使用磁珠致动和检测进行的核酸突变检测制造技术

本发明专利技术涉及用于区分目标核酸序列中的突变、单核苷酸多态性或其他变体与样品中的野生型序列的方法。所述方法包括经由三明治杂交进行表面结合磁珠的步骤，其中，珠子结合探针与目标核酸的一端杂交，并且表面结合探针与同一目标核酸的另一端杂交，通过磁力和/或温度对杂交施加严格性，确定保持附着到表面的磁珠的量，并且将保持附着到表面的磁珠的量与目标核酸中的突变、SNP变体或其他变体的存在和/或不存在相关。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用磁珠致动和检测进行的核酸突变检测
本专利技术涉及用于区分目标核酸序列中的突变、单核苷酸多态性或其他变体与样品中的野生型序列的方法。本专利技术还涉及使用磁珠致动和/或温度控制。
技术介绍
动力学结合实验用于确定结合(Kon)和解离(Koff)速率常数，假设结合遵循质量作用定律：在任何给定时间，受体-配体复合物形成的速率都与配体浓度和仍然未被占据的受体数量成比例。解离速率与受体-配体复合物的浓度成比例。目标核酸序列中的突变、单核苷酸多态性变体(SNV或SNP)和其他变体通常通过区分含有一个或多个突变、SNP变体或其他变体的任何给定目标核酸与杂交测定中的野生型核酸的相应Koff而得到与野生型序列的最佳区别，其中，受体和配体是互补核酸。这是因为对于错配的杂交Koff比Kon差异更大。在一些情况下，Kon之间的区分是可能的，但是需要高度控制的反应条件(Knez等人，2014年)，这些条件难以在护理环境中提供。此外，通常将酶仅作用于完全匹配的核酸杂合体的酶促反应添加到基于Kon的反应中以增加特异性(Knez等人，2014年)。然而，酶的整合为整合系统提供了额外的挑战，并且每种这样的测定只能确本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测目标核酸中的突变或SNP变体或其他变体的方法，包括：a)提供珠探针和表面探针，其中，每个探针均是具有与所述目标核酸的序列互补的序列的寡核苷酸探针，任选地，所述探针的所述序列与所述目标核酸的所述序列相比含有一个或多个碱基变化，并且其中，所述珠探针被附着到磁珠，并且其中，所述表面探针被附着到固体表面，b)提供包括所述目标核酸的样品，其中，与所述目标核酸的野生型序列相比，所述目标核酸可能含有一个或多个突变和/或变体，c)使所述样品与所述珠探针和所述表面探针接触，d)允许所述目标核酸与所述珠探针和所述表面探针杂交，形成三明治结构，任选地，获得附着到所述表面的结合信号的第一读数，e)通过...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.21 EP 16175435.31.一种用于检测目标核酸中的突变或SNP变体或其他变体的方法，包括：a)提供珠探针和表面探针，其中，每个探针均是具有与所述目标核酸的序列互补的序列的寡核苷酸探针，任选地，所述探针的所述序列与所述目标核酸的所述序列相比含有一个或多个碱基变化，并且其中，所述珠探针被附着到磁珠，并且其中，所述表面探针被附着到固体表面，b)提供包括所述目标核酸的样品，其中，与所述目标核酸的野生型序列相比，所述目标核酸可能含有一个或多个突变和/或变体，c)使所述样品与所述珠探针和所述表面探针接触，d)允许所述目标核酸与所述珠探针和所述表面探针杂交，形成三明治结构，任选地，获得附着到所述表面的结合信号的第一读数，e)通过磁力和温度对杂交结合施加严格性，f)确定附着到所述表面的三明治结构中剩余的所述结合信号，g)任选地，重复步骤e)和步骤f)一次或多次，并且h)使附着到所述表面的三明治结构中剩余的所述结合信号与所述目标核酸中的突变、SNP变体或其他变体的存在和/或数量相关。其中，同时或按顺序施加增加的电压和升高的温度，并且其中，所述电压和所述温度被彼此独立地控制。2.根据权利要求1所述的方法，其中，对所述杂交结合施加严格性包括向所述样品施加增加的电压的磁场。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，控制所述温度包括将所述样品的温度升高至高于含有所述突变或所述SNP变体或所述其他变体的所述目标核酸的解链温度的温度。4.根据权利要求1或2所述的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·德雷格特，H·M·费特斯马，T·H·埃弗斯，J·B·A·D·范佐恩，M·J·希尔特耶斯，
申请(专利权)人：皇家飞利浦有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL