组织学染色剂的光谱区分制造技术

本公开提供用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的分光光度方法。这些方法应用于各种评估中，包括组织学染色剂的标识的确定、组织学染色剂的质量的确定等。还包括用于实践所描述方法的设备和系统。本公开还提供计算机可读介质，其包含在评估组织学分析仪中使用的组织学染色剂时有用的组织学染色剂的参考分光光度特性的库。还提供包含指令的计算机可读介质，所述指令使计算设备执行用于进行组织学染色剂的评估的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】组织学染色剂的光谱区分交叉引用本申请要求在2015年12月18日递交的美国临时专利申请No.62/269,204的权益，该美国临时专利申请的全部内容通过引用并入在本文中。
技术介绍
在组织学中利用许多不同染色剂及其变型。例如，在血液学中，组织学罗曼诺夫斯基染色剂的多个不同变型用于在载玻片上涂抹的血膜中的血细胞类型的区分。特别地，使用两种不同类型的染色剂，其被称为瑞氏-吉姆萨(WG)和迈格林华(MG)。而且，迈格林华混合物经常结合吉姆萨染色剂一起使用，产生迈格林华吉姆萨(MGG)制剂。使用各种方法从两种主要染料(曙红Y和亚甲蓝)制备所有类型的罗曼诺夫斯基染色制剂，每一种方法形成独特的染色制剂。瑞氏染色剂为多色亚甲蓝的曙红(曙红Y染料)的混合物。迈格林华染色剂为詹纳尔染色剂的德国等效物，其为亚甲蓝曙红，该亚甲蓝曙红类似于瑞氏染色剂、但区别在于不使用多色亚甲蓝。多色亚甲蓝为亚甲蓝的碱性溶液，其经历利用熟化(催熟)的渐进式氧化脱甲基，以产生所有的三甲基中间物、二甲基中间物、单甲基中间物和无甲基中间物的形式，形成亚甲蓝、天青、硫堇和亚甲紫的混合物。当应用于染色外周血膜时，任何类型的罗曼诺夫斯基染色剂通常将产生相似类型的细胞着色。然而，染色制剂的小的但重要的区别将允许区分血细胞中的具体情况，诸如例如中性粒细胞中的毒性颗粒。如果染色制剂不是最佳的(例如，缺少与其衍生物成比例的、足够分数的纯亚甲蓝)，则正常的嗜中性颗粒趋向于过度染色且看起来像毒性颗粒。最佳染色剂组成物也增强细胞核和多染性RBC(网状细胞)的染色。因此，重要的是保持且紧密控制如在最佳过程中所获得的任何给定染色制剂的具体组合物。由于罗曼诺夫斯基类型染色剂的组合物是非常类似的，因此难以(如果并非不可能)通过目视检查或通过使用常规实验室仪器(诸如染色剂pH的测量)在任何(WG、MG或MGG)密切相关的染色剂和/或同一染色剂的变型之间进行辨别。在例如由自动组织学或血液学载片制备设备所执行的自动组织学中，可以根据待执行的特定试验或用户偏好使用各种染色剂。无论特定设备使用单一染色剂还是多种染色剂，自动载片制备设备需要人类用户载入一种或多种染色剂。因此，染色剂可以无意被认错且可能将错误的染色剂载入设备中。另外，染色剂对于设备用户来说可以为认错的、未知的，例如由于偶然错误标记或不当制备。在不足条件下的开架贮存可以影响染色剂组合物，通过目测是注意不到的。染色协议高度取决于合适染色剂的使用。因此，当使用认错或错误制备的染色剂时，该过程将可能产生非预期结果，例如次佳着色。尽管染色剂标识可以通过用于确定染色剂组合物的复杂分析方法(例如高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC))决定性地确定，但是这些方法是费力的，耗费大量时间和资源。HPLC还需要一组参考分析物在色谱图上标识峰值(波段)，这可能难以获得复杂混合物，诸如多色亚甲蓝。亚甲蓝为阳离子染料(即，它产生带正电荷的离子或阳离子)，在水溶液中，该阳离子染料在其纯形式下呈现处于293nm(π-π*跃迁)和664nm(n-π*跃迁)两个主要吸收带，其中，664nm(产生蓝色)带具有处于对应于0-1电子振动跃迁的610nm的肩部。吸收的细节取决于多个因素，包括质子化作用、吸收到其它材料、以及二聚物和更高阶聚合物根据浓度和其它交互的异染色-形成。进而，曙红Y为酸性染料(在溶液中离子化以产生带负电荷的离子或阴离子)，其呈现处于524nm的主要吸收带(产生红色)。因此，染料分子的光学吸收对于该染料分子在染色剂制备的过程中可经历的修改是敏感的。
技术实现思路
本公开的方面包括一种评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的方法，所述方法包括：在分光光度计上在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；将所识别的一个或多个峰值吸光度波长与包括用于多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库进行比较；以及基于所述比较评估所述组织学染色剂其它方面包括评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂，以确定组织学染色剂的标识、确定组织学染色剂的质量。在一些方面中，所述方法包括生成所述评估的报告，其中，所述报告包括染色剂特定信息，包括例如，所述组织学染色剂的标识、所述组织学染色剂的质量、一个或多个峰值吸光度波长、在所述预定义范围或其一部分内的一个或多个吸光度测量、或其组合。在本公开的某些方面中，在其内测量吸收光谱的预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内、为500nm到700nm或在500nm到700nm内、为600nm到700nm或在600nm到700nm内、为640nm到670nm或在640nm到670nm内、为500nm到550nm或在500nm到550nm内、或为200nm到400nm或在200nm到400nm内。在一些方面中，所述方法包括：在分光光度计上在两个或更多个预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱，包括例如，其中，所述两个或更多个预定义范围包括第一预定义范围和第二预定义范围，所述第一预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内，所述第二预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。其它方面包括：在测量所述吸收光谱之前利用溶剂稀释所述组织学染色剂，其中，具体稀释物和在稀释染色剂时使用的具体溶剂具体对应于与所测量的波长相比较的参考峰值吸光度波长，例如，参考峰值吸光度波长从利用与被测量的组织学染色剂相同的溶剂稀释成相同稀释物的参考样品获得。在一些方面中，用水将染色剂稀释为1:200。在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：制备所述组织学染色剂的多种稀释物，以及针对所述组织学染色剂的所述多种稀释物中的每种稀释物执行方法步骤。在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：制备第一稀释物和第二稀释物，其中，所述第二稀释物为所述第一稀释物的浓度的一半。在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：从测量的光谱识别光谱偏移值。在一些方面中，参考峰值吸光度波长的库还包括用于多种组织学染色剂的多个参考光谱偏移值，以及所述比较还包括将测量的光谱偏移值与所述库进行比较。在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：从测量的光谱识别半最大吸光度处峰宽值。在其它方面中，参考峰值吸光度波长的库还包括用于多种组织学染色剂的多个半最大吸光度处峰宽值，以及所述比较还包括将所述半最大吸光度处峰宽值与所述库进行比较。本公开的方面包括评估多种组织学染色剂，其中，所述多种组织学染色剂包括罗曼诺夫斯基染色剂，其包括例如瑞氏-吉姆萨、迈格林华、和迈格林华-吉姆萨。在其它方面中，评估组织学染色剂的方法可以包括：在分光光度计上测量所述组织学染色剂的吸收光谱，其中，以至少1nm的分辨率测量所述吸收光谱。在其它方面中，参考峰值吸光度波长的库可以包括：针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值；针对多种迈格林华染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对迈格林华的656nm的所述参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值；和/或针对多种迈格林华染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。在其它方面中，参考峰值吸光度波长的库可以包括：针对瑞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的方法，所述方法包括：a)在分光光度计上在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；b)从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；c)将所识别的一个或多个峰值吸光度波长与包括针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库进行比较；以及d)基于所述比较评估所述组织学染色剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.18 US 62/269,2041.一种评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的方法，所述方法包括：a)在分光光度计上在预定义范围内测量所述组织学染色剂的吸收光谱；b)从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；c)将所识别的一个或多个峰值吸光度波长与包括针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库进行比较；以及d)基于所述比较评估所述组织学染色剂。2.如权利要求1所述的方法，其中，所述评估包括确定所述组织学染色剂的标识。3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述评估包括确定所述组织学染色剂的质量。4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括生成所述评估的报告。5.如权利要求4所述的方法，其中，所述报告包括染色剂特定信息，所述染色剂特定信息选自由以下组成的群组：所述组织学染色剂的所述标识、所述组织学染色剂的所述质量、一个或多个峰值吸光度波长、在所述预定义范围或其一部分内的一个或多个吸光度测量值及其组合。6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内。7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内。8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述预定义范围为600nm到700nm或在600nm到700nm内。9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述预定义范围为640nm到670nm或在640nm到670nm内。10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述预定义范围为500nm到550nm或在500nm到550nm内。11.如权利要求6所述的方法，其中，所述预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，方法包括：在分光光度计上在两个或更多个预定义范围内测量所述组织学染色剂的所述吸收光谱。13.如权利要求12所述的方法，其中，所述两个或更多个预定义范围包括第一预定义范围和第二预定义范围，所述第一预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内，所述第二预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：在测量所述吸收光谱之前利用溶剂稀释所述组织学染色剂，并且稀释物和所述溶剂具体对应于针对所述多种组织学染色剂的所述参考峰值吸光度波长。15.如权利要求14所述的方法，其中，所述稀释包括用水按照1:200稀释。16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：制备所述组织学染色剂的多种稀释物，以及针对所述组织学染色剂的所述多种稀释物中的每种稀释物执行步骤(a)至步骤(d)。17.如权利要求16所述的方法，其中，所述方法包括：制备第一稀释物和第二稀释物，其中，所述第二稀释物为所述第一稀释物的浓度的一半。18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述识别还包括从所测量的光谱识别光谱偏移值，所述库还包括针对多种组织学染色剂的多个光谱偏移值，并且所述比较还包括将所述光谱偏移值与所述库进行比较。19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述识别还包括从所测量的光谱识别半最大吸光度处峰宽值，所述库还包括针对多种组织学染色剂的多个半最大吸光度处峰宽值，并且所述比较还包括将所述半最大吸光度处峰宽值与所述库进行比较。20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述多种组织学染色剂包括罗曼诺夫斯基染色剂。21.如权利要求20所述的方法，其中，所述罗曼诺夫斯基染色剂选自由以下组成的群组：瑞氏-吉姆萨、迈格林华以及迈格林华-吉姆萨。22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，以至少1nm的分辨率测量所述吸收光谱。23.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述库包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值。24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述库包括针对多种迈格林华染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对迈格林华的656nm的所述参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值。25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述库包括针对多种迈格林华染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述库包括针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值。27.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述库包括针对多种瑞氏-吉姆萨染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对瑞氏-吉姆萨的659nm处的所述参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值。28.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述库包括针对多种瑞氏-吉姆萨染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。29.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述库包括针对迈格林华-吉姆萨的参考波长吸光度峰值。30.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述库包括针对多种迈格林华-吉姆萨染色剂组合物的多个光谱偏移值，其中，从针对迈格林华-吉姆萨的参考波长吸光度峰值测量所述光谱偏移值。31.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述库包括针对多种迈格林华-吉姆萨染色剂组合物的多个半最大吸光度处峰宽值。32.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法包括：随时间进行所述组织学染色剂的多次评估，从而监控染色剂质量。33.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法包括：在所述测量之前将所述组织学染色剂的等分试样从存储容器传送到分析容器中。34.如权利要求33所述的方法，其中，所述分析容器选自由以下组成的群组：吸收池、毛细管和多孔板。35.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在所述组织学分析仪内进行所述测量。36.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在所述组织学分析仪之外进行所述测量。37.如权利要求36所述的方法，其中，在所述组织学分析仪之外执行所述测量之后，将所述组织学染色剂的所述吸收光谱、从其导出的一个或多个峰值吸光度波长或其组合传送到所述组织学分析仪。38.如权利要求37所述的方法，其中，通过将所述分光光度计连接到所述组织学分析仪的有线数据连接传送所述组织学染色剂的所述吸收光谱、从其导出的一个或多个峰值吸光度波长或其组合。39.如权利要求37所述的方法，其中，使用计算机可读存储介质传送所述组织学染色剂的所述吸收光谱、从其导出的一个或多个峰值吸光度波长或其组合。40.一种用于评估在组织学分析仪中使用的组织学染色剂的设备，所述设备包括：a)分光光度计，所述分光光度计配置成在预定义范围内测量所述组织学染色剂的所述吸收光谱；b)针对多种组织学染色剂的参考峰值吸光度波长的库；c)光谱处理电路，所述光谱处理电路配置成：i)从所测量的光谱识别一个或多个峰值吸光度波长；ii)将所述一个或多个峰值吸光度波长与所述库进行比较以进行所述组织学染色剂的评估；以及d)信号系统，所述信号系统配置成报告所述评估的结果。41.如权利要求40所述的设备，其中，所述报告包括染色剂特定信息，所述染色剂特定信息选自由以下组成的群组：所述组织学染色剂的标识、所述组织学染色剂的质量、一个或多个峰值吸光度波长、在所述预定义范围或其一部分内的一个或多个吸光度测量及其组合。42.如权利要求40至41中任一项所述的设备，其中，所述报告包括对所述组织学染色剂的标识的确定。43.如权利要求40至42中任一项所述的设备，其中，所述报告包括对所述组织学染色剂的质量的确定。44.如权利要求40至43中任一项所述的设备，其中，所述设备还包括用户界面，所述用户界面配置成用于用户输入所述组织学染色剂的假定标识。45.如权利要求40至44中任一项所述的设备，其中，所述光谱处理电路还配置成将所述组织学染色剂的所述假定标识与所述组织学染色剂的评估标识进行比较以及输出关于所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识是否匹配的结果。46.如权利要求40至45中任一项所述的设备，其中，所述设备包括信号系统，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的所述假定标识与所述评估标识不匹配时警告所述用户。47.如权利要求40至46中任一项所述的设备，其中，所述设备包括信号系统，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的质量低于预定阈值时警告所述用户。48.如权利要求40至46中任一项所述的设备，其中，所述设备包括信号系统，所述信号系统配置成在所述组织学染色剂的质量低于用户指定的阈值时警告所述用户。49.如权利要求40至48中任一项所述的设备，其中，所述预定义范围为200nm到800nm或在200nm到800nm内。50.如权利要求49所述的设备，其中，所述预定义范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内。51.如权利要求50所述的设备，其中，所述预定义范围为600nm到700nm或在600nm到700nm内。52.如权利要求51所述的设备，其中，所述预定义范围为640nm到670nm或在640nm到670nm内。53.如权利要求50所述的设备，其中，所述预定义范围为500nm到550nm或在500nm到550nm内。54.如权利要求49所述的设备，其中，所述预定义范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。55.如权利要求40至54中任一项所述的设备，其中，所述预定义范围包括两个或更多个预定义子范围。56.如权利要求55所述的设备，其中，所述两个或更多个预定义子范围包括第一预定义子范围和第二预定义子范围，所述第一预定义子范围为500nm到700nm或在500nm到700nm内，所述第二预定义子范围为200nm到400nm或在200nm到400nm内。57.如权利要求40至56中任一项所述的设备，其中，所述设备还包括样品制备模块，所述样品制备模块配置成提取所述组织学染色剂的样品。58.如权利要求57所述的设备，其中，所述样品制备模块还配置成将所述样品分散到与所述分光光度计兼容的分析容器中。59.如权利要求58所述的设备，其中，所述分析容器选自由以下组成的群组：吸收池、毛细管以及多孔板。60.如权利要求40至59中任一项所述的设备，其中，所述设备还包括样品制备模块，所述样品制备模块配置成从所述组织学染色剂的样品制备一种或多种稀释物。61.如权利要求40至60中任一项所述的设备，其中，所述分光光度计配置成以至少1nm的分辨率测量所述吸收光谱。62.如权利要求61所述的设备，其中，所述分光光度计配置成以至少0.5nm的分辨率测量所述吸收光谱。63.如权利要求40至62中任一项所述的设备，其中，所述库包括针对迈格林华的在基本656nm处的参考波长吸光度峰值。64.如权利要求40至63中任一项所述的设备，其中，所述库包括针对瑞氏-吉姆萨的在基本659nm处的参考波长吸光度峰值。65.如权利要求40至63中任一项所述的设备，其中，所述光谱处理电路还配...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·Y·别列日纳，R·尼夫斯艾利切亚，E·C·欧拉，
申请(专利权)人：雅培实验室，
类型：发明
国别省市：美国,US