一种脂质体修饰的金纳米粒复合物及其在治疗帕金森氏症方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种脂质体修饰的金纳米粒复合物及其在治疗帕金森氏症方面的应用。所述金纳米粒复合物为脂质体包裹的吸附有能够干扰α‑突触核蛋白合成的质粒的金纳米粒子，并且表面修饰神经生长因子和二十二碳六烯酸。通过本发明专利技术制备得到的脂质体修饰的金纳米粒复合材料，在解决化学用药和传统转染试剂副作用大的前提下，将能够干扰α‑突触核蛋白合成的质粒转染到细胞内，干扰α‑突触核蛋白的合成，来治疗帕金森小鼠的运动障碍和探索能力障碍，发现其可以通过干扰脑内α‑突触核蛋白的表达来改善帕金森小鼠的运动与探索能力，对于帕金森氏症的治疗和行为障碍改善具有重要的意义和应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种脂质体修饰的金纳米粒复合物及其在治疗帕金森氏症方面的应用
本专利技术涉及帕金森氏症治疗
，更具体地，涉及一种脂质体修饰的金纳米粒复合物及其在治疗帕金森氏症方面的应用。
技术介绍
帕金森氏症（Parkinson’sdisease，PD），又名震颤麻痹，是一种常见的神经系统退行性疾病，其发病率仅次于阿尔茨海默病（Alzheimer'sdisease，AD），为世界第二大神经性的疾病。目前，全球65岁以上人群中大约有1.5%的人口患有PD，到2030年，PD患者可能会翻倍增长到九百万人左右。PD主要临床症状表现为肌强直、震颤、运动减慢以及平衡和行走障碍，随着PD研究的不断深入，研究人员发现PD患者除了表现出典型运动障碍以外，同时还存在着许多非运动性的症状，例如情绪障碍、焦虑，抑郁以及思考迟缓、认知衰退等认知方面的障碍。研究表明PD的病理特征为中脑黑质纹状体的多巴胺能神经元坏死，导致多巴胺释放量减少，最终造成PD各种障碍。目前，针对PD主要有三种治疗的方法：1）手术治疗：通过移植多巴胺能神经元细胞，来降低用药量，但是并不能从根本上解决问题。2）药物治疗：左旋多巴胺、儿茶酚转移酶抑制剂、多巴胺受体激动剂、单胺氧化酶B、谷氨酸-N-甲基-D-天冬氨酸拮抗剂、酶抑制剂。然而，疾病的恶化是不可避免的，病人很快就会出现运动性障碍，如步伐紊乱、痴呆等。3）基因治疗：RNA干扰特定蛋白的表达，目前相关研究较多。因为RNA通过干扰基因转录为相应的蛋白而沉默特定基因，所以理论上来讲，任何基因都可以通过RNAi靶向沉默，这样就可以为治疗疾病提供一个巨大的前景。基因治疗由于其靶向性强，疗效明显等优势，成为目前的研究热点。基因载体主要分为病毒载体和非病毒载体两类，非病毒载体价格低、制备简单、安全有效、无免疫原性等优点，已渐成为病毒类基因载体的替代者。非病毒载体，按其尺寸大小可以分为三类：纳米载体、微米载体和大尺寸载体。在过去的十几年里，金纳米粒子由于具有生物相容性好、合成简单、分散性好、易功能化、细胞内吞率高、循环半衰期长、易于渗透肿瘤细胞及特殊的化学惰性、表面特性、电子结构和光学特性，使它已经在诊断疾病、化疗、医学成像、热疗、新疫苗的设计、放疗、基因疗法等临床研究中成为一种理想的纳米载体。但是目前为止尚无一种高效安全的针对帕金森症的基因治疗药物出现。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，利用巯基将金纳米粒子（GNP）巯基化后，将干扰α-突触核蛋白合成的质粒DNA（pDNA）吸附在金纳米粒子上，得到GNP(pDNA)，通过卵磷脂与胆固醇合成脂质体（Lipo），利用脂质体将GNP(pDNA)包裹得到GNP(pDNA)-Lipo，随后通过光化学固定的方法将神经生长因子（NGF）修饰上，得到GNP(pDNA)-Lipo-NGF，最后利用EDC/NHS活化羧基把二十二碳六烯酸（DHA）连接到复合物上，最终得到金纳米粒复合物GNP(pDNA)-Lipo-NGF-DHA，即AuNPs。接着将金纳米粒子复合物AuNPs用于治疗帕金森小鼠，发现该复合物能够明显的抑制脑内α-突触核蛋白的表达，并改善帕金森小鼠的的运动与探索能力。本专利技术的第一个目的是提供一种脂质体修饰的金纳米粒复合物。本专利技术的第二个目的是提供所述的金纳米粒复合物的制备方法。本专利技术的第三个目的是提供任一所述制备方法制备得到的脂质体修饰的金纳米粒复合物。本专利技术的第四个目的是提供所述金纳米粒复合物在制备帕金森氏症治疗药物中的应用。本专利技术的第五个目的是提供所述金纳米粒复合物在制备干扰脑内α-突触核蛋白的表达药物中的应用。本专利技术的第六个目的是提供所述金纳米粒复合物在制备保护脑内多巴胺能神经元免受损伤药物中的应用。本专利技术的第七个目的是通过所述金纳米粒复合物在制备恢复/提高长期的运动迟缓药物中的应用。本专利技术的第八个目的是通过所述金纳米粒复合物在制备恢复/提高空间记忆能力障碍药物中的应用。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：本专利技术通过硼氢化钠还原氯金酸，十二烷基硫醇对金纳米粒进行改性得到带正电的金纳米粒子，通过静电吸附作用吸附带负电的质粒DNA，并通过卵磷脂与胆固醇脂质体的合成将金纳米粒子包裹，并通过光接枝的方法将连接信号分子NGF、识别脑组织和血脑屏障的靶向分子氧化型DHA连接到复合物上，构建了一种金纳米粒复合物；其中脂质体在PD中的应用主要是构成药物递送系统，充当药物运输载体，保护包封药物，提高药物稳定性。并分别利用透射电镜、紫外-可见分光光度法、琼脂糖凝胶电泳、傅里叶红外光谱等方法进行表征检测，确保粒子合成成功后，进行小鼠实验，实验结果显示，该金纳米粒复合物（AuNPs），保护脑内多巴胺能神经元免受损伤，并改善运动迟缓和空间记忆能力障碍。因此本专利技术要求保护一种脂质体修饰的金纳米粒复合物，所述金纳米粒复合物为脂质体包裹的吸附有能够干扰α-突触核蛋白合成的质粒的金纳米粒子，并且表面修饰神经生长因子和二十二碳六烯酸。优选地，脂质体为胆固醇和卵磷脂。优选地，能够干扰α-突触核蛋白合成的质粒为连接有Pantroglodytessynucleinalpha(SNCA)或其片段的真核质粒过表达载体。优选地，所述真核质粒过表达载体为元件顺序为CMV-EGFP-MCS-SV40-Neomycin的GV144载体，连接位点为XhoI和BamHI酶切位点之间。优选地，所述Pantroglodytessynucleinalpha(SNCA)片段的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。SEQIDNO：1ATGGATGTATTCATGAAAGGACTTTCAAAGGCCAAGGAGGGAGTTGTGGCTGCTGCTGAGAAAACCAAACAGGGTGTGGCAGAAGCAGCAGGAAAGACAAAAGAGGGTGTTCTCTATGTAGGCTCCAAAACCAAGGAGGGAGTGGTGCATGGTGTGGCAACAGTGGCTGAGAAGACCAAAGAGCAAGTGACAAATGTTGGAGGAGCAGTGGTGACGGGTGTGACAGCAGTAGCCCAGAAGACAGTGGAGGGAGCAGGGAGCATTGCAGCAGCCACTGGCTTTGTCAAAAAGGACCAGTTGGGCAAGAATGAAGAAGGAGCCCCACAGGAAGGAATTCTGGAAGATATGCCTGTGGATCCTGACAATGAGGCTTATGAAATGCCTTCTGAGGAAGGGTATCAAGACTACGAACCTGAAGCCTAA最优选地，所述能够干扰α-突触核蛋白合成的质粒为核苷酸序列如SEQIDNO：1所示的DNA片段的GV144载体，连接位点为XhoI和BamHI酶切位点之间。优选地，脂质体、能够干扰α-突触核蛋白合成的质粒、金纳米粒子、表面修饰神经生长因子和二十二碳六烯酸的质量比为8.5～10：0.8～1.2：8.5～10：2.5～3.0：17.5～19.0。优选地，脂质体、能够干扰α-突触核蛋白合成的质粒、金纳米粒子、表面修饰神经生长因子和二十二碳六烯酸的质量比为9：1：9：2.7：18。所述的金纳米粒复合物的制备方法，包括以下步骤：S1.制备得到巯基修饰的金纳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脂质体修饰的金纳米粒复合物，其特征在于，所述金纳米粒复合物为脂质体包裹的吸附有能够干扰α‑突触核蛋白合成的质粒的金纳米粒子，并且表面修饰神经生长因子和二十二碳六烯酸。

【技术特征摘要】
1.一种脂质体修饰的金纳米粒复合物，其特征在于，所述金纳米粒复合物为脂质体包裹的吸附有能够干扰α-突触核蛋白合成的质粒的金纳米粒子，并且表面修饰神经生长因子和二十二碳六烯酸。2.权利要求1所述的金纳米粒复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.制备得到巯基修饰的金纳米粒GNP；S2.用能够干扰α-突触核蛋白合成的质粒DNA吸附在GNP表面，得到GNP(pDNA)；S3.制备脂质体Lipo；S4.制备脂质体Lipo包裹的金纳米粒GNP(pDNA)-Lipo；S5.在GNP(pDNA)-Lipo表面修饰神经生长因子NGF和二十二碳六烯酸DHA得到金纳米粒复合物GNP(pDNA)-Lipo-NGF-DHA。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1的具体操作为：用氯金酸的水溶液、柠檬酸钠的水溶液和正十二烷基硫醇混合，得到混合溶液1；将混合溶液1和硼氢化钠水溶液混合反应溶液颜色变为橙色，制备得到GNP。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2的具体操作为：GNP溶液与能够干扰α-突触核蛋白合成的质粒DNA溶液混合，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：关燕清，李楚华，刘丽，李明超，叶家霖，王俊盈，曾小蝶，周素冰，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东,44