用。
技术介绍
由烟草花叶病毒（TobaccoMosaicVirus,TMV）引起的烟草花叶病，是我国乃至全球烟叶产区的重要烟草病害之一。为了减少和避免因烟草花叶病而对烟草产业造成巨大经济损失，生产上主要采取药剂防治和人为销毁田间病残体等措施进行防治，虽在控制TMV的发生流行上取得了一定的效果，但在局部田块爆发TMV的情况仍然时有发生。因此，选育抗病品种、提高烟草本身的抗病性是防治TMV的根本途径。目前，生产上大面积推广应用的烟草TMV抗源主要是源于野生烟草-心叶烟(Nicotianaglutinosa)，其抗性由一个显性单基因N控制（GerstelDU,InheritanceinNicotianatabacum.XIX.IdentificationofthetabacumchromosomereplacedbyonefromN.glutinosainmosaic-resistantholmessamsountobacco,Genetics,1945,30:448-454）且N基因已在1994年被成功克隆（WhithamS,Dinesh-KumarSP,ChoiD,HehlR,CorrCandBakerB,TheproductofthetobaccomosaicvirusresistancegeneN:SimilaritytoTollandtheInterleukin-1Receptor,Cell,1994,78:1101-1115）。紧接着，利用N基因改良普通烟草（栽培烟草）的TMV抗性工作就取得很大进展（TTernovskyMF,Methodsofbreedingtobaccovarietiesresistanttotobaccomosaicandpowderymildew,TheA.I.MikoyanpanSovietSci.Res.Inst.Tob.&IndianTob.Ind.KrasnodarPub,1945,143:126-141；WernsmanEA,Sourcesofresistancetovirusdiseases，CorestaInf.Bull.,1992,3:113-119)。在采用传统的杂交育种手段获得的含有N基因而具有TMV抗性的烟草品种中，除了目标基因N外还携带N基因上（5’端）下游（3’端）紧密连锁的累赘片段（源自野生烟-心叶烟染色体片段）。因连锁累赘的存在，使烟草在获得TMV抗性的同时也存在产量上较低、上部叶落黄较慢、后期成熟叶片烘烤困难等不利影响，严重阻碍了含有TMV抗性基因N的烟草在生产上大面积推广应用。已有研究证明N基因本身除了提供TMV抗性外，并无产量和产值的不利影响，而连锁累赘造成的不利性状或影响是源自N基因上（5’端）下游（3’端）紧密连锁片段上的其他基因（LewisRS.,LingerLR.,WolffMF.,WernsmanEA.,ThenegativeinfluenceofN-mediatedTMVresistanceonyieldintobacco:linkagedragversuspleiotropy.TheorApplGenet,2007,115:169-178;LewisRS,RoseC,Agronomicperformanceoftobaccomosaicvirus-resistanttobaccolinesandhybridspossessingtheresistancegeneNintrogressedondifferentchromosomes.CropSci.,2010,50:1339-1347）。基于烟草TMV抗性基因N的序列，国内外研究者成功的开发出多个用于检测含有N基因而具有TMV抗性的分子标记（LewisRS,MillaSR,andLevinJS,MolecularandgeneticcharacterizationofNicotianaglutinosaL.chromosomesegmentsintobaccomosaicvirusresistanttobaccoaccessions,CropSci.,2005,45(6):2355-2362；袁清华,陈俊标,李淑玲,马柱文,邱道寿,张振臣,抗TMV烟草种质资源的N基因片段序列研究,广东农业科学,2011,1(29):96-99；陈爽,朴世领,金爱兰，烟草抗TMVN基因及其在分子标记辅助育种中的应用,延边大学农学学报,2012,34(4):355-361；张玉,罗成刚,殷英,胡小波,戴培刚,张波,烟草N基因及其在烤烟遗传育种中的应用,中国农学通报,2013,29(19):89-92），同时建立了相应的检测体系（刘磊,郭兆奎,万秀清,颜培强,乔婵,刘丹,N基因标记基因PCR检测方法的建立及其在遗传育种中的应用,分子植物育种,2010,8(1):167-171），并将其中的部分检测标记及方法申请了专利（CN101892304B；CN102140546B；CN103866038B）。但上述标记和方法仅是用来检测具有N基因的TMV抗性烟草品种，而不具有打破N基因紧密连锁的累赘片段的功能。虽有相关文献（LewisRS,MillaSR,LevinJS,MolecularandgeneticcharacterizationofNicotianaglutinosaL.chromosomesegmentsintobaccomosaicvirus-resistanttobaccoaccessions.CropSci.,2005,45:2355-2362）和专利（CN105200052B;CN105200149B）利用分子标记来衡量和估算因导入N基因而携带的连锁片段长度，但这些研究所公开的分子标记是基于番茄基因组数据而不是与N基因紧密连锁的累赘片段序列信息，因此，这些分子标记只能用来粗略估计烟草中N基因上（5’端）下游（3’端）连锁累赘片段的长短，而不具备精确检测、判断和打破烟草中N基因的连锁累赘片段及具体位置信息，进而，限制了上述标记在培育既含N基因又具有完全打破连锁累赘或在不同位置部分打破连锁累赘的烟草抗TMV品种中的应用。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记；第二目的在于提供所述的打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记的应用。本专利技术的第一目的是这样实现的，所述的打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记编号为TMn324、TMn330、TMn332、TMn349、TMn359、TMn360和TMn383，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.4、SEQIDNo.5和SEQIDNo.6、SEQIDNo.7和SEQIDNo.8、SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示。本专利技术的第二目的是这样实现的，利用上述一组分子标记进行精确检测和判断待测烟草本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记，其特征在于所述的打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记编号为TMn324、TMn330、TMn332、TMn349、TMn359、TMn360和TMn383，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No .1、SEQ ID No .2、SEQ ID No .3、SEQ ID No .4、SEQ ID No .5和SEQ ID No .6、SEQ ID No .7和SEQ ID No .8、SEQ ID No .9和SEQ ID No .10所示。

【技术特征摘要】
1.一组打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记，其特征在于所述的打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记编号为TMn324、TMn330、TMn332、TMn349、TMn359、TMn360和TMn383，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.4、SEQIDNo.5和SEQIDNo.6、SEQIDNo.7和SEQIDNo.8、SEQIDNo.9和SEQIDNo.10所示。2.根据权利要求1所述的一组打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记，其特征在于所述的分子标记所对应的7个位点的引物序列分别为：TMn324序列为TMn324F：5’-CGACTTCATGAAAGCACCAG-3’（SEQIDNo.11），TMn324R：5’-CTACTGGACTCCACCCACGA-3’（SEQIDNo.12）；TMn330序列为TMn330F：5’-TGGTTAAAACTCCCATCCCTA-3’（SEQIDNo.13），TMn330R：5’-TGGAAAATGAATTTTTCGAATG-3’（SEQIDNo.14）；TMn332序列为TMn332F：5’-TTTGTGCCAAAAGAAAAGGAA-3’（SEQIDNo.15），TMn332R：5’-TGGAGAGATCGTGAAGGTCA-3’（SEQIDNo.16）；TMn349序列为TMn349F：5’-TGCACGTCTGATACTTTTTGA-3’（SEQIDNo.17），TMn349R：5’-CAACTTTGCACCACCATCAC-3’（SEQIDNo.18）；TMn359序列为TMn359F：5’-CAACACGCACCATCACAAGT-3’（SEQIDNo.19），TMn359R：5’-CTATGCTGCCCCTTCTTCAC-3’（SEQIDNo.20）；TMn360序列为TMn360F：5’-TGGTTAAAGCATGCGACTTG-3’（SEQIDNo.21），TMn360R：5’-AGGAGTTTTTCGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：童治军，肖炳光，李永平，陈学军，方敦煌，谢贺，张谊寒，白戈，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：云南,53