人源化抗CLEVER-1抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及能够与人CLEVER‑1结合、识别CLEVER‑1的表位的试剂以及人源化抗体或者单链Fv或Fab片段，其中所述表位为不连续的且包含序列：PFTVLVPSVSSFSSR和QEITVTFNQFTK。本发明专利技术亦涉及能够与人CLEVER‑1的表位结合以用于消除肿瘤或抗原诱导的免疫抑制的试剂。另外，本发明专利技术涉及包含所述能够与人CLEVER‑1结合的试剂和适当赋形剂的药物组合物。

Humanized anti-CLEVER-1 antibody and its application

The present invention relates to reagents capable of binding with human CLEVER 1 and identifying CLEVER 1 epitopes, as well as humanized antibodies or single-chain Fv or Fab fragments, in which the epitopes are discontinuous and contain sequences: PFTVLVPSVSSFSSR and QEITVTFNQFTK. The present invention also relates to reagents capable of binding with human CLEVER 1 epitopes for eliminating tumor or antigen-induced immunosuppression. In addition, the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising the reagent capable of binding with human CLEVER 1 and an appropriate excipient.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人源化抗CLEVER-1抗体及其用途专利
本专利技术涉及通过识别特异性CLEVER-1表位而对CLEVER-1蛋白特异的试剂及其用途。专利技术背景在本文中用于阐述本专利技术背景的出版物及其它资料，以及具体而言，用以提供关于实施的额外详情的案例，通过引用来结合。CLEVER-1为公开于WO03/057130中的一种蛋白，普通淋巴管内皮细胞和血管内皮细胞受体-1(CommonLymphaticEndothelialandVascularEndothelialReceptor-1)。其为一种结合蛋白，在全身脉管系统和淋巴管二者中介导淋巴细胞与内皮的黏附。通过阻断CLEVER-1与其淋巴细胞基底的相互作用，有可能同时控制淋巴细胞再循环和淋巴细胞迁移，以及控制在淋巴细胞流入及流出组织的部位的相关病况，例如炎症。WO03/057130进一步公开了CLEVER-1介导诸如单核细胞和粒细胞等其它类型的淋巴细胞与HEV样血管的结合。因此，通过阻断CLEVER-1与恶性肿瘤细胞的相互作用，有可能通过阻止淋巴管摄入与CLEVER-1结合的恶性细胞来控制转移，从而阻止恶性肿瘤扩散到淋巴结中。KzhyshkowskaJ.(2010)，TheScientificWorldJOURNAL10，2039-2053已对CLEVER-1(即Stabilin-1)进行综述。Palani等(2016)，JournalofImmunology196:115-123近期公开了通过CLEVER-1来抑制Th1淋巴细胞。WO2010/122217公开了在肿瘤、胎盘和孕妇血液中的一种巨噬细胞亚型。所述巨噬细胞亚型定义为CLEVER-1阳性巨噬细胞并提议为3型巨噬细胞。通过调节(即分别为抵消或刺激)该细胞中的CLEVER-1受体，个体中的免疫系统可受到影响。抵消或下调所述受体减小恶性肿瘤大小和/或减少恶性肿瘤生长。刺激或上调所述受体可用于产生胎母耐受和用于预防妊娠并发症。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的机制亦公开于NoyR.和PollardJ.W.的出版物“Tumour-AssociatedMacrophages:FromMechanismstoTherapy(肿瘤相关巨噬细胞：从机制到疗法)”，出版于Immunity41，2014年7月17日，第49-61页。M2巨噬细胞在人类癌症中占主导地位且刺激肿瘤生长，但亦可将这些促肿瘤巨噬细胞调变为抑制肿瘤生长的巨噬细胞，亦称为M1巨噬细胞或促炎巨噬细胞，旨在减缓或停止肿瘤生长。然而，已注意到的是，使用旨在靶向TAM的当前可得的疗法来治疗癌症的尝试，伴随有不合乎需要的副作用，例如巨噬细胞治疗方法可具有全身毒性或反常地促进肿瘤生长，因为其靶向所有巨噬细胞。特别优选的CLEVER-1拮抗剂单克隆抗体3-266(DSMACC2519)和3-372(DSMACC2520)公开于WO03/057130中，二者均根据布达佩斯条约的条款，关于用于专利程序目的的微生物保藏的国际承认，于2001年8月21日保藏于DSMZ-德国微生物菌种保藏中心(DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH)，MascheroderWeg1b，D-38124Braunschweig。专利技术目标及概述本专利技术的一个目标为提供能够与人CLEVER-1的特异性表位结合的试剂。特别地，已发现能够与人CLEVER-1的特异性表位结合的试剂可用于激活巨噬细胞以将其表型从M2巨噬细胞转换成M1巨噬细胞。另外，本专利技术的一个目标为提供用于与人CLEVER-1结合的人源化抗体或者人源化单链Fv或Fab片段，其与单克隆抗体3-372(DSMACC2520，2001年8月21日保藏于DSMZ-德国微生物菌种保藏中心)相比具有增加的结合活性。因此，本专利技术提供能够与人CLEVER-1的表位结合的试剂，其中所述表位为不连续的且包含序列：PFTVLVPSVSSFSSR(SEQIDNO:1)，和QEITVTFNQFTK(SEQIDNO:2)。特别地，本专利技术提供能够与人CLEVER-1结合、识别CLEVER-1的表位的试剂，其中所述表位为不连续的且包含序列：PFTVLVPSVSSFSSR(SEQIDNO:1)，和QEITVTFNQFTK(SEQIDNO:2)，且所述试剂包含与选自以下的所述表位序列结合的互补决定区(CDR)的序列：TSGMGIG(SEQIDNO:7)，HIWWDDDKRYNPALKS(SEQIDNO:8)，HYGYDPYYAMDY(SEQIDNO:9)，TASSSVSSSYLH(SEQIDNO:10)，RTSNLAS(SEQIDNO:11)，和HQYHRSPPT(SEQIDNO:12)。根据本专利技术，在本申请中定义的能够与人CLEVER-1结合、识别CLEVER-1的表位的试剂可选自抗体、单链Fv或Fab片段、肽或具有足以与所述表位结合的亲和力的任何其它大分子。在一方面，本专利技术提供能够与个体中的人CLEVER-1结合的试剂，用于通过将M2巨噬细胞调变为M1巨噬细胞来消除肿瘤或抗原诱导的免疫抑制，其中所述试剂与人CLEVER-1的表位结合，所述表位为不连续的且包含序列：PFTVLVPSVSSFSSR(SEQIDNO:1)，和QEITVTFNQFTK(SEQIDNO:2)。能够与TAM上的人CLEVER-1、优选与CLEVER-1上的特异性表位序列结合的根据本专利技术的试剂，适用于通过减小恶性肿瘤大小；通过减少个体中的恶性肿瘤生长；和/或通过抑制癌细胞迁移和转移形成来治疗或预防癌症，其中通过将M2巨噬细胞调变为M1巨噬细胞来消除所述恶性生长周围的免疫抑制。能够与人CLEVER-1、优选与CLEVER-1上的特异性表位序列结合的根据本专利技术的试剂，亦适用于治疗个体中的慢性感染，其中通过将M2巨噬细胞调变为M1巨噬细胞来消除对感染性抗原的免疫抑制。能够与人CLEVER-1、优选与CLEVER-1上的特异性表位序列结合的根据本专利技术的试剂，亦适于用作疫苗的佐剂，其中通过将M2巨噬细胞调变为M1巨噬细胞来消除对疫苗抗原的免疫抑制。在另一方面，本专利技术提供能够与人CLEVER-1的表位结合的人源化抗体或者单链Fv或Fab片段，其中所述表位为不连续的且包含序列：PFTVLVPSVSSFSSR(SEQIDNO:1)，和QEITVTFNQFTK(SEQIDNO:2)，且所述抗体或者单链Fv或Fab片段包含a)人IgG4重链和κ轻链的恒定区，和b)一个或多个下列互补决定区(CDR)的序列i)重链的CDRCDR1：TSGMGIG(SEQIDNO:7)，和/或CDR2：HIWWDDDKRYNPALKS(SEQIDNO:8)，和/或CDR3：HYGYDPYYAMDY(SEQIDNO:9)；和ii)轻链的CDRCDR1：TASSSVSSSYLH(SEQIDNO:10)，和/或CDR2：RTSNLAS(SEQIDNO:11)，和/或CDR3：HQYHRSPPT(SEQIDNO:12)。本专利技术的另一个目标亦为提供一种药物组合物，其包含根据本专利技术的能够与人CLEVER-1结合的试剂或者人源化抗体或者单链Fv或Fab片段以及适当的赋形剂。本专利技术亦提供一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一种能够与人CLEVER‑1的表位结合的试剂，其中所述表位为不连续的且包含序列：PFTVLVPSVSSFSSR (SEQ ID NO: 1)，和QEITVTFNQFTK (SEQ ID NO: 2) ，且所述试剂包含与选自以下的所述表位序列结合的互补决定区(CDR)的序列：TSGMGIG (SEQ ID NO: 7)，HIWWDDDKRYNPALKS (SEQ ID NO: 8)，HYGYDPYYAMDY (SEQ ID NO: 9)，TASSSVSSSYLH (SEQ ID NO: 10)，RTSNLAS (SEQ ID NO: 11)，和HQYHRSPPT (SEQ ID NO: 12)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.18 FI 20165335;2016.04.18 FI 201653361.一种能够与人CLEVER-1的表位结合的试剂，其中所述表位为不连续的且包含序列：PFTVLVPSVSSFSSR(SEQIDNO:1)，和QEITVTFNQFTK(SEQIDNO:2)，且所述试剂包含与选自以下的所述表位序列结合的互补决定区(CDR)的序列：TSGMGIG(SEQIDNO:7)，HIWWDDDKRYNPALKS(SEQIDNO:8)，HYGYDPYYAMDY(SEQIDNO:9)，TASSSVSSSYLH(SEQIDNO:10)，RTSNLAS(SEQIDNO:11)，和HQYHRSPPT(SEQIDNO:12)。2.根据权利要求1的能够与人CLEVER-1结合的试剂，其中所述不连续表位进一步包含选自以下的一个或多个序列：ATQTGRVFLQ(SEQIDNO:3)，DSLRDGRLIYLF(SEQIDNO:4)，SKGRILTMANQVL(SEQIDNO:5)，和LCVYQKPGQAFCTCR(SEQIDNO:6)。3.根据权利要求1或2的能够与人CLEVER-1结合的试剂，其中所述试剂包含在权利要求1中定义的互补决定区(CDR)的至少两个、优选三个、更优选四个、还更优选五个以及最优选全部六个氨基酸序列。4.根据前述权利要求中任一项的能够与人CLEVER-1结合的试剂，其中所述试剂选自抗体、单链Fv或Fab片段、肽或具有足以与所述表位结合的亲和力的大分子。5.一种能够与人CLEVER-1的表位结合的人源化抗体或者单链Fv或Fab片段，其中所述表位为不连续的且包含序列：PFTVLVPSVSSFSSR(SEQIDNO:1)，和QEITVTFNQFTK(SEQIDNO:2)，所述抗体或者单链Fv或Fab片段包含a)人IgG4重链和κ轻链的恒定区，和b)一个或多个下列互补决定区(CDR)的序列i)重链的CDRCDR1：TSGMGIG(SEQIDNO:7)，和/或CDR2：HIWWDDDKRYNPALKS(SEQIDNO:8)，和/或CDR3：HYGYDPYYAMDY(SEQIDNO:9)；和ii)轻链的CDRCDR1：TASSSVSSSYLH(SEQIDNO:10)，和/或CDR2：RTSNLAS(SEQIDNO:11)，和/或CDR3：HQYHRSPPT(SEQIDNO:12)。6.能够与人CLEVER-1结合的根据权利要求5的人源化抗体或者单链Fv或Fab片段，其中所述不连续表位进一步包含选自以下的一个或多个序列：ATQTGRVFLQ(SEQIDNO:3)，DSLRDGRLIYLF(SEQIDNO:4)，SKGRILTMANQVL(SEQIDNO:5)，和LCVYQKPGQAFCTCR(SEQIDNO:6)。7.能够与人CLEVER-1结合的根据权利要求5或6的人源化抗体或者单链Fv或Fab片段，其中至少两个、优选三个、更优选四个、还更优选五个以及最优选全部六个在权利要求5中定义的CDR包含在所述人源化抗体或者单链Fv或Fab片段中。8.能够与人CLEVER-1结合的根据前述权利要求5-7中任一项的人源化抗体或者单链Fv或Fab片段，其中人IgG重链可变区序列选自SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18和SEQIDNO:20，优选SEQIDNO:16、SEQIDNO:18和SEQIDNO:20。9.能够与人CLEVER-1结合的根据前述权利要求5-8中任一项的人源化抗体或者单链Fv或Fab片段，其中人IgG轻链可变区序列选自SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28和SEQIDNO:30，优选SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：M马克西莫，M雅卡恩，M瓦伊尼奥，
申请(专利权)人：法龙药品公司，
类型：发明
国别省市：芬兰,FI